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大腸桿菌在生物技術(shù)中的應(yīng)用2023/05/17: 大腸桿菌作為外源基因表達(dá)的宿主,遺傳背景清楚,技術(shù)操作簡單,培養(yǎng)條件簡單,大規(guī)模發(fā)酵經(jīng)濟(jì),倍受遺傳工程專家的重視.目前大腸桿菌是應(yīng)用最guang泛,最成功的表達(dá)體系,常做高效表達(dá)的首shou選體系真核基因在大腸桿菌中表達(dá),必須有合適的表達(dá)載體(Vector),常用載體:pBV220,pET系統(tǒng)目的基因在大腸桿菌中表達(dá)的情況:大腸桿菌更適合原核基因的表達(dá),外源基因表達(dá)產(chǎn)量與單位體積產(chǎn)量是正相相關(guān)的,而單位體積產(chǎn)量與細(xì)胞濃度和每個細(xì)胞平均表達(dá)產(chǎn)量呈正相相關(guān).細(xì)胞濃度與生長速率,外源基因拷貝數(shù)和表達(dá)產(chǎn)

大腸桿菌菌株的分型與區(qū)別介紹2023/05/17: 1：DH5a菌株DH5a是一種常用于質(zhì)?？寺〉木辍.coliDH5a在使用pUC系列質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)化時(shí)，可與載體編碼的β－半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α－互補(bǔ)?？捎糜谒{(lán)白斑篩選鑒別重組菌株。基因型：F-，φ80dlacZΔM15，Δ(lacZYA-argF)U169，deoR，recA1，endA1，hsdR17(rk-，mk+)，phoA，supE44，λ-，thi-1，gyrA96，relA12：BL21(DE3)菌株該菌株用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達(dá)載體（如pET系列）的基因。T7

平板菌落計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)說明2023/05/17: 一、平板劃線分離法由接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。二、稀釋倒平板法先將待分離的材料用無菌水作一系列的稀釋（如1∶10、1∶100、1∶1000、1∶10000…），然后分別取不同稀釋液少許，與已溶化并冷卻至45℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培

營養(yǎng)瓊脂(NA)和平板計(jì)數(shù)瓊脂(PCA)有何區(qū)別2023/05/17: 根據(jù)培養(yǎng)基名稱來看,平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基即PCA,是在08版GB中用于菌落總數(shù)測定的,配方:胰蛋白胨0.5%,酵母浸粉0.25%,葡萄糖0.1%,瓊脂1.5%,蒸餾水配制;pH6.8~7.2。營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基即NA,配方:蛋白胨1%,牛肉膏0.3%,氯化鈉0.5%,瓊脂1.5%~2.0%,蒸餾水配制。pH7.2~7.4。兩者配方成分不一樣,名字也不一樣;但是都是可以用來做菌落總數(shù)的測定,所以說這兩者從用途的本質(zhì)上并沒有太大的區(qū)別。但是從實(shí)驗(yàn)結(jié)果來看,對于檢測結(jié)果,偶爾幾次試驗(yàn)兩者的區(qū)別不大。只是國際

粗提取植物DNA的實(shí)驗(yàn)步驟和原理2023/05/16: 提取植物DNA常用的方法是CTAB法。原理：CTAB是一種陽離子去污劑,具有從低離子強(qiáng)度溶液中沉淀核酸與酸性多聚糖的特性。在高離子強(qiáng)度的溶液中(0.7mol/LNaCl)，CTAB與蛋白質(zhì)和多聚糖形成復(fù)合物，只是不能沉淀核酸。通過有機(jī)溶劑抽提，去除蛋白，多糖，酚類等雜質(zhì)后加入乙醇沉淀即可使核酸分離出來。步驟如下：1）取材料，加液氮研磨成粉末狀，迅速移入1.5mlEppendorf管中；（2）加入800μl的CTAB提取緩沖液，混勻（CTAB在65℃水浴預(yù)熱），每5min輕輕震蕩幾次，20min后

簡述植物檢測試劑盒原理和使用方法2023/05/16: 植物檢測試劑盒原理、使用方法：植物檢測試劑盒使試樣中各組分電離生成不同荷質(zhì)比的離子，經(jīng)加速電場的效果，形成離子束，進(jìn)入質(zhì)量剖析器，利用電場和磁場使發(fā)作相反的速度色散——離子束中速度較慢的離子通過電場后偏轉(zhuǎn)大，速度快的偏轉(zhuǎn)?。辉诖艌鲋须x子發(fā)作角速度矢量相反的偏轉(zhuǎn)，即速度慢的離子仍然偏轉(zhuǎn)大，速度快的偏轉(zhuǎn)?。划?dāng)兩個場的偏轉(zhuǎn)效果互相補(bǔ)償時(shí)，它們的軌跡便相交于一點(diǎn)。與此同時(shí)，在磁場中還能發(fā)作質(zhì)量的別離，這樣就使具有同一質(zhì)荷比而速度不同的離子聚集在同一點(diǎn)上，不同質(zhì)荷比的離子聚集在不同的點(diǎn)上，將它們分別聚集而

印跡法(blotting)基本原理和應(yīng)用方法2023/05/16: 印跡法(blotting)即轉(zhuǎn)移電泳，是20世紀(jì)70年代發(fā)展起來的一種新方法。Southern于1975年建立了檢測特異DNA片段的DNA-RNA雜交法，稱作Southern印跡法。1977年Alwine等把此方法應(yīng)用到RNA的研究方面，稱作Nouthern印跡法。1979年Towbin等則把該方法擴(kuò)展應(yīng)用到蛋白質(zhì)分析方面，稱作Western印跡法。1982年Reinhart報(bào)道的雙向蛋白質(zhì)印跡法，稱作Eastern印跡法。目前，有人把Southern，Nouthern，Western印跡法分別

蛋白質(zhì)樣品中蛋白類雜質(zhì)的檢測方法介紹2023/05/16: 隨著蛋白類生物制品的發(fā)展，蛋白質(zhì)純度已經(jīng)成為藥品管理的重大問題。在生物制品的質(zhì)量指導(dǎo)原則中指出：除了評價(jià)原料藥和藥物產(chǎn)品的純度，可能由預(yù)期產(chǎn)品和多種產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)組成之外，還應(yīng)評價(jià)可能出現(xiàn)的雜質(zhì)成份。這些雜質(zhì)可能是在生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的或者是與產(chǎn)品相關(guān)，它們的結(jié)構(gòu)可能是已知的、定性的，亦或是未知的。在評價(jià)樣品純度之前，首先要鑒定待測雜質(zhì)的類型，如核酸、碳水化合物、脂質(zhì)、無關(guān)蛋白質(zhì)、同工酶類、失活蛋白質(zhì)，進(jìn)而確定在待測溶液中，能夠區(qū)分假定雜質(zhì)和目標(biāo)蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)(化學(xué)分析或物理特征)。純化過程中可能已

【解決方案】BCA法測蛋白濃度樣品不溶解怎么辦2023/05/15: BCA法測蛋白濃度時(shí),樣品不溶解時(shí)按照以下方法解決操作。BCA蛋白定量法是一種快速靈敏、穩(wěn)定可靠的蛋白定量測定方法，其測定范圍是10－2000ug/ml，是比Lowry法更*的專用于檢測總蛋白質(zhì)含量的產(chǎn)品。BCA蛋白定量測定方法：（96孔板）1、配制BCA工作液:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積試劑A，1體積試劑B配制適量BCA工作液，充分混勻。2、將蛋白標(biāo)準(zhǔn)品按0,1,2,4,6，8,10微升加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，加滅菌雙蒸水補(bǔ)足到10微升；取10微升待測樣品加入96孔板。每個測定要做

標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)平行測定的誤差范圍2023/05/15: 滴定誤差要求：以不確定度表示，≤±0.2%。滴定誤差分類：主要包括稱量誤差、量器誤差、方法誤差。（1）稱量誤差每次稱量誤差：±0.0001g，一份試樣稱量誤差±0.0002g。若相對誤差±0.1%，則每一份試樣的稱量至少為0.2g。（2）量器誤差滴定管讀數(shù)誤差：±0.01ml,一份試樣量取誤差±0.02ml。若相對誤差±0.1%，則每一份試樣體積量至少為±20ml（3）方法誤差：主要是終點(diǎn)誤差。其原因有：指示劑不能準(zhǔn)確地在化學(xué)計(jì)量點(diǎn)時(shí)改變顏色；標(biāo)準(zhǔn)溶液的加入不可能恰好在指示劑變色時(shí)結(jié)束；接近終點(diǎn)

標(biāo)準(zhǔn)溶液與基準(zhǔn)物質(zhì)有何關(guān)聯(lián)？2023/05/15: 先來認(rèn)識下標(biāo)準(zhǔn)溶液與基準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液：已知準(zhǔn)確濃度的溶液，在各種滴定分析方法中都要用到標(biāo)準(zhǔn)溶液，可根據(jù)溶質(zhì)的性質(zhì)、特點(diǎn)，按不同方法配置，配制方法有直接配置法和間接配置法?；鶞?zhǔn)物質(zhì)：能用來配制標(biāo)準(zhǔn)溶液或測定標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的物質(zhì)。應(yīng)具備如下條件：1、組成恒定并與化學(xué)式相符，若含結(jié)晶水，其結(jié)晶水的實(shí)際含量也應(yīng)與化學(xué)式嚴(yán)格相符。2、純度足夠高(達(dá)99.9%以上)，雜質(zhì)含量應(yīng)低于分析方法允許的誤差限。3、性質(zhì)穩(wěn)定，不易吸收空氣中的水分和二氧化碳，不分解，不易被空氣氧化。4、有較大的摩爾質(zhì)量，以減少稱量時(shí)的相

簡述標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的級別分類與作用2023/05/15: 我國將標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分為一級與二級，它們都符合“有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)”的定義。（1）一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是用絕對測量法或兩種以上不同原理的準(zhǔn)確可靠的方法定值，若只有一種定值方法可采取多個實(shí)驗(yàn)室合作定值。它的不確定度具有國內(nèi)最gao水平，均勻性良好，在不確定度范圍之內(nèi)，并且穩(wěn)定性在一年以上，具有符合標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范要求的包裝形式。一級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)由國務(wù)院計(jì)量行政部門批準(zhǔn)、頒布并授權(quán)生產(chǎn)，它的代號是以國jiaji標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的漢語拼音中“Guo”“Biao”“Wu”三個字的字頭“GBW”表示。（2）二級標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)二級標(biāo)

試驗(yàn)中滴定的操作方法與注意事項(xiàng)2023/05/12: 滴定的操作方法進(jìn)行滴定時(shí)，應(yīng)將滴定管垂直地夾在滴定管架上。如使用的是酸管，左手無名指和小手指向手心彎曲，輕輕地貼著出口管，用其余三指控制活塞的轉(zhuǎn)動。但應(yīng)注意不要向外拉活塞以免推出活塞造成漏水；也不要過分往里扣，以免造成活塞轉(zhuǎn)動困難，不能操作自如。如使用的是堿管，左手無名指及小手指夾住出口管，拇指與食指在玻璃珠所在部位往一旁（左右均可）捏乳膠管，使溶液從玻璃珠旁空隙處流出。注意：①不要用力捏玻璃珠，也不能使玻璃珠上下移動；②不要捏到玻璃珠下部的乳膠管；③停止滴定時(shí)，應(yīng)先松開拇指和食指，最后再松開無

影響酸堿中和滴定結(jié)果的因素說明2023/05/12: 影響酸堿中和滴定結(jié)果的因素：1、讀數(shù)：滴定前俯視或滴定后仰視（偏大）滴定前仰視或滴定后俯視（偏小）2、未用標(biāo)準(zhǔn)液潤洗滴定管（偏大）；未用待測溶液潤洗滴定管（偏?。?、用待測液潤洗錐形瓶（偏大）4、滴定前標(biāo)準(zhǔn)液滴定管尖嘴有氣泡，滴定后尖嘴氣泡消失（偏大）5、不小心將標(biāo)準(zhǔn)液滴在錐形瓶的外面（偏大）6、指示劑（可當(dāng)作弱酸）用量過多（偏大），當(dāng)弱酸，說明是酚酞做指示劑，堿滴定酸，相當(dāng)于消耗更多的堿，所以結(jié)果偏大。指示劑（可當(dāng)作弱堿）用量過多（偏大），當(dāng)弱堿，說明是甲基橙做指示劑，酸滴定堿，相當(dāng)于消耗更多

影響酸堿指示劑的原因分析2023/05/12: 在實(shí)際中，影響酸堿指示劑變色范圍的因素主要有兩方面：一種是影響指示劑常數(shù)KHln的因素，包括溫度、溶劑、溶液的離子強(qiáng)度等，其中溫度的影響較大。另一種是影響變色范圍寬度的因素，如指示劑用量、滴定程序等，現(xiàn)具體討論如下。1．溫度溫度改變時(shí)，指示劑常數(shù)KHln及水的離子積KW均有改變，因此指示劑的變色范圍也隨之發(fā)生改變。例如，18℃時(shí)，甲基橙的變色范圍為3.1～4.4，而100℃時(shí)，變?yōu)?.5～3.7。因此，滴定宜在室溫下進(jìn)行。如必須加熱，應(yīng)該將溶液冷卻后再進(jìn)行滴定。2．溶劑指示劑在不同溶劑中其pKH

酸堿指示劑的自制方法分享2023/05/12: 有許多植物色素在不同pH值的溶液里會呈現(xiàn)出不同的顏色。因此，每個地方都可以就地取材，自制一些酸堿指示劑。下面遠(yuǎn)慕生物介紹一些自制的方法：1.從紅蘿卜皮中提取酸堿指示劑：刮下紅蘿卜的紅皮后，用95%的酒精浸泡一天左右，過濾取出它的濾液即酸堿指示劑。按檢驗(yàn)的需要制作pH1～14的標(biāo)準(zhǔn)液若干個，每個標(biāo)準(zhǔn)液取10ml分置于試管中，再分別加入紅蘿卜皮浸泡液10滴，塞緊作為比色樣品。在某待測溶液中加入紅蘿卜浸泡液，顏色發(fā)生變化后再與比色樣品比較，就能確定待測溶液pH值的大致范圍。2.從紫草中提取酸堿指示劑：

不同動物細(xì)胞融合的特點(diǎn)和誘導(dǎo)因素2023/05/11: 不同動物細(xì)胞融合的特點(diǎn)和誘導(dǎo)因素1、病毒誘導(dǎo)融合病毒是最早采用的融合劑。常用于誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的病毒有仙臺病毒、新城雞瘟病毒、皰疹病毒等，其中仙臺病毒最常chang用。用作融合劑的病毒必須事先用紫外線或β-丙內(nèi)酯滅活，使病毒的感染活性喪失而保留病毒的融合活性。優(yōu)點(diǎn)：融合率較高，對各種動物細(xì)胞都適宜，且仙臺病毒能在雞胚中大量繁殖，容易培養(yǎng)；缺點(diǎn)：仙臺病毒不穩(wěn)定，在保存過程中融合活性會降低，并且制備過程比較煩瑣。此外，病毒引進(jìn)細(xì)胞后，可能會對細(xì)胞的生命活動產(chǎn)生干擾。2、聚乙二醇（PEG）誘導(dǎo)融合聚乙

昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展和關(guān)鍵點(diǎn)介紹2023/05/11: 隨著生命科學(xué)的迅速發(fā)展，細(xì)胞工程愈來愈受到人們的重視。以昆蟲細(xì)胞為對象的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)生物學(xué)上具有重要的價(jià)值,已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)及生物學(xué)的各個領(lǐng)域。昆蟲細(xì)胞是農(nóng)業(yè)生物應(yīng)用方面的高新技術(shù)，主要是提取來自昆蟲的一類真核細(xì)胞。通過培養(yǎng)制造宿主的病毒，這些病毒可以引起昆蟲流行病，但對人畜和植物無害，因而可作病毒殺蟲劑。還可以生產(chǎn)某些藥用蛋白。許多昆蟲培養(yǎng)基配方正不斷得到改進(jìn),以使之適于細(xì)胞生長。zui通用的商品培養(yǎng)基有Grace氏培養(yǎng)基、TC-100、IPL-41、TNM-FH以及經(jīng)改良

遠(yuǎn)慕解析：細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中常見問題2023/05/11: 細(xì)胞轉(zhuǎn)染常見問題一、轉(zhuǎn)染效率低影響轉(zhuǎn)染效率因素很多，主要因素有細(xì)胞培養(yǎng)物、血清、載體構(gòu)建、DNA質(zhì)量以及轉(zhuǎn)染技術(shù)等。1.沒有使用優(yōu)化條件：優(yōu)化陽離子脂質(zhì)體試劑和DNA的量。2.DNA-陽離子脂質(zhì)體試劑復(fù)合物在存在血清條件下形成。3.存在抑制劑：不要在用于制備DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物的培養(yǎng)基中使用抗生素，EDTA，檸檬酸鹽，磷酸鹽，RPMI，硫酸軟骨素。透明質(zhì)酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。4.不恰當(dāng)?shù)募?xì)胞密度：轉(zhuǎn)染時(shí)融合度應(yīng)為70%-90%。5.陽離子脂質(zhì)體試劑凍結(jié)：不要使用凍結(jié)的或儲存溫度

原代細(xì)胞不貼壁的原因與解決辦法2023/05/11: 大多數(shù)原代貼壁細(xì)胞貼壁時(shí)間是6h到12h，細(xì)胞不貼壁有好多種原因的：1、如果你用玻璃培養(yǎng)瓶培養(yǎng)的話，有可能你的瓶子沒處理好；建議你用一次性培養(yǎng)瓶，進(jìn)口的都可以。2、一般做原代細(xì)胞貼壁培養(yǎng)用胰酶消化，消化的程度要掌握好，如果消化時(shí)間不到、分散不均勻不貼壁。一般消化有熱消化，就是放在37度里消化，時(shí)間比較短不好控制，傳代培養(yǎng)常用。還有就是冷消化放在4度里，一般在幾個小時(shí)以上，胰酶濃度也有要求的，一般都用0.125－0.25％之間。ph在7.6左右。3、還有就是天然培養(yǎng)基的選擇，就是血清種類，血清能夠

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