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蛋白質(zhì)樣品中蛋白類雜質(zhì)的檢測(cè)方法2022/07/18: 本文圍繞蛋白質(zhì)純度的重要性，闡述了蛋白類雜質(zhì)的檢測(cè)方法，包括電泳法，色譜法，沉降速率測(cè)定法，質(zhì)譜法，光散射法。任何方法都不能直接定量蛋白質(zhì)樣品的純度。無論最終目的是為了解釋分析數(shù)據(jù)、驗(yàn)證過程質(zhì)量，還是為了確保生物制劑產(chǎn)品的安全性，樣品純度的測(cè)定都是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。隨著蛋白類生物制品的發(fā)展，蛋白質(zhì)純度已經(jīng)成為藥品管理的重大問題。在生物制品的質(zhì)量指導(dǎo)原則中指出：除了評(píng)價(jià)原料藥和藥物產(chǎn)品的純度，可能由預(yù)期產(chǎn)品和多種產(chǎn)品相關(guān)物質(zhì)組成之外，還應(yīng)評(píng)價(jià)可能出現(xiàn)的雜質(zhì)成份。這些雜質(zhì)可能是在生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的或者是

藥物雜質(zhì)澄清度檢查原理及注意事項(xiàng)2022/07/18: 澄清度測(cè)定是檢查藥品溶液中的不溶性雜質(zhì),一定程度上可反映藥品的質(zhì)量和生產(chǎn)工藝水平,對(duì)于注射用原料藥,檢查其溶液的澄清度,有較為重要的意義。?一、檢查原理利用硫酸肼與烏洛托品(六次甲基四胺)反應(yīng)制備濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液,其反應(yīng)原理是烏洛托品在偏酸性條件下水解產(chǎn)生甲醛,甲醛與肼縮合生成甲醛腙,不溶于水,形成白色渾濁。然后將濁度標(biāo)準(zhǔn)貯備液按規(guī)定稀釋制成濁度標(biāo)準(zhǔn)液,再與供試品比較,供試品濁度不得超過濁度標(biāo)準(zhǔn)液。二、操作方法在室溫條件下,將用水稀釋至一定濃度的供試品溶液與等量的濁度標(biāo)準(zhǔn)液分別置于配對(duì)的比濁用玻璃

雜質(zhì)分析的基本思路和步驟2022/07/18: 雜質(zhì)分析的基本思路和步驟如下:1)產(chǎn)生來源分析起始物料和原料中可能存在的雜質(zhì)分析,包括異構(gòu)體雜質(zhì)。因?yàn)槠鹗嘉锪虾驮现械碾s質(zhì)與原料結(jié)構(gòu)類似,來源一致、可能共同參與反應(yīng),最后殘留在目標(biāo)產(chǎn)物中。這部分的分析,可以從起始物料和原料的生產(chǎn)過程(來源于供應(yīng)商的信息)、起始物料的原料的理化性質(zhì)、文獻(xiàn)報(bào)道方面進(jìn)行了解與分析。反應(yīng)副產(chǎn)物分析。包括主原料潛在的副反應(yīng)、原料中的雜質(zhì)參與反應(yīng)的副產(chǎn)物等。這部分的分析,可以從化學(xué)反應(yīng)原理和相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道進(jìn)行了解與分析。降解產(chǎn)物分析。包括原料、中間體和產(chǎn)物、溶劑(回收溶劑)

去泛素化酶(DUB)的5大分類詳解2022/07/15: 泛素一蛋白酶體途徑（ubiquitin-proteasomepathway）是細(xì)胞內(nèi)一個(gè)重要的蛋白質(zhì)降解調(diào)節(jié)系統(tǒng)。通過對(duì)底物蛋白的多聚泛素化并經(jīng)蛋白酶體降解，可以影響或調(diào)節(jié)多種細(xì)胞活動(dòng)，包括：基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)、免疫反應(yīng)、細(xì)胞受體功能及腫瘤生長(zhǎng)、炎癥過程等。該途徑也是一種動(dòng)態(tài)的蛋白質(zhì)雙向修飾調(diào)控系統(tǒng)，在體內(nèi)由泛素連接酶系統(tǒng)（E1-E2-E3）對(duì)底物進(jìn)行泛素化修飾，去泛素化酶（DUB）家族負(fù)責(zé)通過水解泛素羧基末端的酯鍵、肽鍵或異肽鍵，將泛素分子特異性的從鏈接有泛素的蛋白質(zhì)或者前體蛋白水解下來，

熒光素酶的種類以及應(yīng)用2022/07/15: 在細(xì)胞和基因的微觀世界中研究探索，遺傳報(bào)告基因是非常有用的"可視化和量化"工具，具有廣泛的應(yīng)用。熒光素酶（螢光素酶）以出色的靈敏度、使用方便、可以定量檢測(cè)而成為理想的報(bào)告基因。熒光素酶不是特定的分子，是一類中能催化產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱，不同來源的熒光素酶各有特點(diǎn)，可催化底物發(fā)出不同顏色的光，有的還可以配合進(jìn)行雙色發(fā)光檢測(cè)。這種酶最早的來源，也是很有代表性一種來自學(xué)名為Photinuspyrali'的北美螢火蟲體內(nèi)的螢光素酶，之所以稱為螢光素酶，一方面也有助于區(qū)分需要激發(fā)光源才可以生成激發(fā)熒光的

乙醇沉淀蛋白質(zhì)原理和操作2022/07/15: 鹽析法——多用于各種蛋白質(zhì)和酶的分離純化在蛋白質(zhì)溶液中加入大量的中性鹽以破壞蛋白質(zhì)的膠體穩(wěn)定性而使其析出,這種方法稱為鹽析.常用的中性鹽有硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等.各種蛋白質(zhì)鹽析時(shí)所需的鹽濃度及pH不同,故可用于對(duì)混和蛋白質(zhì)組分的分離.例如用半飽和的硫酸銨來沉淀出血清中的球蛋白,飽和硫酸銨可以使血清中的白蛋白、球蛋白都沉淀出來,鹽析沉淀的蛋白質(zhì),經(jīng)透析除鹽,仍保證蛋白質(zhì)的活性.調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)溶液的pH至等電點(diǎn)后,再用鹽析法則蛋白質(zhì)沉淀的效果更好.鹽析法分為兩類,第一類叫Ks分段鹽析法,在一定PH和溫

遠(yuǎn)慕實(shí)驗(yàn)：有機(jī)溶劑沉淀蛋白質(zhì)的現(xiàn)象與原因2022/07/15: 1)蛋白質(zhì)沉淀原因：加入高濃度的中性鹽、加入有機(jī)溶劑、加入重金屬、加入生物堿或酸類、熱變性少量的鹽（如硫酸銨、硫酸鈉等）能促進(jìn)蛋白質(zhì)的溶解。如果向蛋白質(zhì)水溶液中加入濃的無機(jī)鹽溶液，可使蛋白質(zhì)的溶解度降低，而從溶液中析出，這種作用叫做鹽析．這樣鹽析出的蛋白質(zhì)仍舊可以溶解在水中，而不影響原來蛋白質(zhì)的性質(zhì)，因此鹽析是個(gè)可逆過程．利用這個(gè)性質(zhì)，采用分段鹽析方法可以分離提純蛋白質(zhì)．2)蛋白質(zhì)的變性在熱、酸、堿、重金屬鹽、紫外線等作作用下，蛋白質(zhì)會(huì)發(fā)生性質(zhì)上的改變而凝結(jié)起來．這種凝結(jié)是不可逆的，不能再使它們

遠(yuǎn)慕教您純化凝膠選擇的具體方法2022/07/14: 生物分子下游純化的對(duì)象一般包括蛋白、酶、重組蛋白、單抗、抗體及抗原、肽類、病毒、核酸等。純化前首先需要測(cè)定生物分子的各物理和化學(xué)特性，然后通過實(shí)驗(yàn)選擇出最/有效的純化流程。1.測(cè)定——分子量、PI當(dāng)目標(biāo)蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚時(shí)，可用PAGE電泳方法或?qū)游龇椒右詼y(cè)定。分離范圍廣闊的SuperoseHR預(yù)裝柱很適合測(cè)定未知蛋白的分子量。用少量離子交換介質(zhì)在多個(gè)含不同PH緩沖液的試管中，可簡(jiǎn)易地測(cè)出PI，并選擇純化用緩沖液的最佳PH。2.選擇——層析方法若對(duì)目標(biāo)蛋白的特性或樣品成分不

凝膠過濾(gel filtration,GF)實(shí)驗(yàn)方法2022/07/14: 1.凝膠的選擇根據(jù)層析物質(zhì)分子量的大小選擇不同型號(hào)的凝膠，如除鹽和除游離的熒光素，則可選用粗、中粒度的G25或G50，G250多用于分離蛋白質(zhì)單體，G200多用于分離蛋白質(zhì)凝膠聚合體等。2.凝膠的預(yù)處理稱取適量的凝膠加入過量的緩沖液在冰箱（或室溫）中充分膨脹，或在沸水中煮，膨脹時(shí)間應(yīng)根據(jù)不同型號(hào)的凝膠而定。凝膠量與型號(hào)和層析柱大小與規(guī)格及凝膠用量層析柱規(guī)格凝膠的規(guī)格和用量（g）直徑（cm）高（cm）容量（ml）G25G50G100G2000.9159.52.510.60.30.93019521.

血紅蛋白(Hemoglobin Hb)凝膠柱層析實(shí)驗(yàn)與應(yīng)用2022/07/14: 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解凝膠柱層析的原理及應(yīng)用；2.掌握凝膠柱層析的基本操作技術(shù)，為進(jìn)一步掌握離子交換柱層析、親和層析及吸附層析等其它分離方法打下良好的基礎(chǔ)。二、實(shí)驗(yàn)原理凝膠層析：原理與應(yīng)用凝膠層析又稱凝凝膠過濾，是一種按分子量大小分離物質(zhì)的層析方法。該方法是把樣品加到充滿著凝膠顆粒的層析柱中，然后用緩沖液洗脫。大分子無法進(jìn)入凝膠顆粒中的靜止相中，只能存在于凝膠顆粒之間的流動(dòng)相中，因而以較快的速度首先流出層析柱，而小分子則能自由出入凝膠顆粒中，并很快在流動(dòng)相和靜止相之間形成動(dòng)態(tài)平衡，因此就要花費(fèi)較長(zhǎng)

葡聚糖凝膠層析（分子排阻層析或凝膠過濾）實(shí)驗(yàn)原理2022/07/14: 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?.掌握葡聚糖凝膠的特性及凝膠層析的原理。2．學(xué)習(xí)葡聚糖凝膠層析的基本操作技術(shù)?！緦?shí)驗(yàn)原理】凝膠層析又稱分子排阻層析或凝膠過濾，是以被分離物質(zhì)的分子量差異為基礎(chǔ)的一種層析分離技術(shù)，這一技術(shù)為純化蛋白質(zhì)等生物大分子提供了一種非常溫和的分離方法。層析的固定相載體是凝膠顆粒，目前應(yīng)用較廣的是：具有各種孔徑范圍的葡聚糖凝膠（Sephadex）和瓊脂糖凝膠（Sepharose）。葡聚糖凝膠是由直鏈的葡聚糖分子和交聯(lián)劑3—氯1，2—環(huán)氧丙烷交聯(lián)而成的具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。凝膠顆粒中網(wǎng)孔

微生物實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)基類型介紹2022/07/13: 在實(shí)驗(yàn)室中配制的適合微生物生長(zhǎng)繁殖或累積代謝產(chǎn)物的任何營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，都叫做培養(yǎng)基(Media)。由于各類微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測(cè)需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多。我們可根據(jù)某種標(biāo)準(zhǔn)，將種類繁多的培養(yǎng)基劃分為若干類型。1、根據(jù)對(duì)培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否*了解來區(qū)分，可以將培養(yǎng)基分為天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。１）天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指利用各種動(dòng)、植物或微生物的原料，其成分難以確切知道。用作這種培養(yǎng)基的主要原料有：牛肉膏、麥芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麩皮、各種餅粉、馬鈴薯

如何區(qū)別熒光，磷光，瑞利光和拉曼光2022/07/13: 熒光：是某些物質(zhì)吸收一定的紫外光或可見光后，基態(tài)分子躍遷到激發(fā)單線態(tài)的各個(gè)不同能級(jí)，然后經(jīng)過振動(dòng)弛豫回到第一激發(fā)態(tài)的最/低振動(dòng)能級(jí)，在發(fā)射光子后，分子躍遷回基態(tài)的各個(gè)不同振動(dòng)能級(jí)。這時(shí)分子發(fā)射的光稱為熒光。熒光的波長(zhǎng)比原來照射的紫外光的波長(zhǎng)更長(zhǎng)。磷光：是有些物質(zhì)的激發(fā)分子通過振動(dòng)弛豫下降到第一激發(fā)態(tài)的最/低振動(dòng)能層后，經(jīng)過體系間跨越至激發(fā)三重態(tài)的高振動(dòng)能層上，再通過振動(dòng)弛豫降至三重態(tài)的最/低振動(dòng)能層，然后發(fā)出光輻射躍遷至基態(tài)的各個(gè)振動(dòng)能層.這種光輻射稱為磷光。磷光的波長(zhǎng)比熒光更長(zhǎng)。瑞利光：光子和

試驗(yàn)中培養(yǎng)基的融化方法2022/07/13: 將培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用有相同效果的方法使之融化。經(jīng)過高壓的培養(yǎng)基應(yīng)盡量減少重新加熱時(shí)間，融化后避免過度加熱。融化后應(yīng)短暫置于室溫中以避免玻璃瓶破碎。融化后的培養(yǎng)基放入47℃～50℃的恒溫水浴鍋中冷卻保溫，直至使用。融化后的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用，放置時(shí)間一般不應(yīng)超過4h。未用完的培養(yǎng)基不能重新凝固留待下次使用。敏感的培養(yǎng)基尤應(yīng)注意，融化后保溫時(shí)間應(yīng)盡量縮短，如有特定要求可參考指/定的標(biāo)準(zhǔn)。傾注到樣品中的培養(yǎng)基溫度應(yīng)控制在約45℃左右。一般產(chǎn)品在受熱、吸潮后，易被細(xì)菌污染或分解變質(zhì)，因此一般情況必須

什么是天然培養(yǎng)基？天然培養(yǎng)基有哪些2022/07/13: 天然培養(yǎng)基是指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、淋巴液、雞胚浸出液等。組織培養(yǎng)技術(shù)建立早期，體外培養(yǎng)細(xì)胞都是利用天然培養(yǎng)基。但是由于天然培養(yǎng)基制作過程復(fù)雜、批間差異大，因此逐漸為合成培養(yǎng)基所替代。廣泛使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必/不可少。血清種類目用于組織培養(yǎng)的血清主要是牛血清，培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因：來源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過長(zhǎng)時(shí)間的應(yīng)用考驗(yàn)人們對(duì)其有比較深入的理

蛋白質(zhì)的表達(dá)、分離、純化實(shí)驗(yàn)2022/07/12: 基因重組—層析法實(shí)驗(yàn)方法原理攜帶有目標(biāo)蛋白基因的質(zhì)粒在大腸桿菌BL21中，在37℃，IPTG誘導(dǎo)下，超量表達(dá)攜帶有6個(gè)連續(xù)組氨酸殘基的重組氯霉素?；D(zhuǎn)移酶蛋白，該蛋白可用一種通過共價(jià)偶連的次氨基三乙酸（NTA）使鎳離子（Ni2+）固相化的層析介質(zhì)加以提純，實(shí)為金屬熬合親和層析（MCAC）。蛋白質(zhì)的純化程度可通過聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行分析。實(shí)驗(yàn)材料大腸桿菌BL21試劑、試劑盒LB液體培養(yǎng)基氨芐青霉素WashingBufferElutionBufferIPTG蒸餾水胰蛋白胨酵母粉氯化鈉儀器、耗材搖床

蛋白質(zhì)測(cè)序?qū)嶒?yàn)方法一覽2022/07/12: Edman降解法實(shí)驗(yàn)方法原理主要有質(zhì)譜法，利用蛋白質(zhì)測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序以及利用蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)DNA或mRNA進(jìn)行間接測(cè)序。傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)測(cè)序?qū)嶒?yàn)一般包括以下步驟：1.肽鏈的拆開和分離；2.測(cè)定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目；3.二硫鍵的斷裂；4.測(cè)定每條多肽鏈的氨基酸組成，并計(jì)算出氨基酸成分的分子比；5.N端、C端的測(cè)定；6.多肽鏈斷裂；7.測(cè)定每個(gè)肽段的氨基酸順序；8.確定肽段在多肽鏈中的次序；9.確定原多肽鏈中二硫鍵的位置。實(shí)驗(yàn)材料蛋白質(zhì)樣品試劑、試劑盒尿素鹽酸胍?guī)€基乙醇儀器、耗材蛋白質(zhì)測(cè)序儀實(shí)驗(yàn)步驟1多肽

做實(shí)驗(yàn)牛血清白蛋白種類怎么選擇2022/07/12: 牛血清白蛋白(BSA)產(chǎn)品種類繁多，可滿足不同種的應(yīng)用。但是該怎么選擇呢，下面讓遠(yuǎn)慕生物帶您一起解決這個(gè)難題吧！目前BSA大致分為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)BSA、BSA第五組分、無IgG試劑級(jí)BSA、無蛋白酶BSA、無脂肪酸BSA、低內(nèi)毒素BSA、無蛋白酶/IgGBSA、診斷級(jí)BSA。我們一起來看一下他們的區(qū)別：標(biāo)準(zhǔn)級(jí)BSA經(jīng)熱處理的普通BSA產(chǎn)品，可作為組織細(xì)胞（微生物、動(dòng)物及昆蟲細(xì)胞等）培養(yǎng)養(yǎng)料和培養(yǎng)成分以及蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)組份，為性價(jià)比較高的BSA產(chǎn)品。BSA第五組分BSA第五組分較普通的BSA純度更高。BS

鹽析法分析測(cè)定血清白蛋白和球蛋白試驗(yàn)方法2022/07/12: 目的與原理掌握血清白蛋白和球蛋白測(cè)定的原理和方法，并用鹽析法測(cè)定水產(chǎn)動(dòng)物血清中白蛋白和球蛋白的含量。血清中含有多種不同成分的蛋白質(zhì)，主要為白蛋白和球蛋白。用鹽析法沉淀血清中球蛋白，用雙縮脲法測(cè)定上清液中白蛋白，同時(shí)測(cè)定血清總蛋白。血清球蛋白的量從兩者的差值求得。[試劑與器材]試劑：1、球蛋白沉淀劑：稱取硫酸鈉（Na2SO4）208g，及亞硫酸鈉（Na2SO3）70g，加入蒸餾水約900ml，并加入濃硫酸2ml，使蒸餾水酸化。不停攪拌，待*溶解后將溶液移入1L容量瓶?jī)?nèi)，用蒸餾水稀釋至1L刻度。保存

蛋白質(zhì)形成凝膠的兩種類型和機(jī)理2022/07/11: 蛋白質(zhì)凝膠的形成可以定義為蛋白質(zhì)分子的聚集現(xiàn)象，在這種聚集過程中，吸引力和排斥力處于平衡，以至于形成能保持大量水分的高度有序的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)或基體。如果吸引力占主導(dǎo)，則形成凝結(jié)物，水分從凝膠基體排除出來。如果排斥力占主導(dǎo)，便難以形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)凝膠的類型主要決定于蛋白質(zhì)分子的形狀。由于凝膠過程是一個(gè)動(dòng)態(tài)過程，也受外界環(huán)境的pH、離子強(qiáng)度及加熱的溫度和時(shí)間的影響。纖維狀蛋白質(zhì)分子，如明膠和肌漿球蛋白凝膠的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)由隨機(jī)的或螺旋結(jié)構(gòu)的多肽鏈組成。明膠的凝膠網(wǎng)絡(luò)為線性分子通過形成連接區(qū)而形成凝膠網(wǎng)絡(luò)

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