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標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用中的常見問題2022/08/01: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)使用中的常見問題標(biāo)準(zhǔn)樣品(RM)是一種或多種特性值已經(jīng)很好地被確定的足夠均勻的材料或物質(zhì)，有證標(biāo)準(zhǔn)樣品(CRM)是附有證書的標(biāo)準(zhǔn)樣品，其一種或多種特性值用建立了溯源性的程序確定，使之可溯源到準(zhǔn)確實(shí)現(xiàn)用于表示該特性值的計(jì)量單位，而且每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)值都附有給定置信水平的不確定度。在化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)室中標(biāo)準(zhǔn)樣品被廣泛用于校準(zhǔn)儀器、評(píng)價(jià)測(cè)試方法或?yàn)椴牧腺x值，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的正確使用和規(guī)范管理對(duì)保證分析結(jié)果的準(zhǔn)確性、溯源性有重要意義。1.有證書(certificate)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)就是有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(CRM)嗎?回答

遠(yuǎn)慕分享：96孔板接種細(xì)胞步驟2022/07/29: 為了做實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞鋪勻是常見的一種。然而，有許多人不是很成功，分布也不均勻:要么中間密集，周圍稀疏，要么周圍密集，中間禿頂。以下是利用96孔板把細(xì)胞鋪勻，希望對(duì)大家有用!方法/步驟1、通常，在96孔板的每個(gè)孔中加入100微升細(xì)胞懸浮液。從底部附近的井的左側(cè)添加細(xì)胞懸浮液。加入一半平板后，混合細(xì)胞懸液，不要再加入，繼續(xù)加入剩余的一半平板。添加完所有板后，蓋上板，用左手輕輕握住板的左側(cè)，用右手輕輕輕敲板的右邊緣，注意抓力(我通常輕敲三次)。如果它太強(qiáng)或太多次，細(xì)胞就會(huì)被濃縮和堆積。順時(shí)針旋轉(zhuǎn)盤子(逆時(shí)

淺談掃描電鏡的樣品制備方法2022/07/29: 掃描電子顯微鏡樣品制備比透射電鏡樣品制備簡(jiǎn)單，不需要包埋和切片。掃描電子顯微鏡樣品的制備，必須滿足以下要求：①保持完好的組織和細(xì)胞形態(tài)；③充分暴露要觀察的部位；③良好的導(dǎo)電性和較高的二次電子產(chǎn)額；④保持充分干燥的狀態(tài)。某些含水量低且不易變形的生物材料，可以不經(jīng)固定和干燥而在較低加速電壓下直接觀察，如動(dòng)物毛發(fā)、昆蟲、植物種子、花粉等，但圖象質(zhì)量差，而且觀察和拍攝照片時(shí)須盡可能迅速。對(duì)大多數(shù)的生物材料，則應(yīng)首先采用化學(xué)或物理方法固定、脫水和干燥，然后噴鍍碳與金屬以提高材料的導(dǎo)電性和二次電子產(chǎn)額?；瘜W(xué)

遠(yuǎn)慕教你快速了解制備型液相色譜2022/07/29: 1）低壓液相色譜；（2）中壓液相色譜；（3）高壓液相色譜；（4）快速色譜。低壓、中壓與高壓液相色譜的壓力范圍之間會(huì)存在一定交疊，沒有統(tǒng)一、明確的標(biāo)準(zhǔn)。1.快速色譜柱壓通常為2bar（或30psi）左右，對(duì)于那些容易分離的簡(jiǎn)單混合物，由于快速色譜具有操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，常常是實(shí)驗(yàn)室的。但快速色譜不同于一般的層析分離，這種分離沒有壓力，而快速分離通常使用瓶裝氮?dú)饧訅?，使流?dòng)相具有一定的流速，從而縮短了分離時(shí)間?？焖偕V使用的柱子一般是玻璃柱，柱直徑為3～10cm．長(zhǎng)度為7～15cm。快速色譜中使用

血涂片制備注意事項(xiàng)一覽2022/07/29: 血涂片的制備步驟:（1）采血靜脈采血后，使用玻璃棒、毛細(xì)管、注射針頭等在距載玻片一端1cm處加1滴抗凝血。（2）推片左手平執(zhí)載玻片，或放在類似桌子等平坦地方，右手持推片從前方接近血滴，使血液沿推片邊緣展開成適當(dāng)?shù)膶挾?，立即將推片與載玻片呈30~45°角，輕壓推片邊緣將血液推制成厚薄適宜的血涂片，血涂片應(yīng)呈舌狀，頭、體、尾清晰可見。（3）干燥將推好的血涂片在空氣中晃動(dòng)，使其迅速干燥。天氣寒冷或潮濕時(shí)，應(yīng)于37℃溫箱中保溫促干，以免細(xì)胞變形縮小。（4）標(biāo)記在載玻片的一端用記號(hào)筆編號(hào)。（5）染色用特種

幾種蛋白表達(dá)系統(tǒng)優(yōu)缺點(diǎn)分析2022/07/28: 蛋白表達(dá)是指用模式生物如細(xì)菌、酵母、動(dòng)物細(xì)胞或者植物細(xì)胞表達(dá)外源基因蛋白的一種分子生物學(xué)技術(shù)。蛋白表達(dá)系統(tǒng)是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系，通過這個(gè)體系可以實(shí)現(xiàn)外源基因在宿主中表達(dá)的目的。1、宿主。表達(dá)蛋白的生物體?？梢詾榧?xì)菌、酵母、植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞等。由于各種生物的特性不同，適合表達(dá)蛋白的種類也不相同。2、載體。載體的種類與宿主相匹配。根據(jù)宿主不同，分為原核（細(xì)菌）表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、植物表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體、昆蟲表達(dá)載體等。載體中含有外源基因片段。通過載體介導(dǎo)，外源

RNA提取的常見問題分析2022/07/28: RNA的提?。簻?zhǔn)備試劑：lu仿，yi丙醇，75℅乙醇，無RNase的水或0.5℅SDS(溶液均需用DEPC處理過的水配制)操作步驟:1.勻漿處理:a.組織將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1mlTRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。b.單層培養(yǎng)細(xì)胞直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的

糖原的合成與分解途徑有哪些？2022/07/28: 糖原是由多個(gè)葡萄糖組成的帶分枝的大分子多糖，分子量一般在106-107道爾頓，可高達(dá)108道爾頓，是體內(nèi)糖的貯存形式，分子中葡萄糖主要以α-1，4-糖苷鍵相連形成直鏈，其中部分以α-1，6-糖苷鍵相連構(gòu)成枝鏈，糖原主要貯存在肌肉和肝臟中，肌肉中糖原約占肌肉總重量的1-2%約為400克，肝臟中糖原占總量6-8%約為100克。肌糖原分解為肌肉自身收縮供給能量，肝糖原分解主要維持血糖濃度。糖原的合成由葡萄糖(包括少量果糖和半乳糖)合成糖原的過程稱為糖原合成，反應(yīng)在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行，需要消耗ATP和UTP，

蛋白磷酸化檢測(cè)需要注意的事項(xiàng)2022/07/28: 1、樣本準(zhǔn)備過程中防止蛋白質(zhì)降解和保留翻譯后修飾樣本準(zhǔn)備過程中，細(xì)胞會(huì)釋放蛋白酶和/或去磷酸化酶，為了減少這些酶的活性，處理樣本的過程應(yīng)在冰上進(jìn)行，并預(yù)先冷卻所有緩沖液，并且建議用含蛋白酶和磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液。2、磷酸化特異性抗體的選擇選擇磷酸化特異性抗體時(shí)，選擇所要檢測(cè)位點(diǎn)的磷酸化抗體至關(guān)重要。磷酸化都會(huì)使蛋白質(zhì)的分子量增加80Da，檢查抗體是否檢測(cè)到磷酸化靶蛋白的分子量正確的條帶也很重要。3、誘導(dǎo)磷酸化課題設(shè)計(jì)可能需要在收獲前刺激細(xì)胞，以確保蛋白質(zhì)被磷酸化。例如，在特定細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)途徑

如何查看抗體是磷酸化還是非磷酸化2022/07/28: 什么是磷酸化磷酸化是將磷酸基團(tuán)加在中間代謝產(chǎn)物上或加在蛋白質(zhì)（protein）上的過程。其中除去磷酸基團(tuán)的酶稱為磷酸酶。蛋白質(zhì)磷酸化可發(fā)生在許多種類的氨基酸（蛋白質(zhì)的主要單位）上，其中以絲氨/酸為多，接著是蘇氨/酸。除了蛋白質(zhì)以外，部分核苷酸，如三磷酸腺苷（ATP）或三磷酸鳥苷（GTP）的形成，也是經(jīng)由二磷酸腺苷和二磷酸鳥苷的磷酸化而來，此過程稱為氧化磷酸化。另外在許多糖類的生化反應(yīng)中（如糖解作用），也有一些步驟存在氧化磷酸化作用。信號(hào)傳導(dǎo)中的作用：（1）細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)蛋白主要分為兩大類：一類在蛋

胰蛋白酶在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用一覽2022/07/27: 胰蛋白酶的作用是使細(xì)胞間的蛋白質(zhì)水解從而使細(xì)胞離散。不同的組織或者細(xì)胞對(duì)胰酶的作用反應(yīng)不一樣。胰酶分散細(xì)胞的活性還與其濃度、溫度和作用時(shí)間有關(guān)，在pH為8.0、溫度為37℃時(shí)，胰酶溶液的作用能力最/強(qiáng)。使用胰酶時(shí)，應(yīng)把握好濃度、溫度和時(shí)間，以免消化過度造成細(xì)胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質(zhì)可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時(shí)應(yīng)選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。終止消化時(shí)，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對(duì)細(xì)胞的作用。1.稱取胰蛋白酶：按胰蛋白酶液濃度為0

遠(yuǎn)慕分享生物實(shí)驗(yàn)中常用電泳方法2022/07/27: 一、紙電泳指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是最早使用的區(qū)帶電泳。將濾紙條水平地架設(shè)在兩個(gè)裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點(diǎn)于濾紙中央。當(dāng)濾紙條被緩沖液潤(rùn)濕后，再蓋上絕緣密封罩，即可由電泳電源輸入直流電壓（100V～1000V）進(jìn)行電泳。二、醋酸纖維素薄膜電泳電泳時(shí)經(jīng)過膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳的特點(diǎn)是分離速度快、電泳時(shí)間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測(cè)。三、凝膠電泳由區(qū)帶電泳中派生出的一種用凝膠物質(zhì)作支持物進(jìn)行電泳的方式。凝膠電泳

影響電泳結(jié)果（泳動(dòng)度）的五大原因2022/07/27: 在使用電泳儀做實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，可能實(shí)驗(yàn)的結(jié)果會(huì)受到影響。不同的帶電顆粒在同一電場(chǎng)中泳動(dòng)的速度不同。常用泳動(dòng)度(或遷移率)來表示。泳動(dòng)度是指帶電顆粒在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下泳的速度。遠(yuǎn)慕生物搜集整理了幾種影響泳動(dòng)度的主要因素：1、首先決定于帶顆粒的性質(zhì)，即顆粒所帶凈電荷的數(shù)量，大小及形狀。一般說來，顆粒帶凈電荷多，直徑小而接近于球形，則在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度快，反之則慢。泳動(dòng)度還與分子的形狀，介質(zhì)粘度，顆粒所帶電荷有關(guān)，泳動(dòng)度與顆表面電荷成正比，與介質(zhì)粘度及顆粒半徑反比。帶電荷的高分子在電解質(zhì)溶液中把一些帶有相反電

觀察載玻片時(shí)應(yīng)注意的問題2022/07/27: 1)觀察染色的干玻片時(shí)經(jīng)常遇到的問題大多是因?qū)η捌诘娜旧粔蚣?xì)心所造成的。操作時(shí)應(yīng)使用適當(dāng)濃度的細(xì)菌懸液，在載玻片上涂一層薄的均勻的細(xì)菌涂壇。如果涂層太厚或密度分布不均勻，很難觀察和得出結(jié)果。革蘭氏染色的脫色和復(fù)染操作少驟也要特別小心，(2)如果目鏡前端較臟，會(huì)使影像的清晰度和對(duì)比度受到影響，好像是透過一層薄物觀察細(xì)菌。這多是由于使用油鏡后沒及時(shí)將油擦下凈，鏡油逐漸在鏡頭表面硬化造成的。這時(shí)需要用鏡頭紙沾上二甲苯將其除去。但要注意不能經(jīng)常使用二甲苯，否則會(huì)降低鏡頭密封膠的作用。鏡油如果長(zhǎng)期不擦，

各種實(shí)驗(yàn)室溫度的控制要求2022/07/26: 常見實(shí)驗(yàn)室溫濕度控制要求，你都清楚嗎？跟著我們一起看下去吧！01、實(shí)驗(yàn)室溫度控制知識(shí)在實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)控項(xiàng)目中，不同實(shí)驗(yàn)室對(duì)溫濕度都有要求，而大部分實(shí)驗(yàn)都是在明確的溫濕度環(huán)境中展開，實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件直接影響著各種實(shí)驗(yàn)或檢測(cè)的結(jié)果，每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行都需要精確可靠的監(jiān)測(cè)儀器來提供準(zhǔn)確的環(huán)境參數(shù)數(shù)據(jù)。環(huán)境條件溫濕度的控制方面考慮的要素就是保證實(shí)驗(yàn)操作的環(huán)境溫濕度是能夠滿足實(shí)驗(yàn)程序各個(gè)過程的需要。我們主要從以下幾個(gè)方面來制定實(shí)驗(yàn)室環(huán)境溫濕度控制范圍首先，識(shí)別各項(xiàng)工作對(duì)環(huán)境溫濕度的要求。主要識(shí)別儀器的需要、試劑的需

你家的實(shí)驗(yàn)室這些都配備齊全嗎？2022/07/26: 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室是食品檢測(cè)方面的一個(gè)基本實(shí)驗(yàn)室，對(duì)于一個(gè)完備的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，我們需要配置哪些儀器呢？1、超凈工作臺(tái)微生物的培養(yǎng)都是在特定培養(yǎng)基中進(jìn)行無菌培養(yǎng)，那么無菌培養(yǎng)必然需要超凈工作臺(tái)提供一個(gè)無菌的工作環(huán)境。2、培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱有多種類型，它的作用在于為微生物的生長(zhǎng)提供一個(gè)適宜的環(huán)境。生化培養(yǎng)箱只能控制溫度，可作為一般細(xì)菌的平板培養(yǎng);霉菌培養(yǎng)箱可以控制溫度和濕度，可作為霉菌的培養(yǎng);CO2培養(yǎng)箱適用于厭氧微生物的培養(yǎng)。3、天平天平用于精確稱量各類試劑。實(shí)驗(yàn)室常用的是電子天平，電子天平按照精度不同有

細(xì)菌培養(yǎng)基的組成成分了解一下2022/07/26: 培養(yǎng)基的組成成分包括三大類：營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、凝固物質(zhì)、抑制劑和指示劑。（一）營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)盡管不同的細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)的要求不同，但細(xì)菌需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)應(yīng)含有水、氮源、碳源、無機(jī)鹽類和生長(zhǎng)因子等，常用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如下：1.蛋白胨：蛋白胨是制備培養(yǎng)基時(shí)最/常用的成分之一，提供細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的氮源。是動(dòng)物或植物蛋白質(zhì)經(jīng)酶或酸堿分解而成。植物胨和動(dòng)物胨各有優(yōu)點(diǎn)，配制培養(yǎng)基常將兩者按一定比例混合使用，提高培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。蛋白胨易溶于水，遇酸不沉淀，不因受高溫而凝固，并為兩性電解質(zhì)有緩沖作用。但吸水性強(qiáng)，應(yīng)注意干燥密封保存

血清中的沉淀物對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有影響嗎2022/07/26: （1）細(xì)胞生長(zhǎng)，經(jīng)驗(yàn)表明沉淀物不會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)。（2）過濾，如果血清中出現(xiàn)大量的沉淀物，血清將很難過濾。一般說來，因?yàn)樵谘迳a(chǎn)時(shí)最后已經(jīng)經(jīng)過100納米或者40納米的過濾處理，并且經(jīng)過了嚴(yán)格的無菌檢測(cè)，因此海克隆不推薦再過濾用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清。在實(shí)驗(yàn)室中沒有必要再過濾處理血清，在大規(guī)模的細(xì)胞培養(yǎng)中往往將血清直接加到培養(yǎng)基中一起過濾。（3）污染，磷酸鈣往往被誤認(rèn)為微生物污染而引起爭(zhēng)端。研究者可能會(huì)在血清中觀察到一些絮狀的沉淀，因此就會(huì)比較警覺的去做無菌試驗(yàn)，將血清放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)幾天，結(jié)果可能會(huì)觀

蛋白質(zhì)技術(shù)：血清蛋白瓊脂糖凝膠電泳2022/07/26: 【原理】瓊脂糖（agarose）是經(jīng)過挑選，以質(zhì)地較純的瓊脂（agar）作為原料而制成的。瓊脂在化學(xué)上是由瓊脂糖和瓊脂膠組成的復(fù)合物。瓊脂膠是一含有硫酸根和羥基的多糖，它具有離子交換性質(zhì)，這種性質(zhì)會(huì)給電泳及凝膠過濾以的影響。瓊脂糖是直鏈多糖，它由D－半乳糖和3,6－脫水－L－半乳糖的殘基交替排列組成。瓊脂糖主要通過氫鍵而形成凝膠。電泳時(shí)因凝膠含水量大（98－99%），近似自由電泳，因?yàn)楣腆w支持物的影響少，故電泳速度快，區(qū)帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團(tuán)，電滲影響很少，是一種較好的電泳材料，

細(xì)菌保存總結(jié)：細(xì)菌,培養(yǎng)物,甘油,瓊脂平板2022/07/25: 1.細(xì)菌保存于穿刺培養(yǎng)物中：一般細(xì)菌保存于穿刺培養(yǎng)物可以維持兩年。具體方法如下：用滅菌接種針挑取分散良好的單菌落，針緩慢穿過瓊脂到達(dá)瓶底，連續(xù)幾次，蓋上瓶蓋擰緊，做好標(biāo)記。室溫下存放于暗處。（最好一點(diǎn)可以將瓶蓋放松，在適當(dāng)溫度下培養(yǎng)過夜，再擰緊瓶蓋并加封Parafilm膜，室溫或最好在4度避光保存）。2.細(xì)菌保存于含有甘油的培養(yǎng)物中：（1）在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)物：取0.85ml細(xì)菌培養(yǎng)物，加入0.15ml高壓滅菌甘油，振蕩培養(yǎng)物使甘油分布均勻，然后轉(zhuǎn)移到標(biāo)記好的保存管內(nèi)，密封，在乙醇－干

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