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動物、植物細胞培養(yǎng)需要這些！2022/03/30: 動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)和微生物細胞細胞培養(yǎng)相比，動物細胞培養(yǎng)是當(dāng)中最麻煩的。它需要一些特殊的條件：⑴血清：動物細動物細胞離體培養(yǎng)需要要到血清，通常使用小牛血清。血清相當(dāng)于動物細胞離體培養(yǎng)的天然營養(yǎng)液，為動物細胞培養(yǎng)提供像礦物質(zhì)微量元素、脂肪和激素的生長必需因子。⑵支持物：很多動物細胞有貼壁生長的習(xí)慣。所以離體培養(yǎng)常用的支持物如玻璃，塑料。⑶氣體調(diào)節(jié)：在細胞培養(yǎng)過程中，需要不斷調(diào)整二氧化碳和氧氣的比例以保持所需要的氣體條件。植物細胞培養(yǎng)⑴光照：植物細胞離體培養(yǎng)的營養(yǎng)絕大多數(shù)由培養(yǎng)來提供，所有其

抗原、抗體檢測原理和應(yīng)用方法2022/03/30: 動物細胞融合也稱細胞雜交（cellhybridization），是指兩個或多個動物細胞融合成一個細胞的過程，融合后形成的具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞（hybridcell）。誘導(dǎo)細胞融合的方法有三種：生物方法（病毒）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（離心，震動，電刺激）。某些病毒如：仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusionprotein），可介導(dǎo)病毒同宿主細胞融合，也可介導(dǎo)細胞與細胞的融合，因此可以用紫外線滅活的此類病毒誘導(dǎo)細胞融合?；瘜W(xué)

流式細胞的具體實驗步驟2022/03/29: 一、細胞表面標(biāo)記的檢測1.試劑平衡至室溫。準(zhǔn)備：消毒臺面；穿戴工作服，帽子，口罩和手套，放置棉簽，草紙和有蓋垃圾桶（內(nèi)裝有消毒劑）。2.寫編號紙并編號。1----IgG1/IgG1/IgG12----CD4/CD8/CD33----CD14/CD454----3.每管加相應(yīng)的抗體10l/每種和50l全血，震蕩，室溫避光20分鐘。加血前搖勻血樣。4.加入溶血素1ml，震蕩后室溫避光10分鐘。5.離心，1200轉(zhuǎn)，5分鐘。棄上清，震蕩。6.加入PBS洗液2ml，震蕩，離心，1200轉(zhuǎn)，5分鐘。棄上清

植物檢測試劑盒原理和使用方法2022/03/29: 植物檢測試劑盒原理、使用方法：植物檢測試劑盒使試樣中各組分電離生成不同荷質(zhì)比的離子，經(jīng)加速電場的效果，形成離子束，進入質(zhì)量剖析器，利用電場和磁場使發(fā)作相反的速度色散——離子束中速度較慢的離子通過電場后偏轉(zhuǎn)大，速度快的偏轉(zhuǎn)小；在磁場中離子發(fā)作角速度矢量相反的偏轉(zhuǎn)，即速度慢的離子仍然偏轉(zhuǎn)大，速度快的偏轉(zhuǎn)小；當(dāng)兩個場的偏轉(zhuǎn)效果互相補償時，它們的軌跡便相交于一點。與此同時，在磁場中還能發(fā)作質(zhì)量的別離，這樣就使具有同一質(zhì)荷比而速度不同的離子聚集在同一點上，不同質(zhì)荷比的離子聚集在不同的點上，將它們分別聚集而

細胞培養(yǎng)基的種類，該如何選擇2022/03/29: 動物細胞培養(yǎng)（animalcellculture）就是從動物機體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個細胞（使用胰蛋白酶或膠原蛋白酶）然后，放在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細胞生長和增殖。細胞培養(yǎng)基的種類有哪些？按照細胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細胞培養(yǎng)基、合成細胞培養(yǎng)基、無血清細胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細胞培養(yǎng)基等幾大種類。1.DMEM細胞培養(yǎng)基DMEM（Dulbecco’smodifiedMinimalEssentialMedium）是由Dulbecco在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上改

動物細胞培養(yǎng)基的成分你知道哪些？2022/03/29: 動物細胞培養(yǎng)基有平衡鹽溶液、天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、無血清培養(yǎng)液等四種。平衡鹽溶液：目前常用的平衡鹽溶液有乳酸鈉和復(fù)方氯化鈉溶液（1.86%乳酸鈉溶液和復(fù)方氯化鈉溶液之比為1:2）與碳酸氫鈉和等滲鹽水溶液（1.25%碳酸氫鈉溶液和等滲鹽水之比為1:2）兩種。天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基也稱復(fù)合培養(yǎng)基，是含有化學(xué)成分還不清楚或化學(xué)成分不恒定的天然有機物。天然培養(yǎng)基主要取自動物體液或從動物組織分離提取。其優(yōu)點是營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果良好，缺點是成分復(fù)雜，來源受限。合成培養(yǎng)基：合成培養(yǎng)基（synthetic

檢測實驗室基礎(chǔ)知識匯總2022/03/28: 1、檢驗用水的要求分析檢驗中絕大多數(shù)的分析是對水溶液的分析檢測，因此水是最/常用的溶劑。在實驗室中離不開蒸餾水或特殊用途的純水，在未特殊注明的情況下，無論配制試劑用水，還是分析檢驗操作過程中加入的水，均為純度能滿足分析要求的蒸餾水或去離子水。蒸餾水可用普通的生活用水經(jīng)蒸餾汽化冷凝制成，也可以用陰陽離子交換處理的方法制得。特殊項目的檢驗分析對水的純度有特殊要求時，一般在檢驗方法中注明水的純度要求和提純處理的方法。為保證純水的質(zhì)量能符合分析工作的要求，對于所制備的每一批純水，都必須進行質(zhì)量檢測。一般

你注意了嗎？生化分析儀試劑間污染2022/03/28: 一、試劑間化學(xué)污染的來源全自動生化分析儀發(fā)展迅速，具有多項目、多樣本的處理能力，檢測速度不斷的提高，但由于共用吸樣針、試劑針、攪拌棒以及比色杯，當(dāng)生化儀長期使用致其清洗能力下降、比色杯老化后引起吸附力增加、生化儀內(nèi)污垢的積聚、測試順序安排不當(dāng)，且常規(guī)清洗不能有效消除交叉污染時，就會增加試劑間化學(xué)污染的可能性，引起測定結(jié)果不準(zhǔn)確。１.試劑針污染：目前大多數(shù)全自動生化分析儀采用雙試劑檢測樣本，，試劑Ｒ１、Ｒ２的吸取與吐出，一般分別只配有一套試劑針。當(dāng)試劑針在清洗不*，或黏附力增加時，殘留試劑可能會對

免疫分析中常用封閉劑介紹及選擇2022/03/28: 在免疫學(xué)實驗中，通常使用封閉劑來減少非特異性結(jié)合。常用的封閉劑有脫脂奶粉，BSA，血清以及Fab片段單鏈二抗等。根據(jù)不同的平臺選擇相應(yīng)的封閉劑。脫脂奶粉作用原理：脫脂奶粉含有多種蛋白，可以封閉未吸附蛋白的固相載體（WB膜、ELISA板等）位點，減少抗體與之結(jié)合的概率，避免非特異性結(jié)合帶來的高背景。優(yōu)點：價格便宜，因含多種不同分子量的蛋白，故封閉起來更全面。缺點：成分復(fù)雜，適用范圍窄。不適用于生物素和堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體系統(tǒng)。且封閉后的載體不易長期保存，因此在試劑盒的生產(chǎn)中較少應(yīng)用。牛血清白蛋白B

菌種生理狀況改變原因分析2022/03/28: 菌種的遺傳特性需要在一定條件下才能表現(xiàn)出來。由于培養(yǎng)條件不適當(dāng)，使菌種處于不利于發(fā)酵生產(chǎn)的生理狀況，其結(jié)果也表現(xiàn)為菌種衰退。菌種處于不利于發(fā)酵的生理狀況有以下三個方面的原因。①一個菌種不是純的群體，而是由一些變異株混合組成，這些變異株所占的比例決定該菌種的特性。一個由單菌落發(fā)育而來的菌種在固體培養(yǎng)基上分離，可以長出許多種形態(tài)培養(yǎng)特征的菌落。這些不同的菌落類型在代謝和生長繁殖速度等方面有一定差異。培養(yǎng)條件可以影響各變異株在培養(yǎng)物中的比例而改變該菌種的特性。同一個菌種的單孢子分離在不同的培養(yǎng)基上，所

細菌基因轉(zhuǎn)移與重組的方式有哪些？2022/03/25: 1.接合作用：當(dāng)細菌與細菌相互接觸時，質(zhì)粒DNA就可從一個細菌轉(zhuǎn)移到另一個細菌。2.轉(zhuǎn)化作用：由外源性DNA導(dǎo)入宿主細胞，并引起生物類型改變或使宿主細胞獲得新的遺傳表型的過程，稱為轉(zhuǎn)化作用。3.轉(zhuǎn)導(dǎo)作用：當(dāng)病毒從被感染的細胞釋放出來，再次感染另一細胞時，發(fā)生在供體細胞與受體細胞之間的DNA轉(zhuǎn)移及基因重組稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。4.轉(zhuǎn)座(轉(zhuǎn)位)：轉(zhuǎn)座是指一個或一組基因從一個位置轉(zhuǎn)到基因組的另一個位置?？煞譃椴迦胄蛄修D(zhuǎn)座和轉(zhuǎn)座子轉(zhuǎn)座。5．基因重組:不同DNA分子間發(fā)生的共價連接稱基因重組。有兩種類型：位點特異

質(zhì)粒提取的原理與常見問題2022/03/25: 現(xiàn)在較常用的質(zhì)粒提取方法有三種:堿裂解法、煮沸法和去污劑裂解法，前兩種方法較為劇烈，適用于較小的質(zhì)粒（＜15Kb），而去污劑裂解法則比較溫合，一般用于分子量較大的質(zhì)粒（＞15Kb）。堿裂解法是一種廣泛使用的制備質(zhì)粒DNA的方法。其原理為：染色體DNA遠遠大于質(zhì)粒DNA，染色體DNA為線狀分子，而質(zhì)粒為共價閉合環(huán)狀分子。當(dāng)pH12.0-12.6堿性環(huán)境中，線性的大分子的染色體DNA*變性，而共價閉環(huán)質(zhì)粒DNA在將PH調(diào)至中性后即可以恢復(fù)其天然構(gòu)象，在高鹽濃度存在的條件下，染色體DNA和蛋白質(zhì)在去污

關(guān)于蛋白水解酶的作用特點的介紹2022/03/25: 1、生物效應(yīng)是瞬時的通過對體內(nèi)活性蛋白前體的激活而迅速表現(xiàn)出活性。因為無需通過基因復(fù)制轉(zhuǎn)錄及表達等復(fù)雜的過程，所以能迅速對外界信號作出反應(yīng)。此外這種反應(yīng)又是定向而不可逆的，不同于體內(nèi)其他一些酶的生物調(diào)控機制，例如一些磷酸化激酶，通過對蛋白質(zhì)的磷酸化及去磷酸化使產(chǎn)生變構(gòu)效應(yīng)，從而進行可逆的生物調(diào)控。2、以級聯(lián)反應(yīng)的方式表達即在第一級反應(yīng)中被激活的蛋白質(zhì),本身就是催化下一級反應(yīng)的蛋白酶,這樣就起著逐級放大的作用。例2如一分子酶即使以很低的水平催化1000個分子底物反應(yīng)，經(jīng)兩級催化反應(yīng)后就放大了100

質(zhì)粒大量抽提操作過程及技巧說明2022/03/25: 1.取過夜菌至50毫升離心管內(nèi)，5000g離心1分鐘收集細菌沉淀，棄上清。再重復(fù)一次，每管共收集100毫升過夜菌沉淀。通常大腸桿菌宜用LB培養(yǎng)過夜(16小時左右)至OD值為2-4。建議5000g(通常為5000rpm左右)室溫離心1分鐘，如沉淀不充分則適當(dāng)延長離心時間。時間過長或離心速度過快會使沉淀過于緊密，不利于加入溶液I后散開沉淀。直接倒掉上清，再倒入約50毫升菌液并重復(fù)上述操作，然后倒置于吸水紙上(可用普通草紙)，使液體流盡。如果細菌密度明顯偏低，可考慮使用更多菌液，再重復(fù)上述操作1-2次

關(guān)于標(biāo)準(zhǔn)溶液那些必須知道的事2022/03/24: 標(biāo)準(zhǔn)溶液是分析的重要依據(jù)，因此在配置及標(biāo)定過程中的一些要求規(guī)范你可一定要知道呦~標(biāo)準(zhǔn)溶液的取得有兩種方法，一種是用基準(zhǔn)物質(zhì)直接配制，一種是用基準(zhǔn)物質(zhì)或已知準(zhǔn)確濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進行標(biāo)定來取得。用于配制或標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的最高純度化學(xué)試劑稱為基準(zhǔn)試劑或基準(zhǔn)物質(zhì)，用基準(zhǔn)試劑或基準(zhǔn)物質(zhì)配制成已知準(zhǔn)確濃度的溶液稱為標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度準(zhǔn)確與否直接關(guān)系檢測結(jié)果的精密度、準(zhǔn)確度。因此配制和標(biāo)定中你必須知道這些事：1、用于配制或標(biāo)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的基準(zhǔn)物質(zhì)必須符合以下條件：(1)純度高、雜質(zhì)含量一般不得超過0

pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液一些常見問題解答2022/03/24: 1.什么是pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液？它有哪些特點？pH緩沖溶液是一種能使pH值保持穩(wěn)定的溶液。如果向這種溶液中加入少量的酸或堿，或者在溶液中的化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生少量的酸或堿，以及將溶液適當(dāng)稀釋，這個溶液的pH值基本上穩(wěn)定不變，這種能對抗少量酸堿或大或稀釋，而使pH值不變化的溶液就稱為緩沖溶液。pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖液有以下特點：（1）標(biāo)準(zhǔn)溶液的pH值是已知的，并達到規(guī)定的準(zhǔn)確度；（2）標(biāo)準(zhǔn)溶液的pH值有良好的復(fù)現(xiàn)性和穩(wěn)定性，具有較大的緩沖容量，較小的稀釋值和較小的溫度系數(shù)；（3）溶液的制備方法簡單；2.如何配制pH標(biāo)準(zhǔn)

遠慕實驗：RNA的提取與核酸的顏色反應(yīng)2022/03/24: 一.目的學(xué)習(xí)用濃鹽法從酵母中提取RNA掌握用等電點法沉淀RNA觀察核酸的顏色反應(yīng)，了解核酸定性與定量測定的原理熟練掌握普通離心機的使用方法二.原理酵母繁殖快，生長周期短；其細胞質(zhì)中的核酸大部分是RNA，而DNA很少；RNA提取液與菌體分離比較容易。因此，酵母是提取RNA的好材料。將RNA從細胞中釋放出來在工業(yè)上主要有三種方法—稀堿法、濃鹽法和自溶法。本實驗采用濃鹽法，即利用高濃度的鹽（10%NaCl）在90～100°C條件下改變了細胞膜通透性，并將核蛋白體解離成RNA和蛋白質(zhì)而使RNA釋放到鹽溶

蛋白質(zhì)提?。ㄋ芤禾崛》ê陀袡C溶劑提取法）2022/03/24: 蛋白質(zhì)的提取工作是將經(jīng)過處理或破碎的細胞，置于一定的條件和溶液中，讓被提取物充分釋放出來的過程。影響提取的因素主要是被提取物質(zhì)在提取的溶液中溶解度的大小及由固相擴散到液相的難易程度。某一物質(zhì)在溶劑中溶解度大小與該物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)及溶劑理化性質(zhì)有關(guān)，一般遵守“相似相溶”的原則。擴散作用對蛋白質(zhì)的提取有一定的影響。減小溶劑的黏度、攪拌和延長提取時間可以提高擴散速度，增加提取效果，提取的原則是“少量多次”，即對于等量的提取溶液，分多次提取比一次提取效果好得多。大部分蛋白質(zhì)都可以溶于水、稀鹽、稀酸或稀堿溶

封閉血清的使用以及原理了解一下！2022/03/23: 做免疫組化時，一般都會封閉。以減少假陽性。封閉主要是用于封去切片上一些非特異性吸附。用一種非特異性的蛋白，把那些容易吸附蛋白的空間和位點占起來，這樣，加上抗體時，抗體只能與對應(yīng)的抗原去結(jié)合了。一般封閉可以用5%的BSA，這個價格便宜，而且效果還行。但理論上，用與二抗同來源的正常血清會更好。比如，一抗為國產(chǎn)的兔抗IL-2，二抗用標(biāo)記的羊抗兔IgG。那么，封閉血清就選擇與二抗同來源的正常羊血清（一般為山羊）。而同理，如果一抗為羊抗IL-2，二抗可以選標(biāo)記的兔抗羊IgG，封閉血清選擇正常兔血清。使用時

為啥你的細胞不貼壁？遠慕為您解析2022/03/23: 為啥你的細胞不愿貼壁呢？如何促進細胞貼壁？根據(jù)細胞特性分類1、懸浮細胞（SuspensionCell）細胞生長不依賴支持物表面，在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)生長，如淋巴細胞。2、貼壁細胞（AdherentCell）在動物細胞培養(yǎng)過程中，必須有可以貼附的支持物表面，依靠自身分泌或培養(yǎng)基中的粘附因子才能在該表面生長增殖的細胞。當(dāng)細胞在該表面生長后，一般形成兩種形態(tài)，即成纖維樣細胞或上皮樣細胞。3、兼性貼壁細胞有些細胞并不嚴(yán)格地依賴支持物，它們既可以貼附于支持物表面生長，但在一定條件下，也可在培養(yǎng)基中呈懸浮狀

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