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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第10年
ATCC細(xì)胞污染的預(yù)防2018/06/05
預(yù)防是防止ATCC細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生污染的辦法。只有預(yù)防工作做在前,才能將發(fā)生污染的可能性降到zui小程度。一般預(yù)防可從以下幾方面著手:1、添加抗生素2、從物品、用品消毒滅菌著手細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*,各種溶液滅菌除菌要仔細(xì),并在無(wú)菌試驗(yàn)陰性后才能使用。操作室及剩余的無(wú)菌器材要定期清潔消毒滅菌。3、從操作者做起(1)進(jìn)無(wú)菌室前要用肥皂洗手,按規(guī)定穿隔離衣。工作開(kāi)始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。(2)操作者動(dòng)作要輕,必須在火焰周圍無(wú)菌區(qū)內(nèi)打開(kāi)瓶口,并將瓶口轉(zhuǎn)動(dòng)燒灼。操作時(shí)盡量
ATCC細(xì)胞轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)服務(wù)2018/05/31
ATCC細(xì)胞誘導(dǎo)轉(zhuǎn)移將Transwell小室放入培養(yǎng)板中,小室內(nèi)稱上室,培養(yǎng)板內(nèi)稱下室,上室內(nèi)盛裝上層培養(yǎng)液,下室內(nèi)盛裝下層培養(yǎng)液,上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔。我們將細(xì)胞種在上室內(nèi),由于聚碳酸酯膜有通透性,下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)方向,從而可以研究下層培養(yǎng)液中的成分對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、運(yùn)動(dòng)等的影響。常用有普通transwell小室(用于遷移實(shí)驗(yàn))和鋪有基質(zhì)的transwell小室(用于侵襲實(shí)驗(yàn))。應(yīng)用實(shí)例:1、遷移實(shí)驗(yàn):遷移實(shí)驗(yàn)通常選擇帶有8.0µm微孔的聚碳酸酯膜小室,上室鋪細(xì)胞
干細(xì)胞溶解操作方法及注意事項(xiàng)2018/05/29
干細(xì)胞因子中不含載體蛋白(CarrierProtein)或其他添加劑(如BSA、HAS或蔗糖等),并且通常以zui少量的鹽來(lái)進(jìn)行凍干處理,因此微量的細(xì)胞因子在凍干過(guò)程中會(huì)沉積于管內(nèi),形成很薄或不可見(jiàn)的蛋白層。所以我們建議在收到產(chǎn)品后,務(wù)必在開(kāi)蓋前先離心,使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時(shí)能否見(jiàn)到白色沉淀均屬正?,F(xiàn)象)。1.離心:高速離心(10,000rpm)20-30秒,或低速離心(2,000rpm)5分鐘。2.溶解(Reconstitution):用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)
新老ATCC細(xì)胞之間的競(jìng)爭(zhēng)關(guān)系2018/05/24
在胸腺中,ATCC細(xì)胞從前體細(xì)胞形成,后者不斷被新到達(dá)的骨髓祖細(xì)胞取代。ELISA試劑盒Hans-ReimerRodewald及同事發(fā)現(xiàn),這是“老"細(xì)胞與“新"細(xì)胞之間競(jìng)爭(zhēng)的結(jié)果。在沒(méi)有細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)的情況下,當(dāng)新骨髓祖細(xì)胞的流入在小鼠體內(nèi)被阻斷時(shí),老細(xì)胞就會(huì)重新獲得自我更新并zui終被改變的能力,導(dǎo)致“T-細(xì)胞急性淋巴細(xì)胞性白血病"(T-ALL)的發(fā)生,ELISA試劑盒與人類的這種白血病相似。研究表明,細(xì)胞運(yùn)動(dòng)依賴于偽足的邊緣凸起、粘著和恢復(fù)來(lái)實(shí)現(xiàn)??梢钥吹郊?xì)胞核在受到肌肉細(xì)胞組織的牽引后向上方彎曲
干細(xì)胞技術(shù)離臨床應(yīng)用有多遠(yuǎn)?2018/05/22
在利用干細(xì)胞進(jìn)行組織修復(fù)方面,如今科學(xué)家們已經(jīng)取得了一定的研究成果。MehrnooshSaghizadeh等人發(fā)現(xiàn),利用干細(xì)胞或能改善眼角膜的傷口愈合,眼角膜的傷口愈合是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程,其往往會(huì)對(duì)多種眼部損傷和外科手術(shù)產(chǎn)生反應(yīng),研究人員提出了證據(jù)闡明了干細(xì)胞在眼角膜傷口愈合過(guò)程中所扮演的關(guān)鍵角色,同時(shí)還揭示了干細(xì)胞移植如何用來(lái)精細(xì)地調(diào)節(jié)傷口的愈合過(guò)程,這或?yàn)榛颊吣軒?lái)一定健康益處。戴建武等人研制處了能特異結(jié)合生長(zhǎng)因子或干細(xì)胞的智能生物材料,并在世界上開(kāi)展了神經(jīng)再生膠原支架修復(fù)脊髓損傷的臨床研究,
如何提高干細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)條件?2018/05/17
現(xiàn)在隨著科技技術(shù)的發(fā)達(dá),可以人工提取并培養(yǎng)干細(xì)胞,從而對(duì)其進(jìn)行更加深入的研究和試驗(yàn),以解決一些疾病的治療問(wèn)題。那么為了獲得的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,專業(yè)的培養(yǎng)機(jī)構(gòu)會(huì)使用一些方法來(lái)提高骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng)條件,確保其能夠更好的生長(zhǎng),下面小編就來(lái)為大家簡(jiǎn)單介紹如何提高培養(yǎng)時(shí)的細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)條件。1、選擇合適的培養(yǎng)基培養(yǎng)基是細(xì)胞人工培養(yǎng)繁殖過(guò)程中的重要工具,能夠?yàn)榧?xì)胞提供有力的生存所需的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),為了能提高細(xì)胞的營(yíng)養(yǎng),專業(yè)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)機(jī)構(gòu)會(huì)選擇zui合適的培養(yǎng)基,從而確保細(xì)胞在培養(yǎng)過(guò)程中營(yíng)養(yǎng)充足,
轉(zhuǎn)化細(xì)胞凍存液的配制方法2018/05/15
轉(zhuǎn)化細(xì)胞凍存是細(xì)胞培養(yǎng)、引種、保種和保證實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行的重要技術(shù)手段。在細(xì)胞建株和建系中,及時(shí)凍存原始細(xì)胞是十分重要的。在雜交瘤單克隆抗體的制備過(guò)程中,雜交瘤細(xì)胞、每次克隆化得到的亞克隆細(xì)胞的凍存保種常常是*的實(shí)驗(yàn)操作。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定的細(xì)胞系或穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候,細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能因細(xì)胞的污染、分泌抗體能力的喪失或遺傳變異等導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,如果沒(méi)有原始細(xì)胞的凍存,則因?yàn)樯鲜龅囊馔舛肮ΡM棄。1、常用凍存液組成成分20%血清(FBS)、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液;或90
干細(xì)胞重編程并不是我們想象的那樣2018/05/10
一項(xiàng)研究指出,干細(xì)胞重編程的發(fā)生與我們的想象并不*一樣。西班牙國(guó)家癌癥研究中心CNIO的研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn),組織損傷是細(xì)胞回到胚胎狀態(tài)的一個(gè)關(guān)鍵因素。受損細(xì)胞會(huì)給旁邊的細(xì)胞發(fā)送信號(hào)使其獲得胚胎特性,進(jìn)而促成組織修復(fù)。iPS細(xì)胞重編程為山中伸彌贏得了諾貝爾獎(jiǎng),也打開(kāi)了再生醫(yī)學(xué)的大門(mén)。該技術(shù)通過(guò)引入OSKM四個(gè)基因,使成體細(xì)胞回到胚胎狀態(tài),轉(zhuǎn)變?yōu)槎嗄芗?xì)胞。ManuelSerrano及其團(tuán)隊(duì)分析了在活組織中用OSKM誘導(dǎo)重編程的過(guò)程。他們看到的現(xiàn)象改變了迄今為止人們對(duì)這一過(guò)程的普遍認(rèn)識(shí)。山中伸彌的基因不足以
干細(xì)胞放化療后再生的正調(diào)控作用2018/05/08
研究工作揭示了骨髓脂肪細(xì)胞對(duì)造血干細(xì)胞放化療后再生的正調(diào)控作用,顛覆了過(guò)去脂肪細(xì)胞作為造血抑制物的經(jīng)典認(rèn)識(shí)。周波研究員為論文*作者和共同通訊作者,SeanJ.Morrison教授為論文另一共同通訊作者。研究同時(shí)被評(píng)為下期《NatureCellBiology》雜志封面文章。成年人腿骨中50%以上的空間被脂肪占據(jù),這一比例在衰老或疾病發(fā)生后會(huì)進(jìn)一步增加。骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)量與生理或病理性骨髓抑制具有高度的相關(guān)性。因此,一直以來(lái),脂肪細(xì)胞抑制骨髓造血被作為教科書(shū)般的常識(shí)。周波等人的工作發(fā)現(xiàn),骨髓脂肪細(xì)胞能
ATCC細(xì)胞的原代提取2018/04/26
目前,ATCC細(xì)胞的分離方法主要有三種:無(wú)血清培養(yǎng)基自然篩選法、流式細(xì)胞術(shù)分選法、免疫磁珠分選法。無(wú)血清培養(yǎng)基自然篩選法是迄今應(yīng)用,也是zui簡(jiǎn)單和容易操作且行之有效的方法。其原理是利用特殊的培養(yǎng)基使成熟的神經(jīng)細(xì)胞無(wú)法較長(zhǎng)時(shí)間地成活,而分離篩選出能夠在該培養(yǎng)條件下存活并繁殖的神經(jīng)干細(xì)胞群體。步驟:(1)取胎腦;(2)用吸管吹吸使細(xì)胞分散均勻;(3)加小鼠神經(jīng)干*培養(yǎng)基培養(yǎng)。脂肪間質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)脂肪干細(xì)胞主要是通過(guò)膠原酶進(jìn)行消化,獲得細(xì)胞懸液。分離培養(yǎng)大鼠脂肪間質(zhì)干細(xì)胞的大致步驟如下:(1)取腹
干細(xì)胞不飽和脂質(zhì)水平更高2018/04/17
“我們的研究表明,與非癌癥干細(xì)胞相比,卵巢癌干細(xì)胞中的不飽和脂質(zhì)水平顯著增加,”Cheng表示,“傳統(tǒng)方法不能進(jìn)行單細(xì)胞分析,如果信號(hào)位于非常微小的區(qū)域,就不太容易通過(guò)常規(guī)生化檢測(cè)方法觀察,通過(guò)受激拉曼顯微鏡,我們可以通過(guò)代謝標(biāo)志更好地確定這些細(xì)胞。在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的卵巢癌干細(xì)胞和來(lái)自人類患者的細(xì)胞中均鑒定出了脂質(zhì)去飽和信號(hào)。在富集癌干細(xì)胞的腫瘤球體實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)物中也能夠檢測(cè)到較高的不飽和脂水平。研究人員使用化學(xué)物質(zhì)抑制去飽和酶的活性,并降低細(xì)胞的“干性”(stemness),削弱其危害性。抑制脂質(zhì)去
轉(zhuǎn)化細(xì)胞的新測(cè)試2018/04/12
轉(zhuǎn)化細(xì)胞新的測(cè)試,稱為"多能測(cè)試"(PluriTest),具有收效大、、無(wú)需動(dòng)物展開(kāi)的多能性測(cè)試/特點(diǎn)。使用微陣列技術(shù),能同時(shí)對(duì)數(shù)以千計(jì)不同的DNA序列進(jìn)行分析。斯克里普斯研究小組開(kāi)創(chuàng)了關(guān)于所有基因信息的大型數(shù)據(jù)庫(kù),這些基因活躍在正常的人體胚胎干細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干細(xì)胞和許多的非多能細(xì)胞系中。對(duì)于多能測(cè)試,這個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)正常多能干細(xì)胞系建立了詳細(xì)的分子模型。Loring說(shuō),與使用小的生物標(biāo)志檢測(cè)細(xì)胞的診斷測(cè)試不同,分子模型的方法使用了微陣列中的數(shù)千條信息。這個(gè)診斷測(cè)試的結(jié)果具有高度的靈敏度和特異性???
裝滿培養(yǎng)液的干細(xì)胞如何處理?2018/04/10
很多人都會(huì)遇到從其他地方買(mǎi)來(lái)干細(xì)胞或者快遞運(yùn)來(lái)細(xì)胞,裝滿培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶的細(xì)胞怎么處理的問(wèn)題。第1步:先放37℃培養(yǎng)箱放置4小時(shí),這樣細(xì)胞在通過(guò)長(zhǎng)途跋涉以后得以穩(wěn)定,觀察細(xì)胞狀態(tài)。第2步:將新鮮培養(yǎng)基和舊的培養(yǎng)基1:1稀釋,如果細(xì)胞狀態(tài)不好,可以將血清濃度提到15%,否則正常培養(yǎng),這樣有一個(gè)過(guò)渡期,不至于細(xì)胞換血清之后狀態(tài)不佳,15%的血清培養(yǎng)48h之后換成正常濃度培養(yǎng)。細(xì)胞胞質(zhì)疏松,狀態(tài)不好,養(yǎng)不起來(lái),怎么辦?策略1:一般情況下,從血清下手就行,要么換好血清,要么提高血清濃度,血清濃度提高到15
ATCC細(xì)胞如何正確分離2018/04/08
ATCC細(xì)胞分裂是指細(xì)胞分裂為兩個(gè)相同副本的過(guò)程。普通人的一生中要經(jīng)歷無(wú)數(shù)次的這一過(guò)程。為了生成兩個(gè)*相同的副本,細(xì)胞必須地分離它們的染色體,這一事件依賴于稱之為動(dòng)粒(kinetochore)的專門(mén)結(jié)構(gòu)將染色體雙向附著到紡錘體微管上。在細(xì)胞分裂的早期階段,動(dòng)粒結(jié)合紡錘體微管會(huì)發(fā)生許多的錯(cuò)誤。正常的細(xì)胞能夠有效地糾正這些錯(cuò)誤,確保染色體正確分離。而癌細(xì)胞通常不會(huì)糾正這些錯(cuò)誤,使得子細(xì)胞染色體數(shù)目異常,從而幫助這些癌細(xì)胞抵抗化療。達(dá)特茅斯Geisel學(xué)院生物化學(xué)教授Compton也發(fā)表了一些言論,他
ATCC細(xì)胞核移植技術(shù)2018/04/03
ATCC細(xì)胞從2-4月齡成熟母鼠獲得,未成熟支持細(xì)胞從0-5日齡未成熟雄鼠獲得。卵丘細(xì)胞通過(guò)透明質(zhì)酸酶脫顆粒細(xì)胞獲得。未成熟睪支持細(xì)胞獲得方法如下:取下的小鼠睪用0.1mg/ml膠原酶與0.01mg/ml脫氧核糖核酸酶37℃處理30min,然后用0.2mg/ml胰蛋白酶37℃處理5min,去睪懸液即可。睪懸液用含4mg/mlBSA的PBS洗一下就可用于顯微注射了。未成熟睪細(xì)胞根據(jù)其體積與形態(tài)即可確認(rèn)。MII期受體卵母ATCC細(xì)胞在37℃條件下去核,操作液為含5µg/mlCB的Hepes-KSOM
轉(zhuǎn)化細(xì)胞外源基因?qū)氲脑砗筒僮鞑襟E2018/03/29
轉(zhuǎn)化細(xì)胞實(shí)驗(yàn)試劑1.細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)液(DMEM液體培養(yǎng)基,10%胎牛血清,雙抗100單位/ml),消化液(0.05%胰酶,0.53mMEDTA·Na),Hank’s液。2.2×HBS液(280mMNaCl,10mMKCl,1.5mMNaHPO4·2H2O,12mM葡萄糖,50mMHepes,pH7.05,0.2μ過(guò)濾除菌),CaCl2(2.5M,0.2μ過(guò)濾除菌)溶液,超純水(滅菌)。3.PBS,蛋白酶K,NP40,RNaseA,無(wú)水乙醇,酚,DNA上樣緩沖液,瓊脂糖,TAE電泳緩沖液,EB。實(shí)驗(yàn)設(shè)備
干細(xì)胞療法有助于視力恢復(fù)2018/03/27
英國(guó)兩名“濕性”老年性黃斑變性患者接受胚胎干細(xì)胞療法治療,原本幾近失明的眼睛恢復(fù)視力,能夠視物、閱讀,為治療這種常見(jiàn)眼疾帶來(lái)希望。黃斑是視網(wǎng)膜的重要區(qū)域?!皾裥浴崩夏晷渣S斑變性患者的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞因血管滲漏受損,造成視力模糊不清,嚴(yán)重時(shí)失明。英國(guó)穆?tīng)柗茽柕卵劭漆t(yī)院利用人體胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)出視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞,將它嵌入一個(gè)支架中,形成一張40微米厚、6毫米長(zhǎng)、4毫米寬的“補(bǔ)丁”。然后,他們把這張活細(xì)胞補(bǔ)丁植入患者失明眼睛的黃斑后,替代原來(lái)的病變細(xì)胞。整個(gè)手術(shù)耗時(shí)兩小時(shí)。研究人員在19日出版的英國(guó)
轉(zhuǎn)化細(xì)胞電融合的原理和方法2018/03/22
轉(zhuǎn)化細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)康膭?dòng)物的游離細(xì)胞以及植物成微生物去壁后的原生質(zhì)體,在電刺激下進(jìn)行細(xì)胞融合,且融合率高、無(wú)毒性,操作簡(jiǎn)便及融合后的細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)成活率高等優(yōu)點(diǎn),是細(xì)胞工程手段的又一進(jìn)展。實(shí)驗(yàn)原理將制備的游離細(xì)胞或原生質(zhì)體,置于電融合室中,在高頻交流電場(chǎng)的作用下,細(xì)胞被極化,成為偶極子,造成細(xì)胞之間相互連接,如果施加的高頻交流電壓(即正弦波的p-p值)過(guò)高或作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng),則細(xì)胞連接成串珠狀,應(yīng)適當(dāng)控制以上條件,盡量使兩細(xì)胞處于點(diǎn)接觸狀態(tài),然后施加方波脈沖予以刺激,由于電脈沖的瞬間作用,可擊破兩細(xì)胞接觸點(diǎn)
轉(zhuǎn)化細(xì)胞修復(fù)特定基因2018/03/20
轉(zhuǎn)化細(xì)胞這項(xiàng)研究對(duì)于人類健康來(lái)說(shuō)具有重要的意義,而且對(duì)于理解腫瘤的發(fā)育過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)部發(fā)生的改變十分有用。MMR缺陷將導(dǎo)致細(xì)胞變得更具腫瘤特性,這可能是與偶遇MMR缺陷的細(xì)胞缺少保護(hù)基因以及降低突變風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)機(jī)制。研究者們目前并沒(méi)有向這一方向拓展的想法,但如果有人愿意深入研究的話將是十分有意義的事情。這項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)MMR能夠特異性地修復(fù)特定基因,而不是對(duì)基因組上的非基因位點(diǎn)進(jìn)行修復(fù)。這一發(fā)現(xiàn)將極大程度上促進(jìn)我們對(duì)物種利用MMR修復(fù)基因突變的理解?!半m然基因?qū)τ谖锓N的生物學(xué)功能的實(shí)現(xiàn)具有至關(guān)重要的影響
干細(xì)胞的基因測(cè)序2018/03/13
研究人員首先進(jìn)行了結(jié)腸癌干細(xì)胞的基因測(cè)序,并使用小鼠模型及病人來(lái)源腫瘤細(xì)胞的3D細(xì)胞培養(yǎng)模型進(jìn)行了功能研究。他們的研究發(fā)現(xiàn)腫瘤干細(xì)胞的生存由一個(gè)特殊的刺猬信號(hào)通路(SHH-PTCH1)控制,這個(gè)通路允許細(xì)胞對(duì)外部抑制干細(xì)胞分化的信號(hào)產(chǎn)生反應(yīng)。“將靶向抑制刺猬信號(hào)通路的療法與其他縮小腫瘤的療法結(jié)合,可能會(huì)為清除腫瘤干細(xì)胞并防止復(fù)發(fā)提供新策略,”Regan博士說(shuō)道。相似的靶向刺猬信號(hào)通路的研究也在胰腺癌、乳腺癌等模型中取得了令人振奮的結(jié)果。“未來(lái)的研究將旨在確定該信號(hào)通路的下游信號(hào)組件,以及進(jìn)一步研
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