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2023
03-03

ELISA的原理、類(lèi)型及選擇，Absin給你整理了一份詳細(xì)的清單！
ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡(jiǎn)稱。是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來(lái)的一種免疫酶技術(shù)。該技術(shù)自70年代初問(wèn)世后迅速應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)的許多領(lǐng)域。ELISA的原理，這一塊相信小伙伴們都是非常熟悉的了，是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體──聚苯乙烯微量滴定板的孔（當(dāng)然就是我們熟知的96孔板啦）中進(jìn)行，每加入一種試
2023
03-02

HepG2細(xì)胞培養(yǎng)攻略
HepG2細(xì)胞是來(lái)源于一個(gè)15歲白人的肝癌組織；分泌多種血漿蛋白：清蛋白、α2-巨球蛋白、血纖維蛋白溶酶原、轉(zhuǎn)鐵蛋白等；模式染色體數(shù)為55；該細(xì)胞在免疫抑制小鼠中不致瘤；是一個(gè)合適的轉(zhuǎn)染宿主；表達(dá)標(biāo)志物包括胰島素受體；胰島素樣生長(zhǎng)因子II（IGFII）受體。呈上皮樣；貼壁，傳代比例1:4-1:6；營(yíng)養(yǎng)體系是MEM+10%FBS。名稱HepG2（人肝癌細(xì)胞）形態(tài)上皮樣生長(zhǎng)特性貼壁；傳代比例1:4-1:6營(yíng)養(yǎng)體系MEM（abs9503）+10%FBS（abs972）+1%PS（abs9244）圖1H
2023
02-28

逆行示蹤劑之霍亂毒素B亞單位
霍亂毒素（choleratoxin，CT）是霍亂弧菌產(chǎn)生的腸毒素，由1個(gè)A亞單位（CTA）和5個(gè)B亞單位（CTB）形成的五聚體共價(jià)連接而成，CTA為毒性亞單位，CTB為無(wú)毒的受體結(jié)合亞單位，可以和所有核細(xì)胞膜上的神經(jīng)結(jié)苷脂（GM1）受體結(jié)合，CTA通過(guò)CTB的作用進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮其毒性作用[1]。CTA是一種ADP-核糖轉(zhuǎn)移酶，通過(guò)破壞G蛋白信號(hào)傳導(dǎo)使細(xì)胞脫水。而CTB通過(guò)與神經(jīng)節(jié)苷脂GM1的戊多糖鏈結(jié)合附于細(xì)胞表面，可被軸突末端吸收并逆向運(yùn)輸至胞體，進(jìn)而特異高效地逆行標(biāo)記神經(jīng)細(xì)胞，目前已成為應(yīng)用廣
2023
02-24

還不知道支原體預(yù)防劑的看過(guò)來(lái)了
支原體是一種大小僅為0.2~0.3μm，無(wú)細(xì)胞壁，可透過(guò)一般過(guò)濾膜(0.22-0.45μm)的原核生物，在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，支原體感染發(fā)生率達(dá)到63%，因而細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中被支原體污染是一個(gè)世界性的難題。多篇文獻(xiàn)研究表明：當(dāng)細(xì)胞(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染后，細(xì)胞內(nèi)的DNA、RNA及蛋白表達(dá)發(fā)生改變，而細(xì)胞的生長(zhǎng)率一般并未發(fā)生顯著的影響，因而細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺(jué)。支原體預(yù)防劑可以有效預(yù)防和殺滅細(xì)胞外面的支原體和常見(jiàn)細(xì)菌，也可以進(jìn)入細(xì)胞，有效預(yù)防細(xì)胞體內(nèi)的支原體污染，讓細(xì)胞擺脫支原體污染的困
2023
02-22

化合物溶解專(zhuān)題——溶劑的選擇
動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中常會(huì)用到小分子化合物，然而當(dāng)我們使用小分子藥物時(shí)經(jīng)常會(huì)遇到這樣的困惑：選取什么樣的溶劑或者藥物輔料來(lái)溶解我們的化合物？溶劑或輔料的濃度應(yīng)該選擇多大合適？一旦出錯(cuò)，上千元的藥物將毀于一旦。此外，藥物的溶解性往往影響動(dòng)物的給藥方式，甚至在某種程度上會(huì)限制藥物的應(yīng)用。而在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，不合適的溶劑會(huì)造成藥物形成顆粒沉淀，進(jìn)而無(wú)法透過(guò)細(xì)胞膜。不可否認(rèn)，小小的溶劑，蘊(yùn)含著大學(xué)問(wèn)。下面，小愛(ài)向大家分享藥物溶解常用的溶劑和輔料。一、水性溶劑※水：可溶解大多數(shù)無(wú)機(jī)鹽、極性大的有機(jī)藥物和藥材中的
2023
02-21

分子克隆技術(shù)全攻略
70年代初期基因工程分子克隆技術(shù)的誕生將生命科學(xué)研究推入了一個(gè)快速發(fā)展的新時(shí)代，以它作為研究的切入點(diǎn)許多的生物學(xué)難題取得了突破性解決?；蚩梢栽谖锓N之間轉(zhuǎn)移表達(dá)，基因工程藥物得到開(kāi)發(fā)，基因治療得以實(shí)現(xiàn)，轉(zhuǎn)基因植物、動(dòng)物等農(nóng)業(yè)新品種被培育出來(lái)，生物進(jìn)化從此進(jìn)入了人類(lèi)知識(shí)干預(yù)的歷史進(jìn)程。被評(píng)為世紀(jì)三大科學(xué)成就之一的“人類(lèi)基因組測(cè)序”的實(shí)現(xiàn)，也是在分子克隆技術(shù)基礎(chǔ)上的人類(lèi)一大杰作。生命科學(xué)的內(nèi)容不再是條塊分割的拼盤(pán)，而是以分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的概念為一體的、統(tǒng)一的生物學(xué)。圖1基因編輯（圖片來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)
2023
02-20

類(lèi)器官與PBMC共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)方案，超實(shí)用！不信還學(xué)不會(huì)
最近很多寶寶問(wèn)類(lèi)器官如何跟PBMC共培養(yǎng)，這個(gè)實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵點(diǎn)還是要先養(yǎng)好類(lèi)器官，可以參照之前的類(lèi)器官原代培養(yǎng)篇“類(lèi)器官原代培養(yǎng)全流程”。圖1基質(zhì)膠法構(gòu)建類(lèi)器官那類(lèi)器官培養(yǎng)成功的標(biāo)準(zhǔn)是什么呢？首先是我們培養(yǎng)的類(lèi)器官需要穩(wěn)定傳代3代以上，才能表示其干性是比較好的，其次就是要經(jīng)過(guò)組化鑒定，觀察其和原組織形態(tài)和細(xì)胞類(lèi)型上是否保持一致。經(jīng)過(guò)鑒定后就可以進(jìn)入我們下一步的實(shí)驗(yàn)了，類(lèi)器官組化的方法跟我們常規(guī)組織操作方法是十分類(lèi)似的，區(qū)別就在于類(lèi)器官的固定上，操作方法小愛(ài)也給大家整理好了。詳見(jiàn)“類(lèi)器官實(shí)操大本營(yíng)之—
2023
02-17

嗨，ChatGPT！你知道多重?zé)晒饷庖呓M化嗎？
最近的網(wǎng)絡(luò)好像被人工智能系統(tǒng)——ChatGPT占領(lǐng)了，聽(tīng)說(shuō)它無(wú)所不知，還能幫寫(xiě)文章，各大高校緊急禁用；還聽(tīng)說(shuō)未來(lái)很多人的工作都會(huì)被它取代，那小編作為技術(shù)支持豈不是很危險(xiǎn)？等不了了，立刻發(fā)起挑戰(zhàn)！咦！它還真知道點(diǎn)什么！回答得也還不錯(cuò)誒。繼續(xù)試試！錯(cuò)了錯(cuò)了，它犯了所有懂又不太懂的人最容易犯的錯(cuò)，跟免疫熒光（IF）混淆了，免疫熒光確實(shí)也能夠?qū)崿F(xiàn)多個(gè)指標(biāo)的共染色，但是因?yàn)樾枰餐跤豢?，所以每個(gè)指標(biāo)對(duì)應(yīng)的一抗都不能是同種來(lái)源，并且熒光素是直接結(jié)合在二抗上，所以還要搭配對(duì)應(yīng)的熒光二抗，目前市面上也就那么
2023
02-16

mRNA質(zhì)量檢測(cè)之dsRNA檢測(cè)方法
將體外轉(zhuǎn)錄的RNA用作治療藥物需要大量具有低免疫原性的功能性RNA。用于合成這些體外轉(zhuǎn)錄的mRNA的技術(shù)——主要使用T7噬菌體RNA聚合酶(T7RNAP)，這個(gè)技術(shù)目前已經(jīng)很成熟。T7RNAP從包含噬菌體酶特異性啟動(dòng)子的DNA模板中以高保真度轉(zhuǎn)錄RNA。盡管使用T7RNAP從DNA模板合成RNA的過(guò)程很穩(wěn)健，但之前的研究已經(jīng)確定了體外合成過(guò)程中某些副產(chǎn)物的存在，這些副產(chǎn)物會(huì)觸發(fā)細(xì)胞免疫反應(yīng)，包括雙鏈RNA(dsRNA)，這已被證明成為免疫通路的主要觸發(fā)因素。因此，在為尋求最小化細(xì)胞免疫反應(yīng)的體內(nèi)
2023
02-15

RNA分離解決方案，值得信賴！
隨著分子生物技術(shù)在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等方面的廣泛應(yīng)用，RNA提取已成為研究基因表達(dá)、克隆目的基因等的一項(xiàng)基本試驗(yàn)技術(shù)。高質(zhì)量RNA的提取，是后續(xù)RT-PCR、qPCR、Northernblot、cDNA文庫(kù)構(gòu)建等正常進(jìn)行的必要前提。Trizol法是一種常見(jiàn)的提取總RNA的方法，在RNA得率及試劑成本方面具有一定的優(yōu)勢(shì)。圖1Trizol法提取RNA流程Trizol是一種較為流行的總RNA抽提試劑，可以直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速破碎細(xì)胞并抑制細(xì)胞釋放出的核酸酶，因
2023
02-14

千萬(wàn)人中，總能尋到你！PD-1與PD-L1的那些事
情人節(jié)將至，不知道小伙伴們有沒(méi)有找到心儀的他/她呢？人海茫茫，遇見(jiàn)是一件幸事，而能走到一起，則是人生一大喜事啦！愛(ài)必信祝天下有情人終成眷屬！不期而遇是多少人心中的美好，但在咱們?nèi)梭w中，有些相遇卻是能起到相反的效果，通常情況或有可能引起不適甚至更嚴(yán)重的情況出現(xiàn)。PD-1和PD-L1就是較為經(jīng)典的一類(lèi)。咱們體內(nèi)的免疫系統(tǒng)重要成員T細(xì)胞主要是靠著細(xì)胞膜表面的蛋白質(zhì)去鑒別細(xì)胞，細(xì)胞表面有許多凸起的膜蛋白，不同種類(lèi)的細(xì)胞其表面蛋白質(zhì)的種類(lèi)和數(shù)量都是不一樣的，這就使得不同細(xì)胞之間有了區(qū)分和差別。在正常情況下
2023
02-14

情人節(jié)，你的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)找到心儀的激動(dòng)劑了嗎？
科研汪土味情話篇~~A：“你最近是不是發(fā)大文章了？”B：“沒(méi)有啊，你聽(tīng)誰(shuí)說(shuō)的？”A：“那為什么你在我心里的影響因子越來(lái)越高呢？”A：“你能好好跑電泳嗎？”B：“怎么了？”A：“不要總是跑到我心里來(lái)。”A：“師妹，你細(xì)胞養(yǎng)得真好呀！”B：“謝謝！”A：“。。。。。。。。。?！保ㄈ绻闶茿，你會(huì)怎么答呢？）注：以上來(lái)源于網(wǎng)絡(luò)言歸正傳篇激動(dòng)劑（agonist）是指能增強(qiáng)另一種分子活性、促進(jìn)某種反應(yīng)的藥物、酶激動(dòng)劑和激素的一類(lèi)分子。其與受體有高親和力、高內(nèi)在活性，能與受體結(jié)合產(chǎn)生最大效應(yīng)[1]。圖1小分
2023
02-13

如何用類(lèi)器官技術(shù)解決藥物篩選問(wèn)題？
一、目前藥物研發(fā)的痛點(diǎn)數(shù)據(jù)顯示腫瘤新藥開(kāi)發(fā)占全球新藥開(kāi)發(fā)的50%以上，2020年中國(guó)腫瘤臨床試驗(yàn)數(shù)量高達(dá)722個(gè)，但是腫瘤新藥失敗率高達(dá)96%。主要原因是：（1）2D細(xì)胞/細(xì)胞系模型不能真實(shí)反應(yīng)體內(nèi)情況；（2）動(dòng)物模型和人的種屬差異，最后一批動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果與第一批患者臨床試驗(yàn)結(jié)果差別很大；（3）臨床入組病人缺乏靶向，藥物有效率不過(guò)關(guān)。圖1常規(guī)藥物研發(fā)思路因此，需要一個(gè)能接近人的疾病模型，降低新藥研發(fā)的成本和時(shí)間。類(lèi)器官模型來(lái)源于人自身，能夠?qū)崿F(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展患者臨床試驗(yàn)，提高研發(fā)成功率、縮短研發(fā)周期
2023
02-09

SARS-CoV-2抗體檢測(cè)，愛(ài)必信想你所想
想必在新冠疫情趨勢(shì)下，小伙伴們都已經(jīng)完成了疫苗的接種，那么SARS-CoV-2是如何運(yùn)行的呢？簡(jiǎn)言之就是機(jī)體在感染新冠或接種SARS-CoV-2后，會(huì)發(fā)生免疫應(yīng)答，并產(chǎn)生抗體來(lái)對(duì)抗病毒。近日，多地發(fā)布建議加強(qiáng)SARS-CoV-2抗體檢測(cè)的建議，多位專(zhuān)家形成共識(shí)，衛(wèi)生部門(mén)加強(qiáng)對(duì)人群抗體水平的持續(xù)監(jiān)測(cè)，有利于通過(guò)人群的新冠抗體水平對(duì)疫情流行趨勢(shì)做科學(xué)研判。疫情放開(kāi)給大家一種錯(cuò)覺(jué)，就是身邊感染新冠的人都“消失”了。主要在于現(xiàn)階段感染SARS-CoV-2確實(shí)癥狀很輕，很多患者無(wú)癥狀，正所謂“不檢測(cè)，就不
2023
02-07

組織消化專(zhuān)題——酶的選擇
酶解法作為單細(xì)胞懸液制備常用方法之一，通過(guò)利用特定酶進(jìn)行相應(yīng)的化學(xué)反應(yīng)除掉一些特定結(jié)構(gòu)，適合將小塊組織消化成為單個(gè)細(xì)胞。膠原酶是單細(xì)胞組織消化的重要酶種。膠原酶消化在單細(xì)胞樣本制備過(guò)程中，是不能缺少的一步。另外，組織解離常見(jiàn)的消化酶還有胰蛋白酶、脫氧核糖核酸酶Ⅰ、透明質(zhì)酸酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、彈性蛋白酶，不同酶適用于不同的組織類(lèi)型。一、膠原酶膠原酶（Collagenase）主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。目前商用膠原酶是從溶組織梭狀細(xì)胞芽孢桿菌提取制備的，分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ等不同類(lèi)型，
2023
02-06

IHC專(zhuān)題——抗原修復(fù)
在樣本制備的過(guò)程中，往往會(huì)應(yīng)用一些試劑（如多聚甲醛、福爾馬林等）對(duì)新鮮組織進(jìn)行處理，這個(gè)過(guò)程可能導(dǎo)致抗原位點(diǎn)被封閉，為了避免影響后續(xù)免疫染色的效果，我們需要先對(duì)切片進(jìn)行抗原修復(fù)。對(duì)于石蠟切片來(lái)說(shuō)，抗原修復(fù)是必須的步驟，常用的方法有酶消化法和熱修復(fù)法。1、酶消化法作為最早的抗原修復(fù)方法，常用的消化酶有三：胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K。但酶的作用極易受溫度影響，如果消化不足，則無(wú)法充分暴露出抗原位點(diǎn)，過(guò)度的消化又會(huì)破壞組織結(jié)構(gòu)，影響最后陽(yáng)性信號(hào)的判讀，因此在后續(xù)的發(fā)展中，酶消化法漸漸被熱修復(fù)技術(shù)所替
2023
02-03

類(lèi)器官技術(shù)或?qū)⒊蔀樽畲蟆皾摿伞保?/a>
2023年1月10日，《Science》發(fā)文，F(xiàn)DA不再要求新藥研制進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。2022年12月底，美國(guó)總統(tǒng)簽署法案，新藥無(wú)需在動(dòng)物身上進(jìn)行測(cè)試也可獲得美國(guó)食品和藥物管理局(FDA)的批準(zhǔn)。對(duì)于動(dòng)物福利組織來(lái)說(shuō)這一轉(zhuǎn)變無(wú)疑是重大的。該法案代替了1983年的規(guī)定，要求新藥與化妝品產(chǎn)品開(kāi)發(fā)，皆需進(jìn)行動(dòng)物試驗(yàn)。Drake的團(tuán)隊(duì)和一些非營(yíng)利性的動(dòng)物健康組織認(rèn)為在批準(zhǔn)藥物進(jìn)行人體試驗(yàn)時(shí)，F(xiàn)DA應(yīng)更多地依靠計(jì)算機(jī)建模、"器官芯片"和其他在過(guò)去10至15年中開(kāi)發(fā)的非動(dòng)物方法。這一舉措是否給其他技術(shù)帶來(lái)新的發(fā)

2023
01-31

mRNA技術(shù)應(yīng)用——傳染病疫苗
早在30多年前，科學(xué)家們就構(gòu)思出基于mRNA的核酸疫苗，能夠開(kāi)發(fā)出安全和多功能的核酸疫苗。如今隨著mRNA技術(shù)的不斷發(fā)展，這一愿望終于照進(jìn)現(xiàn)實(shí)，新冠mRNA疫苗開(kāi)發(fā)成功并投入生產(chǎn)，推動(dòng)了mRNA疫苗在他傳染病領(lǐng)域、癌癥、罕見(jiàn)病等領(lǐng)域的研發(fā)進(jìn)展。2021年8月25日，NatureReviewsDrugDiscovery發(fā)表了一篇深度綜述，詳細(xì)介紹了mRNA疫苗的技術(shù)基礎(chǔ)，以及傳染病mRNA疫苗開(kāi)發(fā)的最近進(jìn)展和關(guān)鍵問(wèn)題。圖1在這篇綜述中，作者描述了mRNA疫苗的技術(shù)基礎(chǔ)，包括mRNA設(shè)計(jì)和合成，以及
2023
01-29

新冠藥品納醫(yī)保，技術(shù)路線知多少？
2019年底爆發(fā)的SARS-CoV-2，隨著疫情的放開(kāi)，感染人數(shù)激增，尤其是老年患者，新冠口服藥的需求愈發(fā)旺盛。根據(jù)媒體報(bào)道，2023年1月8日，新冠治療藥品阿茲夫定片、清肺排毒顆粒經(jīng)過(guò)談判納入國(guó)家醫(yī)保目錄，而輝瑞的Paxlovid因報(bào)價(jià)高談判失敗。為保障新冠用藥，國(guó)家醫(yī)保局醫(yī)藥服務(wù)管理司的副司長(zhǎng)黃心宇在1月11日的新聞發(fā)布會(huì)上表示，按現(xiàn)行的新冠藥品報(bào)銷(xiāo)政策，Paxlovid仍可臨時(shí)報(bào)銷(xiāo)至2023年3月31日。當(dāng)前，全球新冠口服藥的研發(fā)分為兩大技術(shù)陣營(yíng)：以輝瑞Paxlovid為代表的3CL蛋白酶
2023
01-29

開(kāi)工大吉 | miRNA引物狂送不停！
RNA可以通過(guò)它是否編碼為蛋白質(zhì)被分為編碼RNA和非編碼RNA。編碼RNA主要是mRNA，而在非編碼RNA這一塊，我們今天的主角microRNAs（miRNAs）主要屬于非編碼RNA中的短鏈非編碼RNA。miRNA大小長(zhǎng)約20-25個(gè)核苷酸，由高等真核生物基因組編碼，通過(guò)和靶基因mRNA堿基配對(duì)引導(dǎo)沉默復(fù)合體（RISC）降解mRNA或阻礙其翻譯。圖1RNA的分類(lèi)雖然第一個(gè)miRNA早在1993年被發(fā)現(xiàn)，一直到最近幾年這類(lèi)基因的多樣性和廣泛性才被揭示出來(lái)。目前，已有大量的研究結(jié)果表明，miRNA在

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