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免疫組化操作步驟2021/03/11: 一節(jié)免疫組化操作步驟及抗原修復(fù)（供參考）一、免疫組化操作步驟（一）、儀器設(shè)備1、18cm不銹鋼高壓鍋或電爐或用微波爐2、水浴鍋（二）、試劑1、PBS緩沖液（pH7.2―7.4）2、0.01mol/L檸檬酸鈉緩沖液（CB,pH6.0,1000ml）3、3%甲醇―H2O2溶液：用30%H2O2和80%甲醇溶液配制4、風(fēng)裱劑：a.甘油和0.5mmol/L碳酸鹽緩沖液（pH9.0–9.5）等量混合b.油和TBS（PBS）配制5、TBS/PBSpH9.0–9.5，適用于熒光纖維鏡標(biāo)本；pH7.0-7.4適

Western Blotting 操作步驟2021/03/11: 一、WesternBlotting實(shí)驗(yàn)步驟概述1、組織取材：組織塊稱重2、利用液氮、研缽粉碎組織塊3、加入RIPA緩沖液（每克組織3mlRIPA），PMSF（每克組織30μl，10mg/mlPMSF），利用Polytron進(jìn)一步勻漿（15,000轉(zhuǎn)/分*1分鐘）維持4℃4、加入PMSF（每克組織30μl，10mg/mlPMSF），冰上孵育30分鐘5、移入離心管4℃，約20,000g（約15,000轉(zhuǎn)）15分鐘6、上清液為細(xì)胞裂解液可分裝-20℃保存7、進(jìn)行Bradford比色法測定蛋白質(zhì)濃度8、

Western Blotting 問題解答2021/03/10: 1、膠片上存在反轉(zhuǎn)印象（如：亮的條帶、黑的背景）？原因：HRP的濃度過高；解決：稀釋HRP至少10倍。2、膜上有黃色或棕色的沉積？原因：HRP的濃度過高；解決：稀釋HRP至少10倍。3、在暗室中條帶過于明亮？原因：HRP的濃度過高；解決：稀釋HRP至少10倍。4、條帶的發(fā)光時間持續(xù)了至少8小時？原因：HRP的濃度過高；解決：稀釋HRP至少10倍。5、信號太弱或沒有？原因：1.太多的HRP積聚導(dǎo)致信號快速的消退；2.抗原或抗體的濃度不夠；3.轉(zhuǎn)印不成功；4.HRP或其他底物的效價降低。解決：1.稀

免疫組化問題解答2021/03/09: 1、染色過強(qiáng)？原因解決方法抗體濃度過高或孵育時間過長降低抗體滴度、抗體孵育時間：室溫1小時或4度過夜孵育溫度過高超過37度一般在室溫20-28度DAB顯色時間過長或濃度過高顯色時間不超過5-12分鐘，以顯微鏡下觀察為準(zhǔn)2、非特異性背景染色？原因解決方法操作過程中沖洗不充分每步?jīng)_洗3次每次5分鐘組織中含過氧化物酶未阻斷可再配置新鮮3%H2O2封閉孵育時間延長組織中含內(nèi)原性生物素正常非免疫動物血清再封閉血清蛋白封閉不充分血清蛋白封閉不充分3、染色弱？原因解決方法抗體濃度過低、孵育時間過短提高抗體濃度

綠色熒光蛋白標(biāo)記試劑盒2021/03/08: 綠色熒光蛋白標(biāo)記試劑盒一.試劑盒說明綠色熒光蛋白1962年在一種學(xué)名Aequoreavictoria的水母中發(fā)現(xiàn)。其基因所產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，在藍(lán)色波長范圍的光線激發(fā)下，會發(fā)出綠色螢光。這個發(fā)光的過程中還需要冷光蛋白質(zhì)Aequorin的幫助，且這個冷光蛋白質(zhì)與鈣離子(Ca2+)可產(chǎn)生交互作用。本產(chǎn)品將綠色熒光蛋白的基因插入慢病毒介導(dǎo)的載體中，通過flap-Ub啟動子過表達(dá)從而作為報告基因，在細(xì)胞中表達(dá)。常用于細(xì)胞標(biāo)記后移植追蹤，從而評估移植后細(xì)胞的歸巢以及治療效果等。二.試劑盒組份組份Cat：儲存條件

血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1熱點(diǎn)研究2021/03/04: PECAM-1簡介血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1（PECAM-1），又稱CD31抗原，是相對分子質(zhì)量為130kDa左右I型跨膜糖蛋白，為免疫球蛋白超家族細(xì)胞粘附分子中的一種,可在內(nèi)皮細(xì)胞、循環(huán)的血小板、單核細(xì)胞、中性細(xì)胞及T細(xì)胞亞群表面表達(dá)，是參與血小板黏附和聚集的關(guān)鍵因子,科研人員對其基因及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)已進(jìn)行了較為深入的研究。PECAM-1，是一種由染色體17q23.3上的PECAM1基因編碼的跨膜糖蛋白，CD31由Newman在90年的文章中*提出，通過血小板跨膜糖蛋白抗體的結(jié)合實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)新的免疫球

血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1（PECAM-1/CD31）熱點(diǎn)研究2021/03/04: PECAM-1簡介血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子-1（PECAM-1），又稱CD31抗原，是相對分子質(zhì)量為130kDa左右I型跨膜糖蛋白，為免疫球蛋白超家族細(xì)胞粘附分子中的一種,可在內(nèi)皮細(xì)胞、循環(huán)的血小板、單核細(xì)胞、中性細(xì)胞及T細(xì)胞亞群表面表達(dá)，是參與血小板黏附和聚集的關(guān)鍵因子,科研人員對其基因及蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)已進(jìn)行了較為深入的研究。PECAM-1，是一種由染色體17q23.3上的PECAM1基因編碼的跨膜糖蛋白，CD31由Newman在90年的文章中*提出，通過血小板跨膜糖蛋白抗體的結(jié)合實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)新的免疫球

丙烯酰胺凝膠電泳2021/03/03: 聚丙烯酰胺凝膠電泳是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的電泳方法。在這種支持介質(zhì)上可根據(jù)被分離物質(zhì)分子大小和分子電荷多少來分離。聚丙烯酰胺凝膠有以下優(yōu)點(diǎn)：①聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺和N，N'甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的大分子。凝膠有格子是帶有酰胺側(cè)鏈的碳-碳聚合物，沒有或很少帶有離子的側(cè)基，因而電滲作用比較小，不易和樣品相互作用。②由于聚丙烯酰胺凝膠是一種人工合成的物質(zhì)，在聚合前可調(diào)節(jié)單體的濃度比，形成不同程度交鏈結(jié)構(gòu)，其空隙度可在一個較廣的范圍內(nèi)變化，可以根據(jù)要分離物質(zhì)分子的大小，選擇合適的凝膠成分，

生物素、親和素、鏈霉親和素相關(guān)產(chǎn)品2021/03/02: 生物素－親和素系統(tǒng)(Biotin-Avidin—System,BAS)是70年代末發(fā)展起來的一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)。隨著各種生物素衍生物的問世，BAS很快被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、免疫學(xué)、分子生物學(xué)等各個研究領(lǐng)域。近年大量研究證實(shí)，生物素—親和素系統(tǒng)幾乎可與目前研究成功的各種標(biāo)記物結(jié)合。生物素與親和素之間高親合力的特異性結(jié)合以及多級放大效應(yīng)，使BAS免疫標(biāo)記和有關(guān)示蹤分析更加靈敏。目前它已廣泛用于微量抗原/抗體定性、定量檢測及定位觀察研究，還可以制成親和介質(zhì)用于上述各類反應(yīng)體系中反應(yīng)物的分離和純化。生

植物吲哚乙酸（IAAAB）酶聯(lián)免疫分析2021/03/01: 植物吲哚乙酸（IAAAB）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T3μg/L-110μg/L使用目的：本試劑盒用于測定植物組織，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中吲哚乙酸（IAAAB）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中植物吲哚乙酸（IAAAB）水平。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入吲哚乙酸（IAAAB），再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)

人細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK） ELISA檢測試劑盒2021/02/26: 試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷人（Human）細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），計(jì)算樣品活

人磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（p-ERK） ELISA檢測試劑盒2021/02/26: 本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷人（Human）磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（p-ERK）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（p-ERK）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的磷酸化細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶（p-ERK）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下

霍亂弧菌檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序2021/02/25: 1方法來源1.1進(jìn)出口食品中霍亂弧菌檢測方法(SN/T1022-2010)1.2衛(wèi)生部《霍亂防治手冊》第六版(2013年)2適用范圍本程序規(guī)定了食品中霍亂弧菌（Vibriocholera）的檢驗(yàn)方法。本程序適用于食品中霍亂弧菌的檢驗(yàn)。3設(shè)備和材料除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：3.1恒溫培養(yǎng)箱：36℃±1℃。3.2恒溫培養(yǎng)箱：41.5℃±1℃。3.3冰箱：2℃～5℃。3.4恒溫水浴箱：36℃±1℃。3.5均質(zhì)器或無菌乳缽。3.6天平：感量0.1g。3.7無菌試管：18mm

細(xì)胞培養(yǎng)基本方法2021/02/23: 一)準(zhǔn)備和安裝過濾器清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，15磅20min進(jìn)行高壓滅菌處理。在超凈臺內(nèi)打開過濾器架好，膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中，出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾，過濾后要檢查濾膜是否完好無損。(二)合成培養(yǎng)基的配制1、根據(jù)細(xì)胞目錄中的說明，按下表選擇合適品牌及貨號的培養(yǎng)基干粉，用適量超純水充分溶解。培養(yǎng)基品牌貨號培養(yǎng)基品牌貨號D-MEM/F-12GIBCO12400024Dulbecco'sModifiedEagleMedium

馬鈴薯紡錘體塊莖類病毒（PSTVd）試劑盒說明書2021/02/22: 馬鈴薯紡錘體塊莖類病毒(PSTVd)試劑盒說明書本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的：本試劑盒用于測定植物組織，細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中馬鈴薯紡錘體塊莖類病毒(PSTVd)表達(dá)。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中馬鈴薯紡錘體塊莖類病毒(PSTVd)表達(dá)。用純化的馬鈴薯紡錘體塊莖類病毒(PSTVd)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中馬鈴薯紡錘體塊莖類病毒(PSTVd)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的馬鈴薯紡錘體塊莖類病毒(PSTVd)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶

大腸菌群及大腸桿菌測定（FDA與ISO對比）2021/02/22: 大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。大腸菌群不是細(xì)菌學(xué)上的分類命名，而是根據(jù)衛(wèi)生學(xué)方面的要求，提出的與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，即作為食品、水體等是否受過人畜糞便污染的指示菌，這些細(xì)菌在生化及血清學(xué)方面并非*一致。根據(jù)進(jìn)一步的生化試驗(yàn)，可將這群細(xì)菌再分為大腸艾希氏菌（俗稱大腸桿菌）、弗氏檸檬酸桿菌、肺炎克雷伯氏菌和陰溝腸桿菌等。大腸桿菌的定義大腸桿菌（也稱大腸埃希氏菌），分類于腸桿菌科，歸屬于埃希氏菌屬。大腸桿菌指革蘭氏陰性無芽孢桿菌、乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣、IMVi

草莓潛隱環(huán)斑病毒（SLRSV）試劑盒說明書2021/02/22: 草莓潛隱環(huán)斑病毒(SLRSV)試劑盒說明書本試劑盒僅供研究使用。96T使用目的：本試劑盒用于測定組織，細(xì)胞及相關(guān)樣本中草莓潛隱環(huán)斑病毒(SLRSV)水平。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中草莓潛隱環(huán)斑病毒(SLRSV)表達(dá)。用純化的草莓潛隱環(huán)斑病毒(SLRSV)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中草莓潛隱環(huán)斑病毒(SLRSV)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的草莓潛隱環(huán)斑病毒(SLRSV)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。

WB內(nèi)參選擇知多少？2021/02/20: 免疫印跡技術(shù)(Westernblotting,WB)是蛋白定性和定量的金標(biāo)準(zhǔn)，因此廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究。由于Westernblot檢測包含多個步驟，樣品制備、上樣或轉(zhuǎn)膜等實(shí)驗(yàn)過程中任何細(xì)微的差異，都可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)論的不一致性，甚至*相悖。為了避免實(shí)驗(yàn)操作差異引起誤差，在任何WB檢測實(shí)驗(yàn)中，都需要設(shè)定合適的內(nèi)參。WB常見的應(yīng)用是研究生物樣品中蛋白質(zhì)豐度的變化。內(nèi)參的信號通常用來對目的蛋白的信號進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，需要強(qiáng)調(diào)的是內(nèi)參抗體應(yīng)該與實(shí)驗(yàn)抗體在相同的印跡上進(jìn)行。因此選擇的內(nèi)參蛋白必須是實(shí)驗(yàn)樣本中穩(wěn)定表

牛傳染性胸膜肺炎（CBPP） ELISA檢測試劑盒2021/02/19: 本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷牛（Bovine）傳染性胸膜肺炎（CBPP）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被傳染性胸膜肺炎抗體微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測抗原，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標(biāo)本中傳染性胸膜肺炎（CBPP）的存在與否。樣品收集、處理及保存

人血管性血友病因子裂解蛋白酶ELISA檢測試劑盒2021/01/27: 本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷人（Human）血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS13/vWF-cp）ELISA檢測試劑盒使用說明書檢測原理試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被血管性血友病因子裂解蛋白酶（ADAMTS13/vWF-cp）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管性血友病因子裂解蛋白酶（A

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