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培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的新方法——膠原酶消化法2018/10/17: 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞具有高度分化潛能，基因穩(wěn)定、不易突變，不會引起腫瘤；無需配型、無排異，廣泛應(yīng)用于疾病治療及抗衰老研究。目前，在美容行業(yè)及針對亞健康群體的應(yīng)用，也越來越引人注目。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞臍帶是由包膜、華通氏膠、臍靜脈、臍動脈臍構(gòu)成。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞存在于華通氏膠中。由于存在數(shù)量少，用膠原酶消化后獲取的細(xì)胞量很少。另外，一般的膠原酶消化法獲取細(xì)胞時，膠原酶對細(xì)胞的傷害較大，培養(yǎng)出來的細(xì)胞狀態(tài)差。貼塊方法培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)細(xì)胞是普遍采用的方法，但是，細(xì)胞從組織中爬出來的時間長（10-20天，甚至更

4 分鐘教你學(xué)會多重 PCR 引物設(shè)計2018/10/17: 多元PCR(多重PCR，MultiplexPCR，MPCR)是指在一個PCR反應(yīng)中使用一個模板和幾對引物同時擴(kuò)增多個目的片段的PCR反應(yīng)。這項技術(shù)非常有用，他不僅可以提高PCR的產(chǎn)率還能提高DNA樣品的利用率。另一種形式的MPCR是組合PCR,組合PCR是在同一PCR反應(yīng)中使用幾個不同的模板和幾對引物。多元PCR和組合PCR往往被當(dāng)作同義詞使用。設(shè)計策略MPCR要求所有的引物對在同一條件下擴(kuò)增其各自的特異序列。大多數(shù)多元PCR反應(yīng)局限于擴(kuò)增5~10個目的片段，原因之一是反應(yīng)中，每另加入一對引物會

流式抗體選擇技巧系列Ⅰ——單色熒光標(biāo)記2018/10/17: 流式抗體選擇六步曲特異性靶蛋白：確定要檢測目的細(xì)胞特異性靶蛋白。種屬：嚴(yán)格按照待測樣本種屬選擇抗體。應(yīng)用領(lǐng)域：可用于流式實(shí)驗(yàn)，說明書中明確標(biāo)注經(jīng)FCM實(shí)驗(yàn)測試，有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)圖和用量說明；若還可做熒光染色等多用途則更佳。抗體克隆號：同一抗體多個克隆號的情況下，可以選擇熒光標(biāo)記種類多的那個克??；若文獻(xiàn)中有被引用，首先選擇被引用的抗體克隆號。盡量選擇直接標(biāo)記的抗體：直接標(biāo)記抗體是指熒光素標(biāo)記的單克隆或多克隆一抗，一步染色，操作方便，影響因素少，結(jié)果準(zhǔn)確。同型對照：與一抗的來源，Ig分型和標(biāo)記*一致，使用

原代角質(zhì)形成細(xì)胞的相關(guān)分離培養(yǎng)方法2018/10/16: 原代細(xì)胞在相關(guān)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)使用過程中越來越多，人們不再單單趨于使用細(xì)胞系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，因?yàn)榧?xì)胞系常常由于體外長期培養(yǎng)，而容易丟失原有的生物學(xué)特性，對藥物處理的反應(yīng)差距越來越大。原代細(xì)胞剛從組織中分離開，生物學(xué)特性未發(fā)生很大變化，仍保留原來的遺傳特性，也接近和反應(yīng)體內(nèi)生長特性，原代細(xì)胞的活力和生長狀態(tài)都比較好，細(xì)胞的純度和基因保留可達(dá)到90%以上，適宜用于藥物敏感性試驗(yàn)、細(xì)胞分化等試驗(yàn)研究，使用原代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可以獲得更準(zhǔn)確的研究和數(shù)據(jù)。為了更好的服務(wù)于廣大科研工作者，技術(shù)人員特提供了角質(zhì)形成細(xì)胞分

無處不在的組蛋白修飾2018/10/09: 2018年5月11日，浙江*學(xué)院葛楚天，錢國英及杜克大學(xué)BlancheCapel研究組合作在學(xué)術(shù)期刊Science雜志發(fā)表題為「ThehistonedemethylaseKDM6Bregulatestemperature-dependentsexdeterminationinaturtlespecies」探究組蛋白的甲基化對巴西龜性別決定的影響。2018年8月30號，香港大學(xué)課題組在NatureCommunications發(fā)文「Lysinebenzoylationisahistonemarkre

沒想過我養(yǎng)的細(xì)胞會凍壞，過來人告訴你幾點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)2018/10/08: 想要長期持有一個細(xì)胞系，策略是進(jìn)行低溫保存。這可以有效防止因污染或技術(shù)原因?qū)е碌募?xì)胞損失。而低溫保存對于維持細(xì)胞株的遺傳特性也極為重要?？此坪唵蔚膬龃婕?xì)胞，如果操作不當(dāng)，將導(dǎo)致長期培養(yǎng)的細(xì)胞付之東流。作為一個吃過虧的人，告訴你細(xì)胞凍存是否成功取決于以下四個關(guān)鍵因素（文章結(jié)尾有福利，等不及的小伙伴可以拉至底部）。一、適當(dāng)?shù)奶幚砑皽睾褪占?xì)胞凍存前檢查凍存前，細(xì)胞應(yīng)處于指數(shù)生長期，確保細(xì)胞處于健康狀態(tài)。理想情況下，應(yīng)在收獲細(xì)胞前24小時更換培養(yǎng)基。建議對培養(yǎng)物進(jìn)行微生物污染物，特別是支原體的檢測，并

細(xì)胞培養(yǎng)過程中有小黑點(diǎn)怎么辦？2018/10/08: 在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中，總是能遇到這樣的問題——細(xì)胞中有小黑點(diǎn)，一些難消化長得慢的細(xì)胞總會出現(xiàn)黑點(diǎn)，還有一些有漂浮的死細(xì)胞，崩解之后形成黑點(diǎn)和碎片，但還有一些是霉菌或細(xì)菌真菌類的污染也會形成小黑點(diǎn)，小黑點(diǎn)對細(xì)胞狀態(tài)和實(shí)驗(yàn)效果等都有影響，怎么區(qū)別小黑點(diǎn)是細(xì)胞碎片，細(xì)胞核還是細(xì)菌等污染呢？更多細(xì)胞小黑點(diǎn)的分析，請多關(guān)注上海雅吉生物科技有限公司，這里我們先介紹一種稱之為黑膠蟲的細(xì)胞小黑點(diǎn)的污染特點(diǎn)及解決方案產(chǎn)品。我們稱之為「黑膠蟲」及其分解復(fù)合物是一種常見的細(xì)胞污染物，其與細(xì)胞共生，隨細(xì)胞傳代而傳代，通常

小心翼翼還是養(yǎng)不好細(xì)胞？師兄說了一個讓我驚呆的原因2018/09/29: 細(xì)胞培養(yǎng)基成分復(fù)雜，包括鹽類、糖類、維生素、氨基酸、代謝前體、生長因子、激素和微量元素。對這些物質(zhì)的需求因細(xì)胞而有差異，這也導(dǎo)致大量的不同培養(yǎng)基配方出現(xiàn)。主要碳源物質(zhì)通常是葡萄糖，有時也會使用半乳糖代替，這是因?yàn)榘肴樘堑拇x速度較慢。氨基酸（尤其是L-谷氨酰胺）和丙酮酸鹽也可作為碳源。除了營養(yǎng)成分，培養(yǎng)基也會幫助維持培養(yǎng)體系的pH和滲透壓。pH的維持依靠一種或多種緩沖液體系，常見的包括CO2/NaHCO3、磷酸鹽和HEPES等，血清也可以作為*培養(yǎng)基的緩沖液。1、碳酸氫鈉和CO2細(xì)胞的存活和生長

手把手教你用 PS & AI 做出漂亮的 WB 結(jié)果圖2018/09/28: 在科研生活中，我們不可避免地會遇到整理數(shù)據(jù)這一環(huán)節(jié)。作為生物學(xué)研究生，常見的數(shù)據(jù)不外乎WesternBlot圖片、統(tǒng)計圖表、照片、模式圖等，文獻(xiàn)中那種一個里面有A,B,C,D等多個圖片的Fig，就是經(jīng)過排版的Fig。雖然我們也可以用PPT制作Fig，但是這樣制作出來的Fig只適用于做工作匯報，不適于投稿。在這我們將使用PS和AI來制作Fig，其中PS主要用于修改圖片的對比度，裁剪圖片，在不改變圖片數(shù)據(jù)的情況下去除圖片的雜物，使圖片變得更加漂亮；AI主要用于排版圖片，使圖片排列整齊，以達(dá)到雜志的要

WB操作規(guī)程2018/09/28: 一、設(shè)備和試劑1．設(shè)備①電泳電源Mini-PROTEAN3ElecreophoresisCell,MiniTeans-BlotModule,andPowerPacBasicPowerSupply(BIO-RAD,Catalog#165-3323)②電泳儀及附件Mini-PROTEAN3ElecreophoresisCell(BIO-RAD,Catalog#165-3301)③電轉(zhuǎn)儀及附件MiniTeans-BlotElecreophoresisTransferCell(BIO-RAD,Catal

細(xì)胞慢病毒轉(zhuǎn)染方法和步驟2018/09/27: 一、貼壁細(xì)胞的轉(zhuǎn)染1.提前一天將細(xì)胞接種6孔板，每孔細(xì)胞數(shù)約為1×105個，2.第二天，待細(xì)胞貼壁后，換液，3.加入1mL*培養(yǎng)基，再加20μL慢病毒，4.混勻后繼續(xù)培養(yǎng)，5.12h后觀察細(xì)胞狀態(tài)，并更換為新鮮培養(yǎng)基，6.轉(zhuǎn)染1周后，觀察細(xì)胞生長情況，中途可以換液，保持細(xì)胞的活性,7.當(dāng)細(xì)胞長滿板底后，傳代至T25培養(yǎng)瓶中。二、懸浮細(xì)胞的轉(zhuǎn)染1.提前一天將細(xì)胞接種6孔板，每孔細(xì)胞數(shù)約為3×105個，2.第二天，換液后加入1mL*培養(yǎng)基，再加20μL慢病毒，3.混勻后繼續(xù)培養(yǎng)，4.12h后觀察細(xì)胞

PKA-G9a 對胚胎干細(xì)胞早期分化的調(diào)控作用2018/09/27: 胚胎的形成是一個機(jī)體高度協(xié)調(diào)配合的過程，其分化過程被嚴(yán)格控制，但具體的調(diào)控機(jī)制尚不清楚。胚胎干細(xì)胞是分離自著床前胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)的細(xì)胞系，在體外特定條件下可長期培養(yǎng)，具有分化性，是體外研究細(xì)胞分化過程的合適選擇。環(huán)磷酸腺苷(cAMP,cyclicadenosinemonophosphate)-環(huán)磷酸腺苷依賴的蛋白激酶A(PKA,proteinkinaseA)信號通路分布于多種細(xì)胞中，可以調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和分化(如骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、牙髓干細(xì)胞等)。cAMP為經(jīng)典的信號通路是通過激活PKA實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞功能的

非洲豬瘟病毒檢測試劑盒說明書2018/09/25: 通用名稱：非洲豬瘟病毒檢測試劑盒（實(shí)時熒光PCR法）英文名稱：AfricanSwineFevervirusDetectionKit(Real-TimePCRMethod)【包裝規(guī)格】25T/盒&50T/盒【預(yù)期用途】本試劑盒適用于非洲豬瘟病毒檢測，可用于臨床非洲豬瘟病毒感染的輔助診斷，但不作確診使用?！緳z驗(yàn)原理】本試劑盒針對非洲豬瘟病毒的高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針，在反應(yīng)體系中含非洲豬瘟病毒基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道信號

原代細(xì)胞分離培養(yǎng)2018/09/25: 經(jīng)常在網(wǎng)上看到很多人為了如何正確分離培養(yǎng)原代細(xì)胞而多方求救，也不乏高人不吝賜教，相關(guān)可查的文獻(xiàn)也不少，但是各式各樣的疑問還是層出不窮。恰好我們的團(tuán)隊每天都在跟細(xì)胞打交道，也遇到過很多人正面臨的問題，于是有了下面這些心得體會，如若能給你帶來哪怕一絲一毫的幫助，愿你轉(zhuǎn)發(fā)。原代細(xì)胞分離常采用的方法有以下兩種：一、懸浮細(xì)胞的分離方法1、將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中，1000rpm/min的低速離心5分鐘；2、去掉上清，離心沉淀用無鈣、鎂的PBS清洗后1000rpm/min離心5分鐘。此

人血吸蟲IgM抗體（Sch-IgM）試劑盒說明書2018/09/20: 人血吸蟲IgM抗體（Sch-IgM）試劑盒說明書本試劑盒僅供研究使用。48T使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中血吸蟲IgM抗體（Sch-IgM）表達(dá)。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中人血吸蟲IgM抗體（Sch-IgM）表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中血吸蟲IgM抗體（Sch-IgM）相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色

新型大鼠、小鼠心臟干細(xì)胞（祖細(xì)胞）分離培養(yǎng)方法2018/09/20: 心臟病是引起人類死因的一種代表性疾病，如果失去了心肌細(xì)胞，就會引起心力衰竭等心臟疾病。心肌細(xì)胞幾乎沒有再生能力，一旦失去就不能再生。從前認(rèn)為心臟當(dāng)中沒有干細(xì)胞，所以心肌沒有再生能力，但是近年的研究表明，成體心臟內(nèi)部也會存在一些心肌干細(xì)胞。賽百慷公司開發(fā)出一種新型心肌干細(xì)胞培養(yǎng)方法，希望能為這項研究的科學(xué)工作者提供幫助。細(xì)胞培養(yǎng)操作：1.摘取出心臟，去掉心臟包膜，把心尖部分剪下來（心尖部分是心室部分，心肌細(xì)胞含量高）。2.剪碎，移入15或50ml離心管中，用PBS多洗幾遍，盡量把血細(xì)胞洗掉。3.加

原代細(xì)胞免疫熒光鑒定步驟2018/09/20: 為了更好的幫助客戶提供真實(shí)的原代細(xì)胞，使用免疫熒光鑒定出提取的細(xì)胞類型，免疫熒光技術(shù)又稱熒光抗體技術(shù)，是標(biāo)記免疫技術(shù)中發(fā)展早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。該技術(shù)的主要特點(diǎn)是：特異性強(qiáng)、敏感性高、速度快。一下是賽百慷技術(shù)人員提供的免疫熒光細(xì)胞鑒定的步驟，僅做參考：1.細(xì)胞爬片取4片玻璃片于24孔板中，每孔加入培養(yǎng)基1mL，加入細(xì)胞0.02million個/孔。置培養(yǎng)箱2h或過夜。2.固定細(xì)胞爬片后，吸出培養(yǎng)基，用PBS洗一遍，加入4%PFA于4℃固定30mi

如何學(xué)會分離培養(yǎng)人的成纖維細(xì)胞？2018/09/20: 成纖維細(xì)胞（又稱皮膚成纖維細(xì)胞）屬于由中胚層分化而來的間質(zhì)細(xì)胞。細(xì)胞來源于人正常的皮膚組織，成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)方式的細(xì)胞，由于這些細(xì)胞非常容易培養(yǎng)，它們已經(jīng)被廣泛用于細(xì)胞和分子生物學(xué)研究中。一般而言，成纖維細(xì)胞能夠分泌I型和III型膠原等細(xì)胞外基質(zhì)，并且研究表明不同器官中的成纖維細(xì)胞有顯著的不同。傷口修復(fù)時，成纖維細(xì)胞由可增殖，可遷移的表型變?yōu)橛惺湛s性的，可重塑基質(zhì)的表型，同時，它們會分泌大量的透明質(zhì)酸來應(yīng)對修復(fù)時的炎癥反應(yīng)。以下是賽百慷提供的一種人成纖維細(xì)胞的制備方式（僅供參考）：首先在

NK 細(xì)胞因子法體外培養(yǎng)的方法2018/09/20: Nk細(xì)胞又稱自然殺傷細(xì)胞，是人體內(nèi)抗癌活性強(qiáng)的免疫細(xì)胞之一，它在骨髓中發(fā)育成熟后，主要存在于外周血、肝臟、腹膜腔和胎盤中，在遇到腫瘤病變細(xì)胞時就會把它們殺死，同時也會刺激身體產(chǎn)生抗腫瘤的免疫反應(yīng)，所以被醫(yī)學(xué)界稱為「抗癌的道防線」。NK細(xì)胞主要分布于外周血，占外周血淋巴細(xì)胞總數(shù)的5-10％，無需抗原提呈細(xì)胞作為中介提呈抗原，也無需抗體幫助，可直接清除衰老細(xì)胞、變性細(xì)胞、癌細(xì)胞及病毒感染細(xì)胞等。NK細(xì)胞屬于白細(xì)胞的一種，它是人體忠誠的衛(wèi)士，主要任務(wù)就是消滅那些已經(jīng)被病毒感染的細(xì)胞，從而把病毒消滅在「

分光光度計測DNA含量的protocol2018/09/19: 打開機(jī)器等待加熱在使用前*清洗玻璃試管，如果使用2，則確保它們是一對“配對”。在DaveAndersons灣，然后按Goto？‘260’壓入’機(jī)器將改變波長。將1ml水插入機(jī)器中，按“自動歸零”，然后將波長設(shè)置為260，用水自動調(diào)零。放5ML的DNA濃度？放入一個干凈的匹配試管中，加入1ml水，并用覆蓋物和倒置物混合。將試管插入機(jī)器并記錄讀數(shù)，即0.030。再次執(zhí)行步驟3，但這次將波長設(shè)置為280，注意閱讀。重復(fù)程序3次，用新的DNA樣本記錄A260和A280的讀數(shù)。取A260讀數(shù)的平均值，將數(shù)

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