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挑選適合細胞生長的血清幾個方法2023/01/16

血清是一種純天ran培養(yǎng)基，含有細胞生長繁殖所需的多種營養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、多肽等，多用于細胞培養(yǎng)、生物制品及診斷試劑的。血清的主要成分是蛋白質(zhì)，血清的組成成分與含量常常與供血動物性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件有關(guān)。那么，如何挑選適合細胞生長的血清？總結(jié)幾點方法如下：1.看產(chǎn)地不同產(chǎn)地的胎牛血清，品質(zhì)也是相差甚遠。值得注意的是，胎牛血清是動物源生物制品，我國對于動物源制品的進口一直有很嚴格的規(guī)定，目前我國批準進口的胎牛血清來源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭，合法正規(guī)途徑進口的胎牛血清必須在產(chǎn)品包裝上標

中和抗體ELISA檢測試劑盒實驗步驟2023/01/10

中和抗體ELISA檢測試劑盒利用競爭法ELISA原理，當樣本中存在中和抗體時與刺突RBD蛋白結(jié)合，從而阻止了RBD與預(yù)包被板底的ACE2蛋白的結(jié)合，用于病毒中和抗體的定量檢測。實驗步驟：1.將100ul2ug/mlACE2加入至每孔，4℃孵育過夜；2.第二天，50ul稀釋好的樣本+50ul刺突RBD蛋白混合后，室溫孵育2h；3.包被后，移除孔中的ACE2蛋白，加入稀釋好的封閉液，室溫封閉1h；4.移除孔中的封閉液，用200ulwashbuffer洗滌一次；5.將孵育好的樣本+刺突RBD蛋白混合液

細胞培養(yǎng)基本操作過程2023/01/05

細胞培養(yǎng)技術(shù)指的是細胞在體外條件下的生長，在培養(yǎng)的過程中細胞不再形成組織（動物）。培養(yǎng)物是單個細胞或細胞群。細胞在培養(yǎng)時都要生活在人工環(huán)境中，由于環(huán)境的改變，細胞的移動或受一些其他因素的影響，培養(yǎng)時間加長，傳代導(dǎo)致細胞出現(xiàn)單一化型。細胞培養(yǎng)基本操作過程以下幾點：1.準備工作：準備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試。2.取材：在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞(視實驗?zāi)康亩?，經(jīng)過一定的處理(如消化分

標準品梯度稀釋解析2022/12/19

下面標準品梯度稀釋解析:1、標準品稀釋液的選擇：若血清、血漿、組織勻漿樣本，用試劑盒中的標準品稀釋液，梯度稀釋標準品。若細胞上清樣本，建議用細胞培養(yǎng)基梯度稀釋標準品。2、耗材準備：準備8個1.5Ml離心管，寫上S1-S7、空白。3、梯度稀釋：根據(jù)說明書，每管加入等體積的標準品稀釋液（培養(yǎng)基）。吸取同體積溶解好的標準品到S1管中，吹打10次混勻，渦旋5S。從S1管中吸取同體積溶液到S2管，吹打10次混勻，渦旋5s。同法稀釋S3-S7濃度。4、空白:標準品稀釋液（培養(yǎng)基）作為空白即零濃度。注意：梯度

蛋白酶抑制劑的作用解讀2022/12/13

蛋白酶抑制劑從廣義上指與蛋白酶分子活性中心上的一些基團結(jié)合，使蛋白酶活力下降，甚至消失，但不使酶蛋白變性的物質(zhì)。從放線菌發(fā)酵液中分離到亮肽素、抗痛素、糜蛋白酶抑素、抑彈性蛋白酶醛、抑胃蛋白酶素、磷酰胺素等，能分別抑制胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、糜蛋白酶、彈性蛋白酶、胃蛋白酶、金屬蛋白酶等各種蛋白酶。都屬于蛋白酶抑制劑。蛋白酶抑制劑的作用特點：是基于肽類的化合物，它們或競爭性抑制蛋白酶活性或作為互補蛋白酶活性點的抑制劑。這類藥wu能抑制蛋白酶的活性，其主要作用于艾滋病病毒復(fù)制的后階段，由于蛋白酶被抑制，

小鼠ELISA試劑盒收集標本注意事項2022/12/06

ELISA的檢測目的是為了實驗提供準確的實驗依據(jù)，為了保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，在收集標本前都必須有一個完整的計劃。1、每個樣本量收集體積=100ulx檢測種類，如果要做復(fù)孔，標本量收集體積=100ulx檢測種類x2。2、樣本收集后若在一周內(nèi)進行檢測可保存于2-8°C，若不及時檢測，請進行分裝，凍存于-20°或-80°C，避免反復(fù)凍融3、試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍，建議實驗前通過相關(guān)文獻預(yù)估樣本中待測物的濃度并通過預(yù)實驗確定樣本

RT-PCR反應(yīng)靈敏度提高具體方式2022/11/25

PCR是一種選擇性體外擴增DNA或RNA片段的方法，即通過試管中進行的DNA復(fù)制反應(yīng)，使極少量的基因組DNA或RNA樣品中特定基因片段在短短幾小時內(nèi)擴增上百萬倍。簡單說，就是我們在體外模仿體內(nèi)DNA復(fù)制的過程，混合DNA模板、合適的引物、足夠的4種dNTP、耐熱DNA聚合酶以及適宜的體系后，在一定溫度和時間條件下，進行的DNA擴增。PCR有很多種，其中RT-QPCR(實時熒光定量)原理：基于PCR反應(yīng)的技術(shù)提升與延伸，有染色法和熒光探針法。RT-PCR反應(yīng)體系的靈敏度提高具體方式有以下幾種：1、

化學(xué)實驗室個人防護措施及安全注意事項2022/11/14

在實驗室做實驗，一定要注意實驗的安全，畢竟化學(xué)藥品大多數(shù)都是電郵一定毒性的，一旦出現(xiàn)問題，影響不容小覷，甚至可能會危及生命?；瘜W(xué)實驗室個人防護措施：1、眼睛及臉部的防護（1）、全防護眼鏡（眼睛及臉部是實驗室中最易被事故所傷害的部位，因而對他們的保護尤為重要。實驗室內(nèi)，氖實驗人員必須戴安全防護眼鏡（2）、當化學(xué)物質(zhì)濺入眼睛后，應(yīng)立即用水徹di沖洗。沖洗時，應(yīng)將眼皮撐開，小心地用自來水沖洗數(shù)分鐘，再用蒸餾水沖，然后去醫(yī)務(wù)室進行治療。（3）、面部防護用具用于保護臉部和喉部。為了防止可能的爆炸及實驗產(chǎn)生

細胞培養(yǎng)實用技巧小結(jié)2022/11/07

細胞培養(yǎng)是指將細胞從動物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長的過程。細胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機械方法進行解離，也可以來源于已建立的細胞系或細胞株。一、細胞培養(yǎng)實用技巧:1.買細胞要去靠譜的地方買，比如ATCC或者素冉生物。一般上面會有針對細胞的介紹，這樣培養(yǎng)之前可以了解細胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。2.不管是買的細胞，還是別人惠贈的細胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染;迅速擴增凍存，凍存細胞復(fù)蘇后第二天*更換一次培養(yǎng)基。3.發(fā)現(xiàn)細胞有污染迅速處

ELISA實驗樣本的保存與處理2022/11/01

ELISA實驗過程中除了選擇靈敏度高的ELISA試劑盒之外，處理樣本的方法也是不一樣的。ELISA實驗中常見液體類樣本有血清、血漿、尿液、細胞上清、腦脊液等幾種。一、ELISA樣本的保存正常情況下，再5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4°C，標本再冰箱中保存時間過長會導(dǎo)致血清IgG聚合，是間接法的試劑本底加深，超過一周測定的需-20°C保存，凍結(jié)血清溶解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分不均，應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡，渾濁或有沉淀的血清標本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測。測抗體的血清的標本如需保存作多次檢測，以少量

驗證生化試劑盒是否適合使用方法2022/10/24

通常生化試劑盒可分為液體單試劑和液體雙試劑，前者特別適用于半自動生化分析儀和小型自動生化分析儀，使用方便，缺點是穩(wěn)定性較差。與單試劑相比，雙試劑提高了抗干擾能力，具有穩(wěn)定性能較好，可消除樣品自身空白等特點。此外還有多項同測組合試劑、濃縮試劑等。對新的試劑盒，我們首先要查看其資質(zhì)是否齊全，是否為合法有效試劑，是否有相關(guān)的臨床試驗驗證等。其次，在本實驗室，可做以下工作來進行驗證是否適合使用。一、試劑空白吸光度用蒸餾水做空白，用zhi定的空白液加入試劑作為樣品測試，在測試主波長下，記錄測試啟動時的吸光

?PCR反應(yīng)污染原因與對策2022/10/17

PCR反應(yīng)的最大特點是具有較大擴增能力與很高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。一、污染原因1、標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染，或標本放置時，由于密封不嚴溢于容器外，或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中，由于吸樣槍污染導(dǎo)致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散，導(dǎo)致彼此間的污染。2、PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中，由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染.

ELISA實驗中洗板機洗板關(guān)鍵點2022/10/10

洗板機洗板人為因素少，速度快，條件恒定，但是使用洗板機洗板時應(yīng)注意以下三個關(guān)鍵點。1、洗滌參數(shù)主要的參數(shù)是洗滌量。自動洗板機會分配洗滌液。如果你之前遭遇過高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。江萊生物ELISA試劑盒的使用手冊中列出包被量。我們建議使用350µl洗滌液進行洗滌，以便清潔整個反應(yīng)孔的壁。一般來說，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。2、洗滌次數(shù)影響洗滌效果的主要參

關(guān)于抗體功能分類簡介2022/10/05

抗體是哺乳動物適應(yīng)性免疫系統(tǒng)對抗病原體的核心，它是在病原體刺激下由漿細胞（效應(yīng)B細胞）所分泌的一種免疫球蛋白，能夠識別并結(jié)合特異的病原體抗原，隨后通過介導(dǎo)中和作用、調(diào)理作用、效應(yīng)T細胞殺傷等來清除病原體。機體在抗原物質(zhì)刺激下，由B細胞分化成的漿細胞所產(chǎn)生的、可與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)的免疫球蛋白。因為初有人用電泳證明血清中抗體活性在γ球蛋白部分，故曾把抗體統(tǒng)稱為兩種(γ)球蛋白。后來證明，抗體并不都在γ區(qū);而且位于γ區(qū)的球蛋白，也不一定都具有抗體活性。1964年，世界衛(wèi)生組織舉行專門會議，將

細胞周期的測定原理與操作步驟2022/09/26

細胞周期的測定原理與操作步驟：一、原理1、細胞周期指細胞一個世代所經(jīng)歷的時間。從一次細胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個周期。細胞周期反應(yīng)了細胞增殖速度。2、單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法，但它不能代表細胞群體的周期，故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期。3、測定細胞周期的方法很多，有同位素標記法、細胞計數(shù)法等，這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法。4、BrdU（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養(yǎng)基后，可做為細胞DNA復(fù)制的原料，經(jīng)過兩個細胞周期后，細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/

標準新生牛血清保存與注意事項2022/09/19

標準新生牛血清(輻照滅菌)保存：1.需要保存的血清，必須存儲于-20℃至-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱保存請勿超過一個月時間。由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%，因此在凍存之前，必須預(yù)留一定的體積空間，以免發(fā)生污染或玻璃瓶破裂；2.血清的熱滅活在56℃溫度中加熱30分鐘，加熱過程中必須搖晃均勻。熱滅活的目的是使血清中的補體成分滅活，除非必須，不建議做這樣的處理，因為這會導(dǎo)致血清沉淀物顯著增多，從而影響血清質(zhì)量。補體參與反應(yīng)有：細胞毒作用、平滑肌細胞收縮、肥大細胞和血小板釋放組胺、增強吞噬作用、促進淋

上海撫生為大家介紹PCR反應(yīng)的引物2022/09/13

引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：1、引物長度：5-30bp，常用為20bp左右。2、引物擴增跨度：以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至0kb的片段。3、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串

溶液配制步驟與注意事項2022/09/05

溶液、試劑的穩(wěn)定性和準確度是保證理化分析質(zhì)量的前提，受到各實驗室的高度重視。但母液、標準物質(zhì)往往不能直接用于實驗分析，需要配制成不同濃度的標準溶液才能使用。配制后的試劑、溶液保存期因?qū)嶒炇噎h(huán)境、溶劑、器皿潔凈度、密封程度、使用頻次等條件而不一致，檢測標準或證書一般未作詳細規(guī)定，給理化實驗室標準溶液的管理帶來不便。由于各實驗室標準溶液存放條件相對固定，使用En值確定所使用標準溶液有效期，為大家定量確定溶液、試劑的有效期提供一種方法。溶液配制步驟:1.計算:計算配制所需固體溶質(zhì)的質(zhì)量或液體濃溶液的體

單克隆抗體基本概念2022/08/30

抗體(antibody)是一種通過效應(yīng)B細胞（漿細胞）分泌，用來鑒別和清除外源物質(zhì)如細菌、病毒等的一種“Y”形免疫球蛋白。通常，天然抗體具有2條較長、相對分子量較大的重鏈（H鏈），以及2條較短、相對分子量較小的輕鏈（L鏈）。鏈間由二硫鍵和非共價鍵連接形成一個的單體分子。按照生物學(xué)特征，整個抗體可進一步分為恒定區(qū)（C區(qū)）和可變區(qū)（V區(qū)）兩部分。由于自然界中存在各種各樣的病原體，而這些病原體的表面又存在諸多不同的蛋白質(zhì)，抗體要識別它們，其“Y”形結(jié)構(gòu)的兩端部分（也就是其可變區(qū)）也相應(yīng)是千變?nèi)f化的，從

PCR擴增儀的分類及性能指標2022/08/15

PCR擴增儀的種類總體來說，可以分成兩大類，即普通PCR擴增儀和實時熒光定量PCR擴增儀。一、普通PCR擴增儀1.普通PCR擴增儀即通常所謂的定性PCR擴增儀。2.梯度PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴增儀。3.原位PCR儀是由普通PCR儀衍生出的帶原位擴增功能的基因擴增儀。二、實時熒光定量PCR擴增儀1.金屬板式實時定量PCR儀，還可作為普通PCR儀使用，有的甚至帶梯度功能，可容納的樣本量大，無需特殊耗材，但溫度均一性欠佳，有邊緣效應(yīng)，標準曲線的反應(yīng)條件難以做到與樣品*一