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好的引物所具有的特點(diǎn)2022/08/08: 好的引物所具有的特點(diǎn)：1、典型的引物18到24個(gè)核苷長(zhǎng)。引物需要足夠長(zhǎng)，保證序列獨(dú)te性，并降低序列存在于非目的序列位點(diǎn)的可能性。但是長(zhǎng)度大于24核苷的引物并不意味著更高的特異性。較長(zhǎng)的序列可能會(huì)與錯(cuò)誤配對(duì)序列雜交，降低了特異性，而且比短序列雜交慢，從而降低了產(chǎn)量。2、選擇GC含量為40％到60％或GC含量反映模板GC含量的引物。3、設(shè)計(jì)5'端和中間區(qū)為G或C的引物。這會(huì)增加引物的穩(wěn)定性和引物同目的序列雜交的穩(wěn)定性。4、避免引物對(duì)3'末端存在互補(bǔ)序列，這會(huì)形成引物二聚體，抑制擴(kuò)增。5、避免3'末

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制條件和標(biāo)定2022/08/01: 一、配制的標(biāo)準(zhǔn)溶液必須具備8個(gè)基本條件：1、應(yīng)采用具有高純度的溶質(zhì)或基準(zhǔn)物質(zhì)(如金屬、金屬氧化物或金屬化合物;酸、堿、金屬有機(jī)化合物、適宜的鹽類(lèi)、有機(jī)溶劑等)。2、為確保配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的可靠性、準(zhǔn)確性,實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備、環(huán)境設(shè)施均應(yīng)滿(mǎn)足其要求,(應(yīng)有監(jiān)測(cè)、控制和記錄環(huán)境條件。特別對(duì)灰塵、電磁干擾、放射、溫度、濕度、供電等)。3、具有符合稱(chēng)量要求器具、應(yīng)有正確稱(chēng)量的電子分析天平,并通過(guò)周期性的檢定,有質(zhì)檢部門(mén)檢定的證書(shū)。4、要有配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的純度高的溶劑(采用雙重蒸餾去離子水、高純濃度的酸、堿或有機(jī)溶液

選擇合適二抗需考慮方面2022/07/25: 二抗是指用于靶向結(jié)合一抗的抗體。在多種免疫印跡、ELISA以及免疫熒光等免疫實(shí)驗(yàn)中，二抗經(jīng)常和一抗結(jié)合使用以檢測(cè)目標(biāo)蛋白。很多二抗都帶有標(biāo)記物，例如AlexaFluor熒光染料或辣根過(guò)氧化物酶（HRP），從而使二抗的信號(hào)可以被檢測(cè)到。實(shí)驗(yàn)中也可以使用帶有標(biāo)記物的一抗，但是二抗有很多優(yōu)點(diǎn)。無(wú)論是使用哪種一抗進(jìn)行檢測(cè)，使用二抗可便于更換不同的標(biāo)記物。例如，同樣的一抗可以與HRP標(biāo)記二抗一起用于免疫印跡，也可以與另一種AlexaFluor488熒光標(biāo)記二抗一起用于免疫熒光實(shí)驗(yàn)。另外，二抗結(jié)合在抗原位置

PCR反應(yīng)四個(gè)特點(diǎn)2022/07/18: PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫(經(jīng)常是60°C左右)時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶最適反應(yīng)溫度(72°C左右)，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。基于聚合酶的PCR儀實(shí)際就是一個(gè)溫控設(shè)備，能在變性溫度，復(fù)性溫度，延伸溫度之間很好地進(jìn)行控制。PCR反應(yīng)特點(diǎn)有下列四個(gè)：1、特異性強(qiáng)PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；②堿基配對(duì)原則；③TaqDNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；

詳解PCR反應(yīng)溫度條件2022/07/12: 基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對(duì)于較短靶基因(長(zhǎng)度為100～300bp時(shí))可采用二溫度點(diǎn)法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸(此溫度TaqDNA酶仍有較高的催化活性)。1.變性：在第一輪循環(huán)前,在94℃下變性5-10min非常重要,它可使模

蒸餾或精餾純化化學(xué)試劑方法2022/07/05: 蒸餾和精餾主要用于液體、或是加熱可成為液體的化學(xué)試劑，特別是用于有機(jī)化學(xué)試劑的純化。在蒸餾或精餾之前，有時(shí)可加入某些化學(xué)試劑，與欲純化的化學(xué)試劑中的雜質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成沸點(diǎn)更高（或更低）的物質(zhì)，在蒸餾或精餾是更容易除去。在蒸餾或精餾時(shí)，往往是除去最初餾出的餾分和最后剩下的餾分，兩頭除去的越多，得到的化學(xué)試劑純度就越高，但產(chǎn)率越低。下面介紹幾個(gè)用蒸餾或精餾方法純化的化學(xué)試劑：1.鹽酸的提純：（1）除去一般雜質(zhì)的鹽酸用三次離子交換水將一級(jí)鹽酸按鹽酸：水=7：3的體積比稀釋?zhuān)ɑ虬?：1稀釋?zhuān)创吮壤?

細(xì)菌鑒定生化反應(yīng)常見(jiàn)七種2022/06/21: 細(xì)菌鑒定生化反應(yīng)常見(jiàn)七種：1、糖(醇)類(lèi)發(fā)酵試驗(yàn)不同的細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖(醇)的酶,因而發(fā)酵糖(醇)的能力各不相同.其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物亦不相同,如有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣,有的產(chǎn)酸不產(chǎn)氣.酸的產(chǎn)生可利用指示劑來(lái)判定.在配制培養(yǎng)基時(shí)預(yù)先加入溟甲酚紫［PHS.2(黃色)一6.8(紫色)],當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí),可使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色.氣體產(chǎn)生可由發(fā)酵管中倒置的杜氏小管中有無(wú)氣泡來(lái)證明.例如：甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)。2、甲基紅(Methylred)試驗(yàn)(該試驗(yàn)簡(jiǎn)稱(chēng)MR試驗(yàn))很多細(xì)菌,如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,丙酮酸再被分

病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞保存防護(hù)方法2022/06/14: 病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞保存防護(hù)方法：一、防蛻變：1．防氧化：亞硫酸鈉、硫酸亞鐵、硫代硫酸鈉均易被氧化，瓶口應(yīng)涂臘。2．防碳酸化：硅酸鈉、過(guò)氧化鈉、苛性堿均易吸收二氧化碳，應(yīng)該涂臘。3．防風(fēng)化：晶體碳酸鈉、晶體硫酸銅應(yīng)進(jìn)行臘封，存放在地下室中。4．防分解：碳酸氫銨、濃硝酸受熱易分解，涂臘后，存放在地下室中。5．活性炭能吸附多種氣體而蛻變，（木炭亦同），應(yīng)放在干燥器中。6．黃磷遇空氣易自燃，永遠(yuǎn)保存水中，每15天查水一次：磷試劑瓶中加水、置于有水水糟中，上加鐘罩關(guān)閉。7．鉀、鈉保存在火油中。8．硫酸亞鐵溶

貼壁細(xì)胞與懸浮細(xì)胞細(xì)胞處理說(shuō)明2022/06/07: 以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說(shuō)明書(shū)僅供參考，具體操作還需要根據(jù)到貨時(shí)細(xì)胞密度，細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)等具體情況，酌情處理，如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo)。一．貼壁細(xì)胞客戶(hù)接收到細(xì)胞，用75%的酒精消毒（建議配制75%酒精的水是滅菌過(guò)的）培養(yǎng)瓶外部。肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。顯微鏡觀察細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右（可以傳代的情況下），細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度

細(xì)菌數(shù)量的測(cè)定的幾種方法2022/05/31: 1、顏色改變單位法（colourchangeunit,簡(jiǎn)稱(chēng)CCU）這種方法通常用于很小，用一般的比濁法無(wú)法計(jì)數(shù)的微生物，比如支原體等，因?yàn)橹гw的液體培養(yǎng)物是完-全透明的，呈現(xiàn)為清亮透明紅色，因此無(wú)法用比濁法來(lái)計(jì)數(shù)，由于支原體固體培養(yǎng)很困難，用cfu法也不容易計(jì)數(shù)，因此需要用特殊的計(jì)數(shù)方法，即CCU法。它是以微生物在培養(yǎng)基中的代謝活力為指標(biāo)，來(lái)計(jì)數(shù)微生物的相對(duì)含量的，下面以解脲脲原體為例，簡(jiǎn)單介紹其操作：（1）取12只無(wú)菌試管，每一管裝1.8ml解脲脲原體培養(yǎng)基。（2）在第1管加入0.2ml待測(cè)

淺談LAMP試劑盒技術(shù)優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)2022/05/23: 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（Loop-MediatedIsothermalAmplification，LAMP）是一種新型的核酸擴(kuò)增技術(shù)。反應(yīng)的過(guò)程主要分為循環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)起始物的形成和循環(huán)擴(kuò)增反應(yīng)。其基本原理是采用4/6條特異引物和具有鏈置換功能的DNA聚合酶，在65℃左右對(duì)核酸進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增。目前，該技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于人類(lèi)及動(dòng)植物細(xì)菌、真菌、寄生蟲(chóng)、病毒等病原體的快速檢測(cè)。LAMP技術(shù)具有下面的優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)：1）在恒溫的條件下實(shí)現(xiàn)核酸的擴(kuò)增，不需要熱循環(huán)儀；2）特異性高，采用4/6條特異引物識(shí)別目的基因上的6/8

免疫學(xué)那些名詞解釋你知道嗎？2022/05/18: 免疫學(xué)名詞解析：抗體：是B淋巴細(xì)胞接受抗原激活后增殖分化為漿細(xì)胞所合成分泌的一類(lèi)能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的、具有免疫功能的球蛋白。補(bǔ)體：補(bǔ)體是一種血清蛋白質(zhì)，存在于人和脊椎動(dòng)物血清及組織液中，不耐熱，活化后具有酶活性、可介導(dǎo)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)?？杀豢乖?抗體復(fù)合物或微生物所激活，導(dǎo)致病原微生物裂解或被吞噬?？赏ㄟ^(guò)三條既獨(dú)立又交叉的途徑被激活，即經(jīng)典途徑、旁路途徑和凝集素途徑。CK：細(xì)胞因子是由機(jī)體多種細(xì)胞分泌的小分子蛋白質(zhì)，通過(guò)結(jié)合細(xì)胞表面的相應(yīng)受體發(fā)揮生物學(xué)作用。MHC復(fù)合體：主要組織相容復(fù)合體

解析有關(guān)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)避光2022/05/09: ELISA試劑盒注意避光反應(yīng)的原因其實(shí)這個(gè)主要是看顯色的時(shí)候用的是什么底物了，OPD的話要避光，因?yàn)檫@種底物受光照后會(huì)自行變色，如果用TMB底物的話，就沒(méi)這么嚴(yán)格了，其他的步驟中像抗原綁定、洗滌之類(lèi)也都不用避光的，只有在做完二抗洗滌完上酶顯色底物的時(shí)候。因?yàn)榇蟛糠值牡孜飳?duì)光敏感的，見(jiàn)光會(huì)分解，所以要求避光操作。當(dāng)顯色完成后（顯色時(shí)間是比較短的，需要預(yù)先摸索好）加入顯色終止液后溶液顏色會(huì)在幾個(gè)禮拜之內(nèi)保持穩(wěn)定，也不用再避光了。其他反應(yīng)步驟加蓋封板膜的作用不是避光，而是防止反應(yīng)過(guò)程中有異物落入板孔，

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)常用步驟2022/05/05: 細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)常用步驟:1.轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1:1-1:2/脂質(zhì)體體積:DNA質(zhì)量)來(lái)轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無(wú)血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無(wú)血清培養(yǎng)基清洗一次。5.加入混合液，將細(xì)胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個(gè)小時(shí)

細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢可能原因及解決方法2022/04/24: 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)中的基礎(chǔ)，養(yǎng)不好細(xì)胞，后續(xù)的實(shí)驗(yàn)都難以開(kāi)展。而細(xì)胞培養(yǎng)中也時(shí)常會(huì)有各種狀況發(fā)生，例如細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢。現(xiàn)了解細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢可能原因及解決方法?？赡茉颍号囵B(yǎng)液及培養(yǎng)方法有誤；更換不同培養(yǎng)液或血清也可能導(dǎo)致生長(zhǎng)緩慢。培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必須成分如生長(zhǎng)因子耗盡或缺乏。培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；接種細(xì)胞起始濃度太低；細(xì)胞老化；支原體污染。解決方法：檢查培養(yǎng)液和培養(yǎng)方法是否正確，比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液；換入新鮮配置培養(yǎng)液，或補(bǔ)加生長(zhǎng)因子；用無(wú)抗生素培

細(xì)胞凍存和復(fù)蘇操作過(guò)程注意事項(xiàng)2022/04/19: 那么在細(xì)胞凍存和復(fù)蘇實(shí)際操作過(guò)程中應(yīng)注意哪些事項(xiàng)呢？1、凍存和復(fù)蘇最好用新配制的培養(yǎng)液。2、DMSO應(yīng)過(guò)濾除菌，甘油用高壓消毒。3、細(xì)胞懸液分裝凍存時(shí)要迅速，均勻。安瓿封口后先放入0.05‰美藍(lán)溶液中，使冷凍保護(hù)劑分布均衡，且可檢出有滲漏的壞安瓿。安瓿上貼上標(biāo)簽，作好記錄，包括細(xì)胞的種屬、來(lái)源、代數(shù)、凍存日期、數(shù)量、凍存位置、備注等。4、細(xì)胞降溫應(yīng)逐步進(jìn)行，先以每分鐘降1～3℃的速度降至-30℃，再加速以15～30℃/分鐘降至-150℃，隨即迅速轉(zhuǎn)入液氮。5、復(fù)蘇時(shí)，取出后立即放入37℃水浴中，

支原體污染的檢測(cè)及鑒定方法2022/04/13: 支原體污染的檢測(cè)及鑒定方法：1、分離培養(yǎng)法支原體的病原學(xué)檢測(cè)主要是從被污染的細(xì)胞、雞胚中分離培養(yǎng)出支原體來(lái)確定，分離培養(yǎng)法是檢測(cè)支原體污染中最為可靠準(zhǔn)確的方法。但是支原體對(duì)環(huán)境的影響敏感，容易被滅活，而且分離培養(yǎng)操作相對(duì)繁瑣，所需時(shí)間較長(zhǎng)，因此只能夠?qū)χгw污染進(jìn)行定性觀察。分離培養(yǎng)法在常規(guī)的支原體檢測(cè)中多用于輔助其它檢測(cè)方法。2、DNA熒光染色法DNA熒光染色法較分離培養(yǎng)法縮短了檢測(cè)周期，主要用于細(xì)胞培養(yǎng)中污染支原體的檢測(cè)。DNA熒光染色法正是利用熒光染色劑雙苯咪唑（Bisbenzimidzo

分享?菌種使用注意事項(xiàng)2022/04/07: 菌種是用于發(fā)酵過(guò)程作為活細(xì)胞催化劑的微生物，包括細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類(lèi)。來(lái)源于自然界大量的微生物，從中經(jīng)分離并篩選出有用菌種，再加以改良，貯存待用于。菌種使用注意事項(xiàng)：1、復(fù)蘇質(zhì)控菌種前應(yīng)準(zhǔn)備適于該菌種生長(zhǎng)的培養(yǎng)基和培養(yǎng)設(shè)備，所有操作均應(yīng)在符合生物安全保護(hù)及無(wú)菌條件下進(jìn)行。2、啟開(kāi)質(zhì)控菌種前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面。在無(wú)菌條件下，按鋁蓋上的箭頭方向打開(kāi)塑蓋，撕開(kāi)鋁蓋，打開(kāi)西林瓶膠塞，加入復(fù)蘇液(購(gòu)買(mǎi)菌株包裝中提供)，將凍干菌種(干粉)制成懸浮液，然后用無(wú)菌滴管或移液器吸取適量，移

有關(guān)原代組織細(xì)胞利用酶常用解離方法2022/03/29: 人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。從原代組織上獲取單個(gè)細(xì)胞懸液的常用方法是利用酶的解聚作用。盡量縮短用酶處理細(xì)胞的時(shí)間，以獲得高的存活率?，F(xiàn)就來(lái)一起了解如何解離原代組織細(xì)胞。一、胰酶：1.先去除無(wú)關(guān)組織，然后用滅菌的解剖刀或剪刀將組織切成3-4mm大小碎塊。通過(guò)在不含鈣鎂的平衡鹽溶液進(jìn)行重懸來(lái)清洗組織碎塊。待組織碎塊沉降后去掉上清液。重復(fù)清洗2-3次。2.將裝有組織碎塊的容器置于冰上，去掉所有上清液。在

介紹實(shí)驗(yàn)室常見(jiàn)的抗凝劑2022/03/23: 實(shí)驗(yàn)室常用抗凝劑的選擇有以下幾種，也是事業(yè)單位考試中最常出現(xiàn)的幾個(gè)抗凝劑。一、枸櫞酸鹽主要為枸櫞酸三鈉，能與血液中鈣離子結(jié)合形成螯合物，從而阻止血液凝固。枸櫞酸鈉與血液的抗凝比例是1∶9或者1∶4，一般用于凝血和紅細(xì)胞沉降率的檢查。因其毒性小，也是輸血保養(yǎng)液的成分之一。二、草酸鹽常用的有草酸鈉、草酸鉀和草酸銨，草酸根與血液的鈣離子形成草酸鈣沉淀使鈣離子失去凝血作用而阻止凝血。此種抗凝劑溶解度大，抗凝作用強(qiáng)。2mg可使1mL血不凝。因草酸鹽與血液中鈣離子結(jié)合生成草酸鈣沉淀，可使血細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，

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