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細胞凍存操作步驟2022/03/15

細胞凍存操作步驟：1、預先配制凍存液：凍存液比例多種，根據(jù)細胞的特性進行調(diào)整凍存液的比例：5%—10%DMSO+20%—90%血清+0%—70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液；2、取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗1-2次；去掉培養(yǎng)瓶里的殘余血清；3、加入適量胰酶（濃度一般為0.25%），使胰酶覆蓋整個瓶，放入培養(yǎng)箱消化；4、細胞消化0.5-2min（具體時間根據(jù)鏡下形態(tài)判斷），顯微鏡下觀察細胞，細胞胞質(zhì)回縮，細胞間不再連接成片，此時加入*培養(yǎng)基終止消化；5、用巴氏吸管輕輕吹打細胞，形成細胞懸液，將細胞

?抗體的特異性免疫反應(yīng)有幾種2022/03/07

抗體是由各種抗原激活淋巴細胞，淋巴細胞進一步分化成熟為漿細胞而產(chǎn)生的，是機體的特異性免疫反應(yīng)，抗原可以包括以下幾種：第一、各種病原微生物感染之后，微生物的表面的蛋白可以作為抗原激活體內(nèi)的淋巴細胞，產(chǎn)生特異性的免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗體；第二、可以是致敏原，這種致敏原進入到體內(nèi)之后可以產(chǎn)生抗體IgE，等到再次接觸過敏原的時候可以引起過敏反應(yīng)，即變tai反應(yīng)；第三、先天存在的，比如ABO血型的抗原，所以針對ABO血型的抗體也是先天存在的，一般是IgM抗體，對于病原微生物進入到體內(nèi)之后可以產(chǎn)生兩種抗體，一種是I

簡介蛋白定量主要的兩種方法2022/03/01

蛋白定量的方法有很多種，應(yīng)用較多的主要有兩種：BCA蛋白定量檢測法和Bradford蛋白定量檢測法，市售的蛋白定量試劑盒也多基于上述兩種檢測方法而開發(fā)的。兩種方法均需配制蛋白標準品，蛋白與定量試劑經(jīng)過一定時間的反應(yīng)（BCA法反應(yīng)為37℃、20-30min，Bradford法反應(yīng)一般為37℃，5min），酶標儀讀取樣品的OD值，繪制的蛋白標準曲線，依據(jù)標準曲線計算WB蛋白的濃度。兩種檢測方法相比BCA法，Bradford法不僅節(jié)省反應(yīng)時間，也無需配置反應(yīng)試劑，簡單、快速、好用，推薦Bradford

細胞因子根據(jù)主要功能分類2022/02/22

1.白細胞介素(interleukin,IL)1979年開始命名。由淋巴細胞、單核細胞或其它非單個核細胞產(chǎn)生的細胞因子，在細胞間相互作用、免疫調(diào)節(jié)、造血以及炎癥過程中起重要調(diào)節(jié)作用，凡命名的白細胞介素的cDNA基因克隆和表達均已成功，已報道有三十余種(IL-1―IL-38)。2.集落刺激因子(colonystimulatingfactor,CSF)根據(jù)不同細胞因子刺激造血干細胞或分化不同階段的造血細胞在半固體培養(yǎng)基中形成不同的細胞集落，分別命名為G(粒細胞)-CSF、M(巨噬細胞)-CSF、GM

單克隆抗體的制備凍存及純化2022/02/15

單克隆抗體的制備和凍存：篩選出的陽性細胞株應(yīng)及早進行抗體制備，因為融合細胞隨培養(yǎng)時間延長，發(fā)生污染、染包體丟失和細胞死亡的機率增加?？贵w制備有兩種方法。一是增量培養(yǎng)法，即將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)液中分離單克隆抗體。該法需用特殊的儀器設(shè)備，一般應(yīng)用無血清培養(yǎng)基，以利于單克隆抗體的濃縮和純化。*普遍采用的是小鼠腹腔接種法。選用BALB/c小鼠或其親代小鼠，先用降植烷或液體石蠟行小鼠腹腔注射，一周后將雜交瘤細胞接種到小鼠腹腔中去。通常在接種一周后即有明顯的腹水產(chǎn)生，每只小鼠可收集5～10ml的腹

穩(wěn)定細胞株篩選2022/01/27

方法一：先把質(zhì)粒整合到染色體上后，用相應(yīng)的質(zhì)粒DNA中的抗性標志來篩選該細胞系，單克隆篩選穩(wěn)定細胞株。第一步：篩選濃度測定，以10~14天細胞全部死亡的抗生素濃度為篩選濃度；第二步：進行細胞接種，轉(zhuǎn)染實驗前天接種細胞，各種細胞的平板密度依據(jù)各種細胞的生長率和細胞形狀而定。進行轉(zhuǎn)染當天細胞密度應(yīng)達到60%~80%覆蓋；第三步：進行細胞轉(zhuǎn)染第四步：利用質(zhì)粒上含有的抗性選擇進行篩選，并鑒定篩選結(jié)果。方法二：應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒轉(zhuǎn)染，篩選穩(wěn)定細胞株。慢病毒可以攜帶外源基因隨機整合進基因組。轉(zhuǎn)染得到穩(wěn)定

冷凍切片實驗操作步驟及注意點2022/01/20

操作步驟：1、取出組織支承器，放平擺好組織，周邊滴上包埋劑，速放于冷凍臺上冰凍，用吸熱器壓住組織，至包埋劑與組織凍結(jié)成白色冰體即可切片（1~3分種）。2、將冷凍好的組織塊，夾緊于切片機持承器上，啟動粗進退鍵，轉(zhuǎn)動旋鈕，將組織修平。3、調(diào)好欲切的厚度，根據(jù)不同的組織而定，原則上是細胞密集的薄切，纖維多細胞稀的可稍為厚切，一般在5～10μm間。4、調(diào)好防卷板。制作冰凍切片，關(guān)鍵在于防卷板的調(diào)節(jié)上，這就要求操作者要細心，準確地將其調(diào)較好，調(diào)校至適當?shù)奈恢?。切片時，以切出完整、平滑的切片為準。切好的組織

小鼠鈣衛(wèi)蛋白elisa試劑盒試劑配制過程2022/01/11

1、標準品(1)從試劑盒中取出支標準品，于6000-10000rpm離心30。用1ml樣本稀釋液溶解，并用吸頭對準凍存管底部反復吸打5次以助溶解，充分混勻得到標準品S7，放置備用。(2)取7個1.5ml離心管(S0-S6)依次排列，各加入250μl樣本稀釋液。吸取250μl標準品S7到*個離心管中(S6)，輕輕吹打混勻。從S6中吸取250μl到第二個EP管中(S5)，輕輕吹打混勻。以此類推進行標準品的倍比稀釋。S0為樣本稀釋液。2、洗液工作液濃洗滌液按1:25倍用去離子水進行稀釋。例如用量筒量取

小鼠細胞培養(yǎng)方法有哪些2022/01/05

小鼠細胞培養(yǎng)方法：1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗-2次；②加入2ml0.25%（T25瓶），使覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；③-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；④將細胞懸液000RPM左右條件下離心4min，棄上清；⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；⑥懸浮細胞直接離心

逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR具體操作步驟2021/12/27

逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR原理:提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉(zhuǎn)錄酶反轉(zhuǎn)錄成cDNA。再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。RT-PCR使RNA檢測的靈敏性提高了幾個數(shù)量級，使一些極為微量RNA樣品分析成為可能。逆轉(zhuǎn)錄RT-PCR操作步驟：一、RNA逆轉(zhuǎn)錄cDNA（反應(yīng)體系要20ul）依次加入1、Oligo（dT）加入1ul。2、RNA（體積即上一步驟計算出來的）3、剩下的用無Rnase水補齊共12ul65℃水浴5m

為什么溫度是微生物生長最重要影響因素2021/12/22

微生物與所處的環(huán)境之間具有復雜的相互影響和相互作用:一方面,各種各樣的環(huán)境因素對微生物的生長和繁殖有影響,另一方面,微生物生長繁殖也會影響和改變環(huán)境.研究環(huán)境因素與微生物之間的關(guān)系,可以通過控制環(huán)境條件來利用微生物有益的一面,同時防止它有害的一面。溫度是影響微生物生長的最重要因素之一。溫度對微生物的影響具體表現(xiàn)在：1、影響酶活性，溫度變化影響酶促反應(yīng)速率，最終影響細胞合成。2、影響細胞膜的流動性，溫度高，流動性大，有利于物質(zhì)的運輸，溫度低，流動性降低，不利于物質(zhì)運輸，因此，溫度3、變化影響營養(yǎng)物

介紹細胞因子受體相關(guān)常識2021/12/15

細胞因子通過結(jié)合細胞表面相應(yīng)的細胞因子受體而發(fā)揮生物學作用。細胞因子和其受體的結(jié)合是細胞因子介導的細胞信號轉(zhuǎn)導的啟動刺激。已知的細胞因子受體絕大多數(shù)是跨膜蛋白，由胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞漿區(qū)組成。細胞因子與其受體結(jié)合后啟動復雜的細胞內(nèi)分子間的相互作用，zui終引起細胞基因轉(zhuǎn)錄的變化，這一過程稱為細胞的信號轉(zhuǎn)導。細胞因子和其受體的結(jié)合是細胞因子介導的細胞信號轉(zhuǎn)導的啟動刺激。已知的細胞因子受體絕大多數(shù)是跨膜蛋白，由胞膜外區(qū)、跨膜區(qū)和胞漿區(qū)組成。胞膜外區(qū)為識別結(jié)合細胞因子的部位，胞漿區(qū)啟動受體激活后的信號

有關(guān)ELISA試劑盒使用操作方法2021/12/09

在現(xiàn)在的ELISA商品試劑盒中，必然有使用微量加樣器加入樣本的步驟。注意的關(guān)鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。所以，有時候一份標本用相同的elisa試劑盒這次測定為陽性，下次測定為陰性，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致。ELISA試劑盒操作方法：各種類型ELISA測定時一般需經(jīng)過這些步驟：固相包被→加待測樣品→溫育→洗滌+加酶標物→

簡述ELISA基本原理2021/11/29

酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)即將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進行的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測大分子抗原和特異性抗體等，具有快速、靈敏、簡便、載體易于標準化等優(yōu)點。基本原理它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶連接，然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用于定量測定。測定的對象可以是抗體也可以是抗原。在這種測定方法中有3種必要的試劑：1、固相的抗原或抗體（免疫吸附劑）2、酶標記的抗原或抗體（標記物）3、酶作用的底物（顯色劑）測量時，抗原（抗體）先結(jié)合在固相載體上，但仍

了解細胞培養(yǎng)中關(guān)鍵步驟2021/11/24

1、準備工作準備工作的內(nèi)容包括器皿的清洗、干燥與消毒，培養(yǎng)基與其他試劑的配制、分裝及滅菌，無菌室或超凈臺的清潔與消毒，培養(yǎng)箱及其他儀器的檢查與調(diào)試等。2、取材在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞（視實驗?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。理論上講各種動物和人體內(nèi)的所有組織都可以用于培養(yǎng)，實際上幼體組織（尤其是胚胎組織）比成年個體的組織容易培養(yǎng)，分化程度低的組織比分化高的容

讓細胞活躍的六個實用對策2021/11/17

細胞，生物學名詞，生物體的結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。一般具有細胞核、細胞質(zhì)和細胞膜。植物細胞的細胞膜外還有細胞壁。體形極微，在顯微鏡下始能窺見。形狀多種多樣，主要由細胞核與細胞質(zhì)構(gòu)成，表面有薄膜。動植物細胞結(jié)構(gòu)大致相同。植物細胞質(zhì)膜外有細胞壁，細胞壁中常有質(zhì)體，動物細胞質(zhì)中常有中心體，而高等植物細胞中則無。細胞有運動、營養(yǎng)和繁殖等機能。細胞是許多生物學實驗的主角。如果細胞心情不好，那么實驗的結(jié)果也不會好到哪兒去。如何讓細胞快樂？下面就仔細了解一下吧!1.確保所有實驗室材料都無菌交叉污染是細胞培養(yǎng)的大

詳述標準溶液的配制步驟2021/11/08

標準溶液的定義：標準溶液指的是具有準確已知濃度的試劑溶液，在滴定分析中常用滴定劑。在其他的分析方法中用標準溶液繪制工作曲線或作計算標準。標準溶液的濃度標定：標準溶液的濃度標定因配置溶液不同而有所不同。標準溶液的配制方法有兩種：1、直接配制法在分析天平上準確稱取一定量已干燥的基準物溶于水后，轉(zhuǎn)入已校正的容量瓶中用水稀釋至刻度，搖勻，即可算出其準確濃度。2、標定法很多物質(zhì)不符合基準物生物條件，不能直接配制標準溶液。一般先將這些物質(zhì)配成近似所需濃度溶液，再用基準物測定其準確濃度。標定的方法有直接標定和

選擇合適的抗體的實用方法2021/11/03

抗體(英語:antibody)，抗體是一類能與抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白。(免疫球蛋白不僅僅只是抗體)是一種由漿細胞(效應(yīng)B細胞)分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動物的血液等體液中，及其B細胞的細胞膜表面。一、一抗的選擇檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇，為縮小抗體的選擇范圍選中合適的抗體，需要考慮的因素：1.實驗應(yīng)用的類型一般抗體說明書都列出該抗體經(jīng)試驗驗證過適用于何種分析類型，如：可以應(yīng)用于WB/IHC/ICC/ELISA分析等

不同實驗對抗體有什么要求2021/10/26

科研工作離不開抗體，WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體，那么這幾種實驗技術(shù)都需要什么樣的抗體呢？1.WBWB的蛋白經(jīng)過加熱變性之后都變成線性的結(jié)構(gòu)。因此*好的抗體是采用非常特異序列的人工合成多肽的方法來做實驗，結(jié)果也非常特異。2.IP/CHIP我們用抗體去結(jié)合生理狀態(tài)下的蛋白質(zhì)，因此IP的抗體最好使用純化的天然蛋白制作的抗體來做，也可以用純化的重組蛋白的抗體。最好不要用人工合成多肽制作的抗體，因為這種抗體識別的位點可能被深深地藏在了蛋白的內(nèi)心深處。CHIP和IP沒有太大的區(qū)別

酶聯(lián)免疫試劑盒（ELISA）檢測的三條基本原理2021/10/20

免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特異性識別和結(jié)合原理，對待測抗體或者抗原進行分析測定的方法，酶聯(lián)免疫吸附分析（下稱ELISA）是免疫分析的一種，分三個部分組成：免疫識別，信號輸出和數(shù)據(jù)處理。ELISA的基本原理有三條：1、抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學活性；2、抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學和酶學活性；3、酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏