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2022
08-18

液相色譜法的分類與特點有哪些呢？
液相色譜（highperformanceliquidchromatography,HPLC）也叫高壓液相色譜（highpressureliquidchromatography）、高速液相色譜（highspeedliquidchromatography）、高分離度液相色譜（highresolutionliquidchromatography）等。液相色譜儀主要由進樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。液相色譜法：液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上，引用了氣相色譜的理論，在技術(shù)上采用
2022
08-17

液相色譜柱的正確使用和維護十分重要
在日常分離分析工作中，液相色譜柱的正確使用和維護十分重要，使用是否得當，直接影響色譜柱的壽命，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題，以維護色譜柱。（1）柱子在裝卸、更換時，動作要輕，接頭擰緊要適度。必須防止較強的機械振動，以免柱床產(chǎn)生空隙。（2）如果儀器用來做常規(guī)分析，樣品種類有限，但分析次數(shù)多，則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根柱，這樣有助于延長柱子的壽命。（3）避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充
2022
08-09

C18色譜柱的選用、保養(yǎng)與維修知識
一、C18柱的選用C18的選用主要考慮2個問題，即柱填料和柱規(guī)格對色譜柱的影響。1.1C18柱的填料對色譜柱的影響柱填料的物理性能對填料色譜行為有重要影響。填料主要的物理性能包括如下：顆粒度、孔徑、孔體積、鍵合相化學、含碳量及烷基化處理。(1)顆粒度是指柱填料的顆粒直徑的大小。實際上色譜柱上所標的粒徑是一個平均值。如粒徑“5μm”并不是柱中填料所有的顆粒直徑都是5μm，實際上有一個顆粒分布度。這種分布度對柱反壓及柱效有重要作用。一般來說，平均顆粒度越小，顆粒分布度越小，色譜柱效越高，反壓亦越高。
2022
08-08

HPLC的常用數(shù)據(jù)處理方法
液相色譜儀的儀器本身是記錄樣品通過檢測器時，吸光度的變化而產(chǎn)生的電信號變化，從而產(chǎn)生色譜譜圖，后面的結(jié)果就要靠后期的色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。譜圖處理完即可制作校正曲線，校正曲線是數(shù)據(jù)處理的重點，是將標樣譜圖的信息與數(shù)據(jù)做成一個標準，供處理試樣譜圖使用。校正是通過分析準備好的標準樣品，來確定計算組分濃度的響應因子的過程。接下來介紹常用的數(shù)據(jù)處理方法：外標法外標法是指添加一定量的標準品于空白樣品中制成對照樣品，與未知檢測樣品平行進行樣品處理并檢測，根據(jù)對照品響應值與標準品的濃度函數(shù)關(guān)系計算出未知檢測樣品中
2022
08-05

HPLC色譜柱為什么比GC色譜柱短？
HPLC和GC是已在化學實驗室中站穩(wěn)腳跟的分離技術(shù)。這兩種技術(shù)的基本目的是分離和量化有機混合物的成分。您有沒有想過為什么HPLC色譜柱比GC色譜柱更短更寬。在回答這個問題之前，您應該了解柱長度的好處。一、柱長：隨著液相色譜柱長度的增加，洗脫化合物和固定相之間的相互作用時間也會增加，從而提高色譜柱效率和分離度。這導致分離良好的峰。然而，由于柱頭壓力增加和分析時間增加而面臨的實際問題，不能無限增加柱長。HPLC色譜柱的尺寸要求取決于分離目標。通常的分析應用要求色譜柱長度為15–25cm，內(nèi)徑為4.6
2022
07-29

液相色譜中的過濾器和過濾作用
以“清潔”流動相將樣品輸送至液相分析柱對于穩(wěn)健的方法和高質(zhì)量的結(jié)果非常重要。過濾器與高效液相色譜(HPLC)儀器的正確、可靠運行有關(guān)。過濾器和過濾的主題在LC中非常重要，因為如果流動相流路中存在微粒，LC系統(tǒng)中的許多組件很容易過早失效。例如，從溶劑瓶中抽出的流動相中的灰塵或其他顆粒會導致泵止回閥部分失效（它們會泄漏）或*失效（泵根本不產(chǎn)生流量）。故障模式可能是進樣樣品中的顆粒物或儀器組件在色譜柱入口處積聚，從而導致色譜柱堵塞。一、保護泵：從LC泵的角度來看，理想的溶劑絕對不含顆粒物。微粒會干擾止
2022
07-26

高效液相色譜法提取和純化應用
高效液相色譜法是提取和純化甜味劑的可靠技術(shù)。在食品工業(yè)中被廣泛應用；食品糖的甜味與蔗糖相似，熱量只有三分之二。這種五碳糖存在于許多植物中，但大多濃度較低（約1%），因此提取和純化成本很高。因此，迄今為止，食品糖主要通過化學方法生產(chǎn)，使用催化木糖脫氫。一、在木糖轉(zhuǎn)化中引入HPLC一種有吸引力的替代方法是通過發(fā)酵將生物質(zhì)（例如麥秸）中的木糖轉(zhuǎn)化為食品糖。通過該工藝，甜味劑可以在溫和條件（大氣壓和環(huán)境溫度）下以高產(chǎn)率生產(chǎn)，不含有害化學物質(zhì)。一旦微生物合成了所需的糖醇，就可以通過高效液相色譜（HPLC）
2022
07-23

使用HPLC純化綠茶中的多酚
綠茶被廣泛認為是地球上最健康的飲料之一。縱觀歷史，綠茶一直被用作治療多種疾病的民間療法，今天它繼續(xù)被提倡作為補充和替代藥物，雖然它一直備受爭議?，F(xiàn)代研究并沒有消除這些長期存在的假設，而是讓人們相信綠茶相關(guān)的健康益處。綠茶的藥用特性源自茶樹種，廣泛歸因于該植物的高酚含量。使用高效液相色譜法(HPLC)進行的研究發(fā)現(xiàn)，在干葉和芽中含有豐富的多酚，這些天然植物化合物構(gòu)成了一系列代謝組（兒茶素、類黃酮、單寧等），但廣泛的HPLC分析突出了一種代謝物，特別是在涉及綠茶對人類健康益處的問題時。一、用HPLC
2022
07-21

高效液相色譜儀的主要性能指標
高效液相色譜儀(HPLC)是應用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機化合物的儀器設備。它由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄
2022
07-16

液相保護柱的作用
任何HPLC或UHPLC柱都是有試用壽命的。正確使用和維護色譜柱可以延長其使用壽命，有利于該方法的經(jīng)濟性。重要的是遵循*的色譜慣例，如適當?shù)臉悠分苽洌悠窇ㄟ^0.45µm的膜過濾器進行高效液相色譜過濾，通過0.22µm的過濾器進行超高效液相色譜過濾）；流動相的適當質(zhì)量/純度（例如，用于等度模式的等度級溶劑，用于梯度洗脫的梯度級溶劑）；過濾流動相，發(fā)展良好的方法，具有足夠強的洗脫能力，以盡量減少非特定的吸附；與所選色譜柱兼容的溫度、pH值和最大背壓范圍。另外值得一提的是，總進樣次數(shù)與進樣體積成反
2022
07-13

氨基柱的反相使用
先用正己烷-乙腈(99：1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積，再依次以相同的流速相同的用量用氯仿、異丙醇、甲醇、甲醇-水(50：50)沖柱子。以0.5ml/min的流速用30倍柱體積的pH11.0的氫氧化鈉(LUNA)水溶液沖柱子(注意pH值切不可超過11.0)，立即用水(0.5ml/min的流速，30倍柱體積)沖洗，再換成流動相。配制流動相時，應各組分分別量取，比例較小的組分要精密量取，需調(diào)pH值時要精密到0.1。反相條件下使用時，要特別注意控制pH值范圍，pH值越低越有發(fā)生水解的危險
2022
07-11

液相色譜工作流程
無論正在利用何種相互作用，液相柱色譜法都分六個步驟進行：柱平衡樣品裝載洗滌洗脫清洗色譜柱再生一、柱平衡：大多數(shù)液相色譜方案從樹脂平衡步驟開始。與目標蛋白質(zhì)和所選樹脂相容的緩沖液通過柱子。一種常見的做法是用5-10柱體積(CV)的平衡緩沖液平衡柱。例如，蛋白質(zhì)與疏水相互作用樹脂的結(jié)合在高離子強度下有效。在選擇平衡緩沖液時也要考慮目標蛋白質(zhì)的特性，因為離子強度等緩沖液因素會受到蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的限制；通常，人們會避免使用會使感興趣的蛋白質(zhì)變性或阻止其與固定相相互作用的平衡緩沖條件。二、樣品加載：平衡后，
2022
07-11

梯度洗脫后的色譜柱重新平衡的時間
許多用戶對溶劑梯度洗脫分離后LC色譜柱應該重新平衡多長時間有疑問。在這里，我們展示了對于反相和HILIC分離而言，再平衡周期短的令人滿意的結(jié)果。LC用戶通常會提出和討論關(guān)于在溶劑梯度洗脫分離后重新平衡LC色譜柱多長時間的問題。在本文中，我們根據(jù)最近對該主題的研究討論了細節(jié)，并表明即使對于HILIC分離，在兩個柱體積數(shù)量級的短再平衡周期內(nèi)也可以獲得令人滿意的結(jié)果。一、核心概念在溶劑梯度洗脫模式下使用LC時，必須有一段時間，通常是在分析結(jié)束時，在溶劑梯度的第一部分中使用的流動相流過LC色譜柱，為色譜
2022
07-06

高效液相色譜儀器的組成
HPLC色譜儀器可以是一組單獨的模塊或元件，但也可以設計為單個裝置。模塊概念在單個組件失效的情況下更加靈活；此外，系統(tǒng)各個零件不必來自同一制造商。如果您不喜歡自己進行小修，您會更喜歡緊湊型儀器。然而，這并不需要比模塊化套件更少的工作臺空間。一臺HPLC儀器至少具有溶劑罐、帶篩板的傳輸線、高壓泵、進樣裝置、色譜柱、檢測器組成部分。一、高效液相色譜儀HPLC儀器通常由九個基本組件組成：流動相/溶劑容器、溶劑輸送系統(tǒng)、樣品引入裝置、色譜柱、柱后裝置、檢測器、數(shù)據(jù)收集和輸出系統(tǒng)、檢測器后洗脫液處理以及連
2022
07-04

保持液相色譜柱柱溫有助于準確性和穩(wěn)定性
溫度的變化會對色譜分析方法的重現(xiàn)性和色譜柱的壽命產(chǎn)生重大影響。但為什么會這樣？恒譜生在以下的內(nèi)容將會為您介紹。一、再現(xiàn)性隨著溫度的變化，液相色譜柱內(nèi)固定相和流動相之間的熱力學會受到直接影響。在不同溫度下運行方法可能會影響分析物容量因子(k)或分析物在色譜柱上的保留時間。在升高的溫度下，流動相和分析物的動能都會增加。分析物動能的增加將導致它們更強烈地移動和振動，并將破壞分子間結(jié)合，即分析物和固定相之間的分離和保留機制。很多時候，這會導致所有分析物更快地從液相色譜柱中流出，從而縮短保留時間。通常，這
2022
06-29

hplc溶劑進樣口過濾器過濾流動相的重要性
緩沖液是一種含有弱酸及其共軛堿（或弱堿及其共軛酸）的水溶液。加入少量強酸或強堿后，緩沖溶液的pH值變化很小，當小的環(huán)境因素發(fā)生變化時，有助于抵消分析方法中的條件變化。緩沖溶液用于將pH值保持在幾乎恒定的值。由于這種弱酸(HA)與其共軛堿之間存在平衡，它們對pH變化具有抵抗力。一、hplc緩沖液的工作原理當一些強酸（更多的H+）被添加到弱酸及其共軛堿的平衡混合物中時，根據(jù)LeChatelier原理，平衡向左移動。類似地，如果將強堿添加到混合物中，則氫離子濃度降低的量小于所添加堿量的預期量。在準備緩
2022
06-23

氨基柱如何正向使用？
.氨基柱既可以正相使用，也可以反相使用，但是要注意到的是：正相溶劑和反相溶劑往往是不互溶的，正常情況新氨基柱保存在正相環(huán)境中，例如LUNA氨基柱保存在正己烷-乙腈(99：1)中。正相使用新柱子可直接用流動相。推薦先用正己烷-乙腈(99：1)以0.5ml/min的流速沖10倍柱體積，再根據(jù)流動相選用極性相近的氯仿或二氯甲烷以相同的流速沖10倍柱體積，最后換成流動相。正相使用時，不宜分析含醛基、羰基的化合物，不可用于還原糖的分析;流動相要*脫氣，并不得含有羰基化合物和過氧化物(質(zhì)量不好的yi醚、四氫
2022
06-22

哪些因素會影響高效液相色譜柱的使用？
高效液相色譜柱是高效液相色譜的心臟，在高效液相色譜儀的使用中，保持色譜柱的柱效、容量和滲透特性，延長柱子的使用壽命非常重要。色譜柱使用時間后就會出現(xiàn)柱壓升高、柱效降低、峰形畸變和分離度降低、保留時間改變等變化，如不采取措施，將會縮短色譜柱的使用壽命，影響工作效率，并造成一定的經(jīng)濟損失。因此，有必要加強和規(guī)范色譜柱的管理，從而延長色譜柱的使用壽命。本文從影響色譜柱使用壽命的幾個因素出發(fā)，從管理的角度，探討色譜柱的維護與保養(yǎng)。影響高效液相色譜柱使用壽命的因素1.流動相在以水溶液為流動相時，水溶液中的
2022
06-20

反相色譜柱在使用緩沖液中需要注意些什么？
反相色譜柱為色譜柱提供方便、經(jīng)濟和有效的保護，延長了色譜柱的壽命，分析結(jié)果的重現(xiàn)性。隨著使用時間的增加，高效液相色譜柱分離效能下降，柱壓增高，其原因主要是由于色譜柱進口段的少量填料被污染引起的，而色譜柱整個柱床并未被破壞，使用保護柱，相當于在色譜柱前增加了一段額外的填料，起到了保護整個色譜柱的作用。反相色譜柱特點：采用高度可控的單分子層形成和封尾技術(shù)；高的柱間重現(xiàn)性；高的選擇性和分離效率；適合分離酸性、中性和堿性化合物，以及許多藥物和多肽等。反相色譜柱在使用緩沖液的過程中還要注意以下幾點：1.避
2022
06-14

深入了解液相色譜柱小型化
雖然質(zhì)譜聯(lián)用液相色譜已被證明是發(fā)現(xiàn)組學（蛋白質(zhì)組學、脂質(zhì)組學、代謝組學、食物組學和糖組學）領(lǐng)域的強大工具。組學研究經(jīng)常受到樣本復雜性的挑戰(zhàn)。在處理少量樣品、小體積和復雜的樣品基質(zhì)（生物流體和單細胞分析）時，對感興趣的分子進行識別和量化可能特別困難。液相色譜柱小型化可以克服這些挑戰(zhàn)。減小色譜柱內(nèi)徑(ID)會降低色譜稀釋度并提高靈敏度，從而實現(xiàn)更高效的MS/MS采樣，從而實現(xiàn)更多的分子鑒定。當樣品量被注入色譜柱并被周圍的溶劑稀釋時，就會發(fā)生這種稀釋。在這種情況下，更少的溶劑意味著更少的色譜稀釋，這是

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