BY-0108 A7d小鼠骨髓細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) BY-0108
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/6/6 10:40:02
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細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
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A7d小鼠骨髓細(xì)胞系
A7d小鼠骨髓細(xì)胞系經(jīng)野生型人 c-kit 基因修飾后，成為解析造血調(diào)控網(wǎng)絡(luò)與血液系統(tǒng)疾病機(jī)制的核心工具。該細(xì)胞系源于小鼠骨髓原始細(xì)胞，通過慢病毒介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染技術(shù)穩(wěn)定導(dǎo)入野生型人 c-kit 基因，不僅保留了小鼠骨髓細(xì)胞的基礎(chǔ)造血特性，還賦予其高效模擬人類 c-kit 信號(hào)通路的能力，為研究造血干細(xì)胞生物學(xué)和開發(fā)靶向療法提供了理想的體外模型。
在細(xì)胞生物學(xué)特性層面，A7d 細(xì)胞呈現(xiàn)典型的懸浮生長特性，細(xì)胞形態(tài)均一，呈圓形或類圓形。其表面 c-kit 蛋白表達(dá)量經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)檢測，平均熒光強(qiáng)度達(dá)野生型小鼠骨髓細(xì)胞的 3.2 倍，且配體結(jié)合活性顯著增強(qiáng)。當(dāng)與 100 ng/mL 重組干細(xì)胞因子（SCF）共孵育時(shí)，c-kit 受體在 10 分鐘內(nèi)即發(fā)生磷酸化，激活下游 PI3K/Akt 通路使 AKT 磷酸化水平提升 210%，MAPK 通路中 ERK1/2 磷酸化水平增加 180%，進(jìn)而驅(qū)動(dòng)細(xì)胞進(jìn)入快速增殖狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，添加 SCF 的培養(yǎng)體系中，A7d 細(xì)胞的倍增時(shí)間縮短至 18 小時(shí)，較未添加組提升 57%；細(xì)胞周期分析表明，S 期和 G2/M 期細(xì)胞比例從對(duì)照組的 32% 提升至 48%。在造血分化潛能方面，經(jīng)特定細(xì)胞因子組合（IL-3、GM-CSF、EPO 等）誘導(dǎo)，A7d 細(xì)胞可分化為多種造血譜系細(xì)胞，其中粒細(xì)胞（CD11b+）分化效率達(dá) 65%，單核細(xì)胞（F4/80+）達(dá) 30%，紅細(xì)胞（Ter119+）達(dá) 15%。在體內(nèi)移植實(shí)驗(yàn)中，將 5×10^5 個(gè) A7d 細(xì)胞輸注至亞致死劑量輻照的 NOD-SCID 小鼠，3 周后受體小鼠骨髓中人類 c-kit 陽性細(xì)胞嵌合率可達(dá) 28%，并在脾臟中檢測到供體細(xì)胞來源的成熟血細(xì)胞。
A7d 細(xì)胞的培養(yǎng)需嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化流程。基礎(chǔ)培養(yǎng)基選用 IMDM，添加 10% 熱滅活胎牛血清（FBS）、1% 雙抗（青mei素 - 鏈mei素）及 50 ng/mL 重組小鼠 SCF。SCF 作為 c-kit 的特異性配體，是維持細(xì)胞存活和增殖的關(guān)鍵因子；FBS 中的胰島素和轉(zhuǎn)鐵蛋白可協(xié)同增強(qiáng)細(xì)胞活性。培養(yǎng)條件設(shè)定為 37℃、5% CO?、95% 相對(duì)濕度的恒溫培養(yǎng)箱，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 1×10^6 個(gè) /mL 時(shí)，按 1:4 比例進(jìn)行傳代，使用含 0.02% EDTA 的 PBS 輕柔吹打收集細(xì)胞。新接種細(xì)胞在 4 小時(shí)內(nèi)即可恢復(fù)懸浮生長狀態(tài)，24 小時(shí)后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長期。為確保細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定，需每 2 天半量更換培養(yǎng)液，定期通過臺(tái)盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞活力（應(yīng)保持在 95% 以上），并采用 PCR 檢測支原體污染情況。
在科研與藥物開發(fā)領(lǐng)域，A7d 細(xì)胞系展現(xiàn)出巨大應(yīng)用價(jià)值。在機(jī)制研究方面，通過 CRISPR/Cas9 技術(shù)構(gòu)建 A7d 細(xì)胞的 c-kit 基因敲低模型，證實(shí) c-kit 缺失會(huì)導(dǎo)致造血干細(xì)胞標(biāo)志物 Sca-1 表達(dá)下降 70%，自我更新能力顯著受損；而長鏈非編碼 RNA LncRNA-H19 過表達(dá)的 A7d 細(xì)胞，通過海綿吸附 miR-145-5p，使 c-kit 表達(dá)上調(diào) 40%，加速細(xì)胞向肥大細(xì)胞方向分化。在疾病模擬與藥物篩選中，A7d 細(xì)胞可用于構(gòu)建攜帶 D816V 等致病突變的疾病模型，模擬肥大細(xì)胞增多癥等 c-kit 相關(guān)疾病。研究顯示，新型 c-kit 抑制劑 BLU-285 在 A7d 突變細(xì)胞模型中，IC??值低至 3.2 nM，顯著抑制細(xì)胞增殖并誘導(dǎo) 25% 的細(xì)胞凋亡。不過，由于長期傳代可能導(dǎo)致 c-kit 基因表達(dá)衰減或染色體異常，建議每 15 代進(jìn)行 STR 分型鑒定和 c-kit 基因拷貝數(shù)檢測，確保細(xì)胞系的遺傳穩(wěn)定性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
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