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原代細(xì)胞復(fù)蘇技術(shù)2017/7/6
1.原代細(xì)胞凍存復(fù)蘇技術(shù)簡(jiǎn)介在ELISPOT檢測(cè)的應(yīng)用中，往往需要用到凍存的淋巴細(xì)胞樣品作為檢測(cè)細(xì)胞。由于ELISPOT檢測(cè)的是細(xì)胞的免疫功能，不僅僅需要保持細(xì)胞的存活率，而且還要保證細(xì)胞的功能不發(fā)生...
細(xì)胞常見的保存方法2017/7/4
原代細(xì)胞保存溫度越低，保存時(shí)限更長(zhǎng)；溫度越低，對(duì)細(xì)胞傷害越大；低溫也不怕，我有防凍劑（e.g.甘油）。下面的表格就是五種常見保存細(xì)菌細(xì)胞的方法和大約時(shí)限。保存條件溫度°C大約時(shí)間瓊脂平板44-6周（A...
細(xì)胞同步化實(shí)驗(yàn)操作步驟2017/6/29
在腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)過程中，細(xì)胞多處于不同的細(xì)胞周期時(shí)相中。不同時(shí)相的細(xì)胞對(duì)藥物干預(yù)存在不同的反應(yīng)，會(huì)影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性，因此需要制備細(xì)胞周期一致的細(xì)胞。細(xì)胞同步化是解決該問題的好辦法。細(xì)胞同步化是利用藥物或...
細(xì)胞懸液標(biāo)本制備實(shí)驗(yàn)步驟2017/6/27
細(xì)胞系懸液標(biāo)本制備實(shí)驗(yàn)步驟(1)取材：收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞于離心管中，800～1000r／min離心10min，棄上清，彈指法混勻細(xì)胞。沿管壁加入2．0％～2．5％冷戊二醛，輕輕吹打，4℃固定30min...
原代細(xì)胞培養(yǎng)注意事項(xiàng)2017/6/22
原代細(xì)胞培養(yǎng)：1、實(shí)驗(yàn)材料要新鮮，從活體分離材料后要低溫保存，并盡快進(jìn)行細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)。2、無菌操作。操作時(shí)用的培養(yǎng)液，可加平時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)液5倍含量的青鏈霉素。3、用酶法分離細(xì)胞時(shí)，注意酶液的濃度和控制消...
腫瘤細(xì)胞凍存保護(hù)劑2017/6/20
腫瘤細(xì)胞很多化合物都可以作為凍存保護(hù)劑，它們既可以單獨(dú)使用也可以聯(lián)合使用，例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒有的準(zhǔn)則，但是大家普遍認(rèn)為二甲基亞砜（DMSO）和甘油是保護(hù)活細(xì)胞和組織使用zui廣泛且zui...
人類外周血淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)方法2017/6/15
實(shí)驗(yàn)原理染色體是在顯微鏡下可見細(xì)胞系有絲分裂過程中出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。因此，必須獲得染色體標(biāo)本才能進(jìn)行檢查分析，通常情況下，都是利用外周血淋巴細(xì)胞進(jìn)行核型分析。正常情況下，人體外周血淋巴細(xì)胞不再分裂，但植物血...
細(xì)胞長(zhǎng)期保存的方法2017/6/13
細(xì)胞系長(zhǎng)期低溫冰凍必然會(huì)導(dǎo)致部分細(xì)胞死亡，而且很多時(shí)候我們要把細(xì)胞樣本拿來重新接種做實(shí)驗(yàn)，所以解凍再凍的過程也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。那么起始樣本的細(xì)胞濃度就要達(dá)到一定的高度，這樣在以后保存的過程中就算死亡一...
原代細(xì)胞培養(yǎng)過程可能出現(xiàn)的問題及解決辦法2017/6/8
原代細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細(xì)胞生長(zhǎng)角度來說，針對(duì)細(xì)胞不貼壁、生長(zhǎng)緩慢、生長(zhǎng)不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對(duì)應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因：●胰蛋...
細(xì)胞株培養(yǎng)時(shí)消毒滅菌的方法2017/6/6
細(xì)胞株嚴(yán)格的消毒滅菌對(duì)保證細(xì)胞培養(yǎng)的成功是極為重要的，其方法分為物理法和化學(xué)法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等，后者主要指使用化學(xué)消毒劑等。①熱滅菌：玻璃器皿，160~170℃，90~1...
ATCC細(xì)胞株解凍和培養(yǎng)操作推薦2017/6/1
凍存的ATCC細(xì)胞株和雜交腐細(xì)胞株在運(yùn)送過程中使用干冰保持低溫。收到細(xì)胞后，可以立即解凍復(fù)蘇，去除二甲基亞砜（DSMO0）后進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。如果不立即復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞，必須將細(xì)胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲(chǔ)存...
原代細(xì)胞保存的主要方法之一細(xì)胞凍存2017/5/25
利用凍存技術(shù)將原代細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其...
原代細(xì)胞培養(yǎng)基的保存方法分析2017/5/23
原代細(xì)胞培養(yǎng)基的保存方法分析1.干粉，買了后一定要保存在4度。有人保存在-20度我認(rèn)為沒有必要。但4度是非常必要的。保證期是有提示的。2.配好的無血清培養(yǎng)基一定保存在4度，保存不要超過3個(gè)月。用時(shí)根據(jù)...
原代細(xì)胞如何消除組織培養(yǎng)的污染2017/5/18
原代細(xì)胞當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時(shí)，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離開，用實(shí)驗(yàn)室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺(tái)，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生...
哪些方法可以使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基2017/5/16
1．細(xì)胞株直接適應(yīng)法式—將細(xì)胞直接從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基中。2．連續(xù)適應(yīng)或循序隔絕法—分幾步將細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基中。與直接適應(yīng)法相比較，連續(xù)適應(yīng)法對(duì)于細(xì)胞更溫和些。...
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