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細胞免疫染色復(fù)染2011/03/24

復(fù)染常有助于在細胞免疫染色中鑒別不同的細胞類型，或者亞細胞結(jié)構(gòu)。這對組織切片來說是基本步驟，并可鑒定細胞的類型。也可用于其他染色反應(yīng)。復(fù)染不能使用熒光染料，因其復(fù)染后可產(chǎn)生自發(fā)熒光。為了選擇一種適宜的復(fù)染方法，首先應(yīng)檢測細胞染色試劑是否在乙醇中可溶。1．不溶于乙醇的方法（1）用水輕輕洗滌標(biāo)本片；（2）加數(shù)滴Harris蘇木精（商品化試劑）于標(biāo)本中，孵育約5min。染色時間的長短決定染色的強度；（3）用水輕輕洗滌；（4）用0．5％冰乙酸／99．5％乙醇處理標(biāo)本片大約10rain；（5）用水輕輕洗滌

多聚甲醛固定美麗線蟲體法2011/03/24

蟲體的第二種常用的固定方法是使用多聚甲醛。此法比上述的Bouin固定法溫和，但通常需要使用膠原酶。這種方法尤其適用于檢測成蟲。1．所需的溶液和試劑4％多聚甲醛（新鮮配制，見附錄Ⅳ）；含1％NP—40，200mmol／L二硫基蘇糖醇（DTT）的20mm01／L硼酸鈉（pH9．6）；含1％NP一40的PBS；含50％甲醇，20mmol／LEDTA，10mmol／L亞精胺鹽酸的PBS。2．操作步驟（1）用含0．05％NP—40的PBS（4℃）洗平皿的表面，以去除幼蟲的生長介質(zhì)。將全部液體轉(zhuǎn)入一支15m

美麗線蟲體的抗體染色2011/03/24

無論使用哪種固定方法，抗體結(jié)合及檢測的步驟基本相同。其方法學(xué)及理論與其他組織來源的染色均相似。在鑒定和證實陽性反應(yīng)方面應(yīng)注意交叉反應(yīng)。在前述組織切片染色部分已討論關(guān)于抗體選擇和對抗原正確定位的方法。對于在蟲體中進行抗原免疫定位的一個主要優(yōu)點是可檢測一個無效基因。如果可能的話，它對某些動物染色是非常有用的，這些動物可以攜帶一個突變基因或用RNAi處理過的，以抑制所研究抗原的合成。這樣會提供一個有用的對照，從而證實一種染色模式。顯然，在某些情況下，如基因功能的缺失是致命的，這種對照將是不可能的。對于

ELISA試劑盒測定技術(shù)的發(fā)展2011/02/21

Elisa試驗是一種敏感性高，特異性強，重復(fù)性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗的各領(lǐng)域中。然而，影響Elisa試驗結(jié)果的因素很多，故加強各個環(huán)節(jié)的質(zhì)量保證才能充分發(fā)揮其方法學(xué)的優(yōu)點。Elisa試劑盒測定技術(shù)的發(fā)展臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展，而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進步更新和新型標(biāo)記物的應(yīng)用。目前，分子生物學(xué)正在并zui終肯定會讓我們對整個生命科學(xué)有一個全面而*的認(rèn)識，其對免疫測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效

各種細胞轉(zhuǎn)染方法比較2011/02/21

細胞轉(zhuǎn)染方法包括DEAE－葡聚糖法，磷酸鈣法，陽離子脂質(zhì)體法，陽離子聚合物，病毒介導(dǎo)法，Biolistic顆粒傳遞法（基因槍粒子轟擊法），顯微注射法，電穿孔法等，對各種方法的原理，應(yīng)用，特點，廠家產(chǎn)品等信息的比較結(jié)果如下表：轉(zhuǎn)染方法原理主要應(yīng)用特點廠家及產(chǎn)品DEAE－葡聚糖法帶正電的DEAE-葡聚糖與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細胞內(nèi)吞瞬時轉(zhuǎn)染相對簡便、重復(fù)比磷酸鈣好，但對細胞有一定的毒副作用，轉(zhuǎn)染時需除血清且一般只用于BSC-1，CV-1，COS細胞系Sigma-Aldrich（

甲基化檢測方法（亞硫酸氫鹽修飾后測序法）2011/02/21

*部分基因組DNA的提取這一步?jīng)]有懸念，*可以購買供細胞或組織使用的DNA提取試劑盒，如果實驗室條件成熟，自己配試劑提取*可以。DNA比較穩(wěn)定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因組DNA應(yīng)該是完整的。此步重點在于DNA的純度，即減少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取過程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除兩者。使用兩者的細節(jié)：1、蛋白酶K可以使用滅菌雙蒸水配制成20mg/ml；2、RNA酶必須要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在購買市售RNA酶后進行再處理，配制成10mg/ml。否則可能的

為什么有人提倡細胞培養(yǎng)液中不要加抗生素2011/02/21

抗生素雖然減少了可以觀察到的細菌、酵母等微生物的污染機會，卻會增加支原體、病毒等隱性污染的機會。因為細胞培養(yǎng)中污染主要來源于空氣中的微粒和汽霧，而這些微粒和汽霧可以同時攜帶支原體、病毒和其他微生物。當(dāng)抗生素使用時，可見污染被抑制而隱性污染又沒被注意到，這樣支原體、病毒等隱性污染的機會反而增加了。Barile的一項研究顯示（1），72%持續(xù)使用抗生素培養(yǎng)的細胞有支原體污染，而不使用抗生素培養(yǎng)的細胞支原體污染的比例只有7%。反過來如果不使用抗生素，支原體、病毒的污染往往會伴隨細菌和酵母等的污染。由于

人造假雞蛋辨別方法及制作方法過程揭秘2011/02/21

人造雞蛋有什么危害呢？首先是沒有真雞蛋的營養(yǎng)價值。更嚴(yán)重的是，由于它是由化學(xué)物品制成，長期食用會造成大腦記憶力衰退，令人癡呆。雞蛋也有假?用幾種化學(xué)原料就可以制造出人造蛋來，你相信嗎?昨日，央視《焦點訪談》欄目曝光了人造假雞蛋的騙局，詐騙公司以教授人造假雞蛋技術(shù)為名，收取高額培訓(xùn)費。記者通過暗訪，拍到了人造假雞蛋技術(shù)的制作過程。用海藻酸鈉、氯化鈣和蛋黃素制造出了假蛋黃，用酸鈉脂、苯甲酸鈉、白礬制成蛋白，蛋殼則是用石蠟和石膏做成。整個雞蛋都用化學(xué)材料制作，根本就沒有營養(yǎng)可言，更何況這么多種化學(xué)物質(zhì)

人類基因組研究技術(shù)原理--建立物理圖譜2011/01/25

物理圖譜（physicalmap）：物理圖譜反映的是DNA序列上兩點之間的實際距離，而遺傳圖譜則反映這兩點之間的連鎖關(guān)系。物理圖譜描繪DNA上可以識別的標(biāo)記的位置和相互之間的距離（以堿基對的數(shù)目為衡量單位），這些可以識別的標(biāo)記包括限制性內(nèi)切核酸酶的酶切位點，基因等。物理圖譜不考慮兩個標(biāo)記共同遺傳的概率等信息。它有多種形式，包括限制性圖譜（restrictionmap），用于對小區(qū)域、如kb數(shù)量級做精細結(jié)構(gòu)制圖；細胞遺傳學(xué)圖cytogeneticmap），用于較大片段如以104kb為長度數(shù)量級的區(qū)

植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)2011/01/25

（1）農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法將外植體放入含有外源基因的農(nóng)桿菌（Agrobacteriumtume／ociens）菌液中浸泡，然后轉(zhuǎn)入共培養(yǎng)基，再轉(zhuǎn)入篩選培養(yǎng)基誘導(dǎo)抗性愈傷組織和抗性芽，生根后的抗性植株移栽至營養(yǎng)缽生長。（2）基因槍法又稱微彈轟擊法。其基本原理是將外源DNA黏附在微小的金?；蜴u粒表面，然后在高壓的作用下，微粒被高速射入受體細胞或組織，微粒上的外源DNA進入細胞后，整合到植物染色體上，得以表達，從而實現(xiàn)基因的轉(zhuǎn)化。（3）花粉管通道法在植物授粉時將含目的基因的DNA溶液涂于柱頭上，利用植物在

動物的體細胞克隆的意義.2011/01/25

體細胞克隆非常重要，因為性細胞或胚胎細胞的形成都有時間限制、有數(shù)量限制；性細胞的形成要通過一個減數(shù)分裂過程，在這—過程中，遺傳信息要發(fā)生分離和自由組合，從而造成每個性細胞中的遺傳信息不盡相同，如果直接用性細胞進行克隆工作，就會造成每個克隆個體都不相同。一個優(yōu)良的個體，它的體細胞數(shù)量巨大，而且還可以利用細胞培養(yǎng)的方法進行離體的體細胞培養(yǎng)。因此，動物體細胞的獲得不會受到時間和數(shù)量的限制。zui重要的是同一個個體的所有體細胞都具有同樣的遺傳信息。如果用體細胞來直接繁殖后代，不僅可以保證每個克隆個體具有

動物的體細胞克隆的意2011/01/25

體細胞克隆非常重要，因為性細胞或胚胎細胞的形成都有時間限制、有數(shù)量限制；性細胞的形成要通過一個減數(shù)分裂過程，在這—過程中，遺傳信息要發(fā)生分離和自由組合，從而造成每個性細胞中的遺傳信息不盡相同，如果直接用性細胞進行克隆工作，就會造成每個克隆個體都不相同。一個優(yōu)良的個體，它的體細胞數(shù)量巨大，而且還可以利用細胞培養(yǎng)的方法進行離體的體細胞培養(yǎng)。因此，動物體細胞的獲得不會受到時間和數(shù)量的限制。zui重要的是同一個個體的所有體細胞都具有同樣的遺傳信息。如果用體細胞來直接繁殖后代，不僅可以保證每個克隆個體具有

基因工程操作的各種酶2011/01/25

基因工程操作中涉及一系列相互關(guān)聯(lián)的酶促反應(yīng)。已經(jīng)知道有許多重要的核酸酶，如限制性內(nèi)切核酸酶、外切核酸酶、DNA連接酶、DNA聚合酶、反轉(zhuǎn)錄酶、DNA及RNA的修飾酶等，在基因工程的操作中有著廣泛的用途。1．限制性內(nèi)切核酸酶限制性內(nèi)切核酸酶（restrictionendonuclease）是一類能識別雙鏈DNA中特殊核苷酸序列，并在合適的條件下使每一條鏈一定位點上的磷酸二酯鍵斷開，產(chǎn)生具有3／—OH基團和5／—P基團的DNA片段的內(nèi)切脫氧核糖核酸酶（endo-deoxyribonuclease）。

生物技術(shù)應(yīng)用花卉抗性基因工程2011/01/25

1．花卉抗凍基因工程CBFl基因?qū)胫参锸怯棉D(zhuǎn)基因技術(shù)提高植物抗凍能力的一個新思路，對研究其他多基因性狀（如固氮作用）有一定的借鑒意義。而且CBFl的轉(zhuǎn)化植株不經(jīng)過低溫馴化就具有較高水平的抗凍能力。CBFl的過量表達，不用經(jīng)過低溫刺激就可誘導(dǎo)CDR基因的表達，從而能夠抵御驟然降低的低溫天氣，打破一些植物地理分布上的界限，減少植物因低溫天氣造成的不良影響，具有很廣闊的應(yīng)用前景。2．花卉抗病蟲害基因工程月2基因的轉(zhuǎn)化使花卉增強了對鱗翅目害蟲幼蟲及食草害蟲的抗性。煙草花葉病毒外殼蛋白基因的導(dǎo)入可以增強

動物的體細胞克隆的意義2011/01/25

體細胞克隆非常重要，因為性細胞或胚胎細胞的形成都有時間限制、有數(shù)量限制；性細胞的形成要通過一個減數(shù)分裂過程，在這—過程中，遺傳信息要發(fā)生分離和自由組合，從而造成每個性細胞中的遺傳信息不盡相同，如果直接用性細胞進行克隆工作，就會造成每個克隆個體都不相同。一個優(yōu)良的個體，它的體細胞數(shù)量巨大，而且還可以利用細胞培養(yǎng)的方法進行離體的體細胞培養(yǎng)。因此，動物體細胞的獲得不會受到時間和數(shù)量的限制。zui重要的是同一個個體的所有體細胞都具有同樣的遺傳信息。如果用體細胞來直接繁殖后代，不僅可以保證每個克隆個體具有

生命科學(xué)研究生命活動過程與環(huán)境作用規(guī)律.2011/01/25

21世紀(jì)是生命科學(xué)和生物技術(shù)大發(fā)展的世紀(jì)，生物技術(shù)及其產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，將真正實現(xiàn)科技含量高、經(jīng)濟效益好、資源消耗低、環(huán)境污染少、人力資源和自然資源優(yōu)勢得到充分發(fā)揮的新型現(xiàn)代化社會發(fā)展之路，它將為中國乃至世界解決疾病防治、人口膨脹、食物短缺、能源匱乏、環(huán)境污染等一系列問題帶來新的希望。發(fā)展生物技術(shù)及其產(chǎn)業(yè)必須加強生命科學(xué)基礎(chǔ)研究。生命科學(xué)是研究生命活動的過程、規(guī)律以及生命體與環(huán)境相互作用規(guī)律的科學(xué)；生命科學(xué)中重大現(xiàn)象和科學(xué)規(guī)律的揭示及進展，使人類認(rèn)識自我、認(rèn)識生命世界逐步深入。生命科學(xué)是生物技術(shù)發(fā)展的

蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)分析2011/01/25

蛋白質(zhì)工程的核心內(nèi)容之一就是收集大量的蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的信息，以便建立結(jié)構(gòu)功能之間關(guān)系的數(shù)據(jù)庫，為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能之間關(guān)系的理論研究奠定基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)是指多肽鏈的氨基酸殘基的排列順序。蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)是指多肽鏈借助于氫鍵沿一維方向排列成具有周期性的結(jié)構(gòu)的構(gòu)象，是多肽鏈局部的空間結(jié)構(gòu)（構(gòu)象），主要有。螺旋、p折疊、p轉(zhuǎn)角和無規(guī)則卷曲結(jié)構(gòu)等幾種形式。三級結(jié)構(gòu)是指整條多肽鏈的三維結(jié)構(gòu)，包括骨架和側(cè)鏈在內(nèi)的所有原子的空間排列。如果蛋白質(zhì)分子僅由一條多肽鏈組成，三級結(jié)構(gòu)就是它的zui高結(jié)構(gòu)層次。四級結(jié)

蛋白質(zhì)的創(chuàng)造和改造2011/01/25

蛋白質(zhì)的創(chuàng)造和改造蛋白質(zhì)的分子設(shè)計是蛋白質(zhì)工程的一個重要方面。設(shè)計分成三類：一是小范圍改造，就是對已知結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)進行少數(shù)幾個殘基的替換，來研究和改善蛋白質(zhì)的性質(zhì)和功能；二是較大程度的改造，是對來源于不同蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)域進行拼接組裝，期望轉(zhuǎn)移相應(yīng)的功能；三是蛋白質(zhì)從頭設(shè)計。所謂蛋白質(zhì)從頭設(shè)計就是給定一個目標(biāo)三維結(jié)構(gòu)，要求找出與已知順序無明顯同源，能折疊成目標(biāo)結(jié)構(gòu)的氨基酸順序來。1．定點突變蛋白質(zhì)中的氨基酸是由基因中的三聯(lián)密碼決定的，只要改變其中的一個或兩個就可以改變氨基酸。通常是改變某個位置的氨基

癌細胞的特征不死性遷移性和失去接觸抑制2011/01/25

癌細胞有3個基本特征：不死性、遷移性和失去接觸抑制。當(dāng)然，癌細胞還有許多不同于其他正常細胞的生理、生化和形態(tài)特征。（一）癌細胞的形態(tài)特征癌細胞大小、形態(tài)不一，通常比它的源細胞體積要大，核質(zhì)比顯著高于正常細胞可達1：1，正常的分化細胞核質(zhì)之比僅為1：4--6。并可出現(xiàn)巨核、雙核或多核現(xiàn)象。核內(nèi)染色體呈非整倍態(tài)（aneuploidy），某些染色體缺失，而有些染色體數(shù)目增加。正常細胞染色體的不正常變化，會啟動細胞凋亡過程。但是癌細胞中，細胞凋亡相關(guān)的信號通路產(chǎn)生障礙，也就是說癌細胞具有不死性。線粒體表

生命科學(xué)已與計算機外語一樣成為公共課2011/01/25

21世紀(jì)是生命科學(xué)的世紀(jì)。生命科學(xué)與生物技術(shù)領(lǐng)域的發(fā)展日新月異，該領(lǐng)域的研究成果正被逐步運用到人類生活的各個領(lǐng)域。同時，隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展與不斷進步，生命科學(xué)及生物技術(shù)正在不斷與其他學(xué)科交叉，產(chǎn)生新的交叉學(xué)科，并同其他學(xué)科一道，共同推進科學(xué)的發(fā)展與社會進步。在一定意義上講，生命科學(xué)與生物技術(shù)既是古老的學(xué)科，也是新興學(xué)科。之所以“古老”，是因為人類關(guān)注生命現(xiàn)象的歷史極為久遠，對生物技術(shù)進行利用的歷史至少也可以追溯到公元前。之所以為“新興”，是因為相對其他學(xué)科，如數(shù)學(xué)、物理、化學(xué)等，對生命科學(xué)及生物