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生物試劑銷售中心幫您辨別胎牛血清的真假！2015/10/23
市場上的胎牛血清種類繁多，魚龍混雜，很多科研工作者，特別是剛接觸細胞培養(yǎng)的人，難以分辨血清質(zhì)量的優(yōu)劣。試劑銷售科技有限公司為您總結(jié)如下：一、外觀拿到血清，zui先接觸的是血清外觀，對于缺少細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說，外觀的判斷尤為重要。1、顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同，胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色，我國的細胞培養(yǎng)用血清標(biāo)準(zhǔn)是不高于20mg/dl，實際上，血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響，這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度，良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的采血點很分散，大多是由屠戶采
構(gòu)建穩(wěn)定細胞株的兩種方法2015/10/23
構(gòu)建穩(wěn)定的細胞株，通常有二種方法：一是脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染后，單克隆篩選穩(wěn)定細胞株。二是應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒，慢病毒轉(zhuǎn)染，篩選穩(wěn)定細胞株。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染：在轉(zhuǎn)染24小時后，消化細胞并計數(shù)。將細胞種到96孔板，保證每個孔2-3個細胞，這樣才能得到單克隆。待細胞貼壁后，加入抗生素篩選。篩選時間和濃度視細胞而定。一般G418一個星期作用，嘌呤霉素2-3天。脂質(zhì)體法篩單克隆時間較長，且效率低，大概只有1%。病毒轉(zhuǎn)染：先要用包裝細胞，一般為293細胞，包裝出病毒，再用病毒轉(zhuǎn)染目的細胞。包裝病毒視不同類型的病毒而定，一般要3-
細胞培養(yǎng)中常用培養(yǎng)基2015/10/21
1、RPMI-1640Medium,RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動物、特殊造血細胞、正?；驉盒栽錾陌准毎s交瘤細胞的培養(yǎng)，是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細胞、T細胞淋巴瘤細胞以及HCT-15上皮細胞等均可參考使用。2、MinimumEssentialMedium(MEM),也稱zui低必需培養(yǎng)基，它僅含有12種必需氨基酸、谷氨酰胺和8種維生素。成分簡單，可廣泛適應(yīng)各種已建成細胞系和不同地方的哺乳動
細胞培養(yǎng)基分類2015/10/21
細胞培養(yǎng)基分類1.按照培養(yǎng)基的成分來分，培養(yǎng)基按其所含成分，可分為合成培養(yǎng)基、天然培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基三類。(1)合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分*是已知的各種化學(xué)物質(zhì)。這種培養(yǎng)基的化學(xué)成分清楚，組成成分，重復(fù)性強，但價格較貴，而且微生物在這類培養(yǎng)基中生長較慢。如高氏一號合成培養(yǎng)基、察氏(Czapek)培養(yǎng)基等。(2)天然培養(yǎng)基。由天然物質(zhì)制成，如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯，前者用于培養(yǎng)霉菌，后者用于培養(yǎng)細菌。這類培養(yǎng)基的化學(xué)成分很不恒定，也難以確定，但配制方便，營養(yǎng)豐富，所以常被采用。(3)半合
細胞系的復(fù)蘇2015/10/16
一、細胞系復(fù)蘇的原則在實際操作中，凍存細胞要進行復(fù)蘇，再培養(yǎng)傳代。復(fù)蘇細胞一般采用快速融化法。以保證細胞外結(jié)晶快速融化，以避免慢速融化水分滲入細胞內(nèi)，再次形成胞內(nèi)結(jié)晶損傷細胞。二、細胞系復(fù)蘇的主要操作步驟（1）佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出安瓿或冷凍管。（2）迅速放入38℃水浴中，并不時搖動，在1分鐘內(nèi)使其*融化，然后在無菌下取出細胞。（3）在1000r/min速度下離心5～10分鐘，棄去上層液，加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度1×109/L，置37℃溫箱靜置培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液，繼
細胞凍存及復(fù)蘇詳談2015/10/16
細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5％．15％的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。（一）細胞凍存1.配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；2.取對數(shù)生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中；3.離心1000rpm，5min；4.去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細
細胞成活率形態(tài)學(xué)觀察法及檢測法2015/10/16
細胞成活率形態(tài)學(xué)觀察法及檢測法細胞成活率，判斷之形態(tài)學(xué)觀察法：胞內(nèi)出現(xiàn)顆?；蚩张荨＜毎麅?nèi)如果出現(xiàn)顆粒物質(zhì)，表明細胞處于非健康狀態(tài)。同樣，細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡也說明細胞處于非健康狀態(tài)。細胞喪失雙折射性：1)如果發(fā)生在單層細胞：一個具有雙折射性的正常細胞逐步失去這一特征（相差顯微鏡下細胞邊緣成暈環(huán)），則提示該細胞已經(jīng)死亡，即zui終干枯死亡。2)如果發(fā)生在懸浮細胞：正常懸浮細胞清晰透明，如胞內(nèi)出現(xiàn)顆粒或變渾濁表明細胞受損，甚至死亡。3)怎樣去除死細胞？單層培養(yǎng)的細胞死亡后，一般會漂浮起來，因此不需要特殊處
淺談ELISA操作步驟2015/10/14
酶聯(lián)免疫吸附實驗材料，試劑，溶液1．酶標(biāo)板，100μltip頭，1mlEp管，濕盒2．包被稀釋液（0.05mol/L碳酸鈉-碳酸氫鈉buffer,pH9.6）碳酸鈉0.15g,碳酸氫鈉0.29g,疊氮鈉0.02g,加雙蒸水至100ml,調(diào)至pH9.63.封閉液(5%小牛血清/PBS溶液)小牛血清5ml,1*PBS(pH7.4)95ml4.洗滌液(PBST,pH7.4)NaCl0.8g,KH2PO40.02g,Na2HPO4.12H2O0.29g,KCl0.02g,Tween200.05ml
人I型膠原蛋白（COL-1）Elisa試劑盒注意事項2015/10/14
【人I型膠原蛋白(COL-1)Elisa試劑盒樣本要求】1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3)，因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。2、標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能立即試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。【人I型膠原蛋白(COL-1)Elisa試劑盒注意事項】1、實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進行，實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存
淺談ELISA試劑盒基本原理2015/10/13
生物試劑銷售中心ELISA試劑盒基本原理是抗原或抗體預(yù)先結(jié)合到某種固相載體表面；測定時，將待測樣品(含待測抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按一定程序與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物；反應(yīng)終止時，固相載體上酶標(biāo)抗原或抗體被結(jié)合量(免疫復(fù)合物)與待測標(biāo)本中待檢抗體或抗原的量呈一定比例；經(jīng)洗滌去除反應(yīng)液中其他物質(zhì)，加入底物進行顯色，zui后通過定性或定量分析有色產(chǎn)物量即可確定樣品中待測物質(zhì)含量。
淺談ELISA的原理及類型2015/10/13
ELISA的原理及類型1.ELISA的原理ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，
胎牛血清在細胞培養(yǎng)中的主要作用2015/10/12
一、胎牛血清在細胞培養(yǎng)基中的主要作用胎牛血清是細胞培養(yǎng)中用量zui大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋
HyClone胎牛血清培養(yǎng)肌細胞的兩種方法2015/10/10
HyClone胎牛血清培養(yǎng)血管平滑肌細胞常用的方法有貼塊法(explant)和酶解離法(enzymedisperse)。1、貼塊法方法：動物經(jīng)頸動脈放血后，在無菌操作下迅速取出胸腹主動脈段，置于含Hank's液的平皿中漂洗3次，將凝塊洗干凈后剝除外膜的纖維脂肪層，然后縱行切開血管，刮除內(nèi)膜即內(nèi)皮細胞迅速撕下中膜內(nèi)、中層，切成約1mm寬的小條，浸泡在含血清的Hank's液中，并將撕下小組織塊種植于培養(yǎng)瓶壁。置于37℃恒溫箱，2h左右，取出培養(yǎng)瓶加入20%HyClone胎牛血清的培養(yǎng)液，再放回培養(yǎng)箱
ELISA試劑盒實驗不可忽視的小細節(jié)2015/10/08
ELISA試劑盒可用于測定抗原，也可用于測定抗體。根據(jù)試劑的來源和標(biāo)本的性狀以及檢測的具備條件，可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。主要有：直接法、雙抗體夾心法、間接法、競爭法、雙位點一步法、捕獲法、應(yīng)用親和素和生物素系統(tǒng)（ABS）等。ELISA試劑盒必須遵守以下3個核心原理：（1）抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其免疫學(xué)活性；（2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；（3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免
血清的保存及使用注意事項2015/09/30
血清是細胞培養(yǎng)中zui重要的元素之一。在實驗室操作中要注意及處理方法：1.血清保存:建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。然而，若存放于4℃時，請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。2.解凍血清的方法:建議您將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。3.血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理?血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成
Gibco胎牛血清保存過程中的問題處理方法2015/09/29
一、保存Gibco胎牛血清的方法？我們建議Gibco胎牛血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝Gibco胎牛血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍。二、何解凍Gibco胎牛血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損？將Gibco胎牛血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。三、Gibco胎牛血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn)，該如何處理？Gibco胎牛血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但zui普
細胞株的傳代與培養(yǎng)2015/09/24
培養(yǎng)細胞株傳代根據(jù)不同細胞采取不同的方法。貼壁生長細胞如COS-7、CHO等用消化法傳代；部分貼壁生長的細胞如PC12用直接吹打即可傳代。一、用品(1)0.25％胰蛋白酶，全培養(yǎng)液(2)滴管，離心管，培養(yǎng)瓶(皿)，培養(yǎng)瓶蓋，注射器，計數(shù)6二、步驟(1)貼壁細胞的消化法傳代：①吸除瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。②以50ml培養(yǎng)瓶為例，向瓶內(nèi)加入2-3ml胰蛋白酶，輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使消化液流遍所有細胞表面。③消化在37C或室溫25C以上環(huán)境下進行。消化后把培養(yǎng)瓶放置顯微鏡下進行觀察．發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后。應(yīng)
ELISA試劑盒實驗八大禁忌2015/09/21
1．ELISA試劑盒從冷躲環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝進密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，ELISA試劑盒稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其正確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)目多，推薦使用排槍加樣。4．如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先將樣本稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)（×5×n）。5．封板膜只
HEPES緩沖液使用方法簡介2015/09/15
在細胞培養(yǎng)過程中，經(jīng)常少不了HEPES緩沖液。那么，HEPES緩沖液的配制和使用方法怎樣呢?HEPES緩沖液是一種弱勢，在開放式的培養(yǎng)條件中，若加入HEPES，可防止培養(yǎng)基內(nèi)pH氧化升高，從而將PH維持在7.0左右。HEPES分子量為238.31，分子式:C8H18N2O4S。HEPES常用于生物緩沖劑，pH值緩沖范圍：6.8-8.2，用在生化診斷試劑盒、DNA/RNA提取試劑盒及PCR診斷試劑盒里。HEPES使用方法有兩種：(1)HEPES可按所需的濃度直接加入到配制的培養(yǎng)液中，再過濾除菌。每
SH-SY5Y細胞培養(yǎng)說明，人神經(jīng)母細胞瘤細胞2015/09/06
細胞介紹SH-SY5Y是1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞系經(jīng)三次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。該細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。SH-SY5Y細胞的飽和密度大于1X106細胞/cm2。細胞特性1）來源：腦神經(jīng)母細胞瘤，轉(zhuǎn)移部位骨髓2）形態(tài)：上皮細胞樣3）含量：1x106個/mL4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性5）規(guī)格：T75瓶或者1mL凍存管包裝運輸和保存：使用含有胎牛血清的2ml凍存管發(fā)送存活細胞。收到細
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