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2018
03-05

轉(zhuǎn)錄組常見問題與解答
轉(zhuǎn)錄組是某個物種或者特定細胞類型產(chǎn)生的所有轉(zhuǎn)錄本的集合，轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)是zui近發(fā)展起來的利用深度測序技術(shù)進行轉(zhuǎn)錄分析的方法,可以對全轉(zhuǎn)錄組進行系統(tǒng)的研究。RocheGSFLXTitanium、IlluminaSolexaGAIIx和ABSOLID4均可以對轉(zhuǎn)錄組進行測序，RocheGSFLXTitanium與IlluminaSolexaGAIIx和ABSOLID4相比，擁有更長的讀長和較小的數(shù)據(jù)量，適用于表達量較高基因的RNA全長測序。但是對低表達豐度的基因，可能需要多次測序才能
2018
03-05

三維基因組Hi-C技術(shù)解析
Hi-C(High-throughchromosomeconformationcapture)是以整個細胞核為研究對象，利用高通量測序技術(shù)，結(jié)合生物信息分析方法，研究全基因組范圍內(nèi)整個染色質(zhì)DNA在空間位置上的關(guān)系，獲得高分辨率的染色質(zhì)調(diào)控元件相互作用圖譜。Hi-C可以與RNA-Seq、ChIP-Seq等數(shù)據(jù)進行聯(lián)合分析，從基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和表觀遺傳網(wǎng)絡(luò)來闡述生物體性狀形成的相關(guān)機制。一、技術(shù)優(yōu)勢1、無需專門構(gòu)建群體，單個樣本實現(xiàn)輔助基因組組裝；2、率高，人類基因組錨定染色體率為98%，排序和定；3
2018
03-02

ChIP實驗技術(shù)經(jīng)驗分享
染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（ChromatinImmunoprecipitation，簡稱ChIP）是研究活體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA相互作用的一種技術(shù)。它利用抗原抗體反應(yīng)的特異性，可以真實地反映體內(nèi)蛋白因子與基因組DNA結(jié)合的狀況。隨著對基因功能研究的不斷深入，這項技術(shù)正越來越多的被應(yīng)用于科研的各個領(lǐng)域。ChIP的原理把生理狀態(tài)下的細胞內(nèi)的DNA與蛋白質(zhì)交聯(lián)在一起，通過超聲或酶處理將染色質(zhì)切為小片段后，利用抗原抗體的特異性識別反應(yīng)，將與目的蛋白相結(jié)合的DNA片段沉淀下來，然后可進行后續(xù)的DNA序列測序鑒定等。
2018
03-02

WB檢測全攻略
WesternBlot,對于任何一個科研君都不陌生，但是，為甚么別人的實驗時間短、跑膠快、成像顯影辣么好看活生生的羨慕，嫉妒，hen(哼)，足足被甩了幾篇SCI?內(nèi)情你知否？除了實驗精細化操作，選擇合適的實驗試劑，還有呢？當然離不開你的優(yōu)化設(shè)計你對關(guān)鍵步驟的步步為營。本文旨在通過提供建議，幫助您在短時間、以更少的終端用戶優(yōu)化調(diào)整得到預(yù)期結(jié)果，提升免疫印跡效果。PS：科研是不斷進步的過程，有不當之處，望指正。何為蛋白印跡（WB）蛋白印跡也稱作免疫印跡，是一種被廣泛應(yīng)用并得到*的技術(shù)，用于檢測細胞或
2018
03-02

細胞類代謝組學樣本收集步驟
適用細胞類型：哺乳動物細胞（CHO、NS0、CD-hybridoma細胞系）樣品量要求：1*107cell/sample，提供2份樣本。樣本收集步驟：1）使用細胞計數(shù)器測定細胞數(shù)量，計算出所需淬滅緩沖液的量。下圖以細胞數(shù)量1*107為例；NOTE：①使用50ml圓錐形管一次處理樣本zui大量為8ml，如果樣本量8ml，就分開做；②淬滅過程時間敏感，兩個人操作。2）將5倍樣本體積的淬滅緩沖液加入50ml圓錐形管中；3）在低溫恒溫器上預(yù)冷淬滅緩沖液至-40℃（淬滅緩沖液：60%（v/v）甲醇+0.8
2018
03-01

MTT法簡介及操作步驟
一、MTT是什么MTT是一種粉末狀化學試劑，全稱為3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，漢語化學名為3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍。是一種黃顏色的染料。二、MTT法用來做什么簡單地說：是一種檢測細胞存活和生長的方法。MTT主要有兩個用途1．藥物（也包括其他處理方式如放射線照射）對體外培養(yǎng)的細胞毒性的測定；2．細胞增殖及細胞活性測定。三、為何MTT可以用來做上述工作檢測
2018
03-01

手性色譜柱的分類和原理
手性色譜柱（ChiralHPLCColumns）是由具有光學活性的單體，固定在硅膠或其它聚合物上制成手性固定相（ChiralStationaryPhases）。通過引入手性環(huán)境使對映異構(gòu)體間呈現(xiàn)物理特征的差異，從而達到光學異構(gòu)體拆分的目的。要實現(xiàn)手性識別，手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵、偶級-偶級作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用或空間作用。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結(jié)果。這些相互作用通過影響包埋復合物的形成，特殊位點與分析物的鍵合等而改變手
2018
02-28

HE染色經(jīng)驗總結(jié)
的HE染色切片應(yīng)該具備切片完整、無皺褶、細胞核著色清晰呈藍色、細胞質(zhì)呈鮮紅色、核仁核膜核內(nèi)染色質(zhì)顆粒清晰，核質(zhì)藍紅分明、對比清晰、透明度好等屬性；劣質(zhì)的HE染色切片會出現(xiàn)切片不完整，染色灰暗，紅藍對比不明顯，有甚者染色后的切片鏡下呈云霧狀、組織結(jié)構(gòu)不清楚等狀況，對于科研黨和病理檢驗工作者來說，想要一張好的組織HE染色圖，看似簡單但也不簡單。目前，我們收集了一些導致組織切片染色不佳的原因及解決辦法，希望對大家的科研工作有一定的幫助。1．切片污染：包括染液的污染和組織污染所謂染色的污染，是由于蘇木精
2018
02-28

蛋白質(zhì)保存方法大全
蛋白質(zhì)的保存是一個比較棘手的問題，分子生物學實驗室的童鞋們或多或少都會碰到。有沒有遇到過，不同批次純化的蛋白，采用同樣的測試方法，活性卻不太一樣？有沒有遇到過新純化的蛋白，從冰箱拿出融化后，居然沉淀了？蛋白質(zhì)純化后，保存方式都有哪些呢？一、謹記蛋白質(zhì)的保存原則低溫、分裝、濃縮、速凍／速融、添加劑二、保存方法你知多少蛋白質(zhì)的的保存方法的選擇*取決于蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性以及保存后什么時候再次使用你的蛋白。1、如即提即用的話，可將濃縮蛋白質(zhì)儲存在單一溶液（如PBS），置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中，放在4°
2018
02-28

常見免疫組化難題解答
1、石蠟切片和冰凍切片的比較？（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是今天我向一老師請教得出的結(jié)論。因為作石蠟切片時要高溫烤片，可能會破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩(wěn)定，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片。（2）冰凍切片的優(yōu)點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內(nèi)易形成冰晶而破壞細胞結(jié)構(gòu)，可能會使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮。當你買一抗時，目錄上都寫著做什么樣的切片，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟，如
2018
02-27

生物制品的質(zhì)量及質(zhì)量管理的基本原理
一、生物制品質(zhì)量的特殊性和重要性一切工業(yè)產(chǎn)品包括藥品的生產(chǎn)，都要求把質(zhì)量放在*，強調(diào)“質(zhì)量是企業(yè)發(fā)展的生命”，這是人們所熟知的基本常識。生物制品是用于預(yù)防傳染病、臨床治療、急救和診斷的具有生物活性的制品，其質(zhì)量具有自身的特殊性和重要性，必須更加強調(diào)“質(zhì)量*”的原則。這是因為：*，所有預(yù)防制品如疫苗都是直接用于大量健康人群，特別是用于大量兒童包新生兒的免疫接種，其質(zhì)量的優(yōu)劣，直接關(guān)系到千百萬人的健康和生命安危；第二，所有治療制品如血液制劑、抗毒素、免疫血清或免疫調(diào)節(jié)制劑，都是通過非胃腸途徑，直接用
2018
02-27

噬菌體平臺應(yīng)用解析
PartI：天然抗體庫構(gòu)建、免疫抗體庫構(gòu)建、多種片段抗體庫構(gòu)建、抗體人源化1、技術(shù)路線外周血淋巴細胞/脾細胞?提取RNA/gDNA?PCR出全套抗體片段（Fab、scFv等）?隨機重組插入噬菌體外殼蛋白?感染大腸桿菌?抗體片段展示于噬菌體表面?抗原特異性篩選?富集有效結(jié)合克隆?擴增結(jié)合力強的克隆。2、技術(shù)應(yīng)用（主要在醫(yī)學口）（1）在寄生蟲醫(yī)學中的應(yīng)用（如瘧原蟲、吸血蟲等），進行診斷試劑與疫苗的開發(fā)，例如分子疫苗制備、保護性抗原制備。篩選抗靶蛋白抗體可變區(qū)---研究蛋白分子免疫識別---篩選診斷試
2018
02-26

基因工程實驗報告的實驗步驟
實驗一：大腸桿菌DH5α和BL21感受態(tài)細胞的制備【實驗步驟】1從LB平板上挑取新活化的大腸桿菌DH5α單菌落，接種到5mLLB培養(yǎng)基中，37℃振蕩培養(yǎng)過夜。2取1mL培養(yǎng)物接種到100mLLB培養(yǎng)基（250mL三角瓶）中，37℃振蕩培養(yǎng)2~3h。3將菌液轉(zhuǎn)移到50mL離心管（2管）中，冰上放置15min。44℃4000rpm離心5min，棄去上清液，倒置使培養(yǎng)液流盡。5用20mL冷CaCl2溶液懸浮菌體沉淀合并成一管，在4℃4000rpm離心5min，棄去上清液。6用10mL冷CaCl2溶液懸
2018
02-26

綜述生物檢定法在食品安全監(jiān)測分析中的應(yīng)用
生物制品的生物學檢定方法生物檢定法是利用微生物或?qū)嶒瀯游飦頇z定制品效價的方法，其通過檢查制品中某些痕量雜質(zhì)可對生物體產(chǎn)生特殊的生理作用及影響用藥的安全有效性進行評價。主要包括細菌學檢查、純菌檢測、微生物限變監(jiān)測、支原體檢測、動物試驗、熱原試驗、內(nèi)毒素檢測及效價檢測。細菌學檢查主要應(yīng)用于預(yù)防和治療用的生物制品，使生物制品中不含專門規(guī)定外的雜菌；滅活細菌疫苗、病毒類疫苗不含活的本細菌、本病毒。動物試驗又包括異常毒性試驗（目的是通過動物實驗檢查制品中外源性毒性物質(zhì)的傳染情況以及是否存在意外的不安全因素
2018
02-26

微生物實驗室無菌操作技術(shù)規(guī)范
1.目的規(guī)范無菌操作流程，減少及避免發(fā)生染菌現(xiàn)象出現(xiàn)。2.使用范圍無菌室及潔凈區(qū)的操作。3.無菌操作技術(shù)原則3.1環(huán)境要清潔，在每次無菌操作結(jié)束后都需要對環(huán)境進行清理、清洗；且避免操作前進行清掃。3.2做好個人衛(wèi)生，進入無菌室前需修剪指甲、洗手，穿好無菌服，帽子需遮住所有頭發(fā)，口罩遮住口鼻。3.3在無菌操作時，不可講話，打噴嚏，對懷疑染菌的無菌物品，不可使用。4.內(nèi)容4.1.1準備：工作人員著裝整潔，洗手、戴口罩、修剪指甲；備齊用物（如：接種針、接種環(huán)、酒精燈、斜面、平皿、搖瓶、75%酒精棉、無
2018
02-24

gst pull down實驗流程
蛋白-蛋白相互作用是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能研究中zui重要的方面之一。GSTpull-down將靶蛋白與GST融合表達，并將蛋白固化在谷胱甘肽(GSH)親和樹脂上，作為與目的蛋白親和的支撐物，充當“誘餌蛋白”，目的蛋白溶液過柱，可從中捕獲與之相互作用的“捕獲蛋白”（目的蛋白），洗脫結(jié)合物后通過電泳分析，從而證實兩種蛋白間的相互作用或篩選相應(yīng)的目的蛋白。"誘餌蛋白"和"捕獲蛋白"均可通過細胞裂解物、純化的蛋白、表達系統(tǒng)以及體外轉(zhuǎn)錄翻譯系統(tǒng)等方法獲得。此方法簡單易行，操作方便。GSTpull-down一般
2018
02-24

RNA pull dow實驗流程
RNAPullDown實驗流程使用體外轉(zhuǎn)錄法標記生物素RNA探針，然后與胞漿蛋白提取液孵育，形成RNA-蛋白質(zhì)復合物。該復合物可與鏈霉親和素標記的磁珠結(jié)合，從而與孵育液中的其他成分分離。復合物洗脫后，通過westernblot實驗檢測特定的RNA結(jié)合蛋白是否與RNA相互作用。蛋白質(zhì)與RNA的相互作用是許多細胞功能的核心，如蛋白質(zhì)合成、mRNA組裝、病毒復制、細胞發(fā)育調(diào)控等。若待檢測目的蛋白明確，選擇Westernblot鑒定；若不明確，則可選擇質(zhì)譜鑒定。RNApull-down是檢測RNA結(jié)合蛋
2018
01-22

蛋白純化親和層析技術(shù)的原理及應(yīng)用分類
一．蛋白純化親和層析技術(shù)的原理蛋白質(zhì)親和層析技術(shù)適應(yīng)于理化性質(zhì)差異性較小而難分離的蛋白質(zhì)，親和層析利用固相介質(zhì)中的配基與混合生物分子之間親和能力不同而進行分離，當?shù)鞍状謽颖荆ɑ旌掀渌s蛋白、糖類、核酸及小分子）通過層析柱時，與配基能夠特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)就會被吸附固定在層析柱中，其他的蛋白質(zhì)、核酸等對配體不具有特異性的結(jié)合能力，將通過柱子洗脫下來，這種結(jié)合在一定條件下是可逆的，選用適當?shù)南疵撘?，改變緩沖液的離子強度和pH值或者選擇更強的配體結(jié)合溶液將結(jié)合的蛋白質(zhì)洗脫下來，而無親和力的蛋白質(zhì)zui先
2018
01-22

Sanger測序技術(shù)的發(fā)展史
DNA測序技術(shù)是分子生物學研究中常用的技術(shù)，它的出現(xiàn)極大地推動了生物學的發(fā)展。成熟的DNA測序技術(shù)始于20世紀70年代中期。1977年Maxam和Gilbert報道了通過化學降解測定DNA序列的方法。同一時期，Sanger發(fā)明了雙脫氧鏈終止法。20世紀90年代初出現(xiàn)的熒光自動測序技術(shù)將DNA測序帶入自動化測序的時代。這些技術(shù)統(tǒng)稱為*代DNA測序技術(shù)。*代測序技術(shù)在分子生物學研究中發(fā)揮過重要的作用，如人類基因組計劃(humangenomeprojec，tHGP)主要基于*代DNA測序技術(shù)。目前基于
2018
01-19

定量蛋白質(zhì)組學的方法有哪些
1背景和意義從生命活動的直接執(zhí)行者——蛋白質(zhì)的角度研究生命現(xiàn)象和規(guī)律（特別是疾病防治和病理研究）已成為研究生命科學的主要手段。而這些研究往往離不開對細胞、組織或器官中含有蛋白質(zhì)種類和表達量的研究。對處不同時期、不同條件下蛋白質(zhì)表達水平變化的研究，識別功能模塊和路徑，監(jiān)控疾病的生物標志物，這些研究都需要對蛋白質(zhì)進行鑒定和定量。生物質(zhì)譜技術(shù)的出現(xiàn)和不斷成熟為蛋白質(zhì)差異表達分析提供了更可靠、動態(tài)范圍更廣的研究手段。基于質(zhì)譜技術(shù)，科學家們不斷開發(fā)出新的定量蛋白質(zhì)組學方法，來了解細胞、組織或生物體的整體蛋

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