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牛血清作用2015/12/08

牛血清的作用：一、能提供對維持細胞指數(shù)生長的激素，基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。二、能提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力。三、在有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。四、是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。五、能起酸堿度緩沖液作用。六、能提供蛋白酶抑制劑，使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。

免疫療法對于癌癥的作用2015/12/08

相比于只接受樹突狀細胞治療的患者，隨機接受破傷風注射的患者從預處理開始的生存期顯著延長，相比于對照組的11.6個月，接受破傷風注射的患者中一半人生存了51-101個月。來自破傷風組的一名患者在治療8年后都沒有任何的腫瘤生長，仍然存活。在一項小型人類研究中，他們招募了12名腦腫瘤患者，一半人被隨機分配接種破傷風加強劑，另一半人接受安慰劑注射。第二天，兩組患者均給予樹突狀細胞免疫治療。研究人員并不清楚患者接受了哪種治療。這樣的靶向療法利用的是樹突狀細胞，它訓練了免疫系統(tǒng)對特定的病原體做出反應。杜克大

細胞培養(yǎng)特別注意事項2015/11/04

特別注意：如使用公共實驗室或初次接觸細胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)1.收到細胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過72小時）2.貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞放置培養(yǎng)箱孵育過一夜到第二天再做消化傳代3.如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并實驗室

細胞培養(yǎng)常見問題解答2015/11/04

1冷凍管應如何解凍?取出冷凍管后，須立即放入37°C水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化，并注意水面不可超過冷凍管蓋沿，否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管之爆裂。2細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時，是否應馬上去除DMSO?除少數(shù)特別注明對DMSO敏感之細胞外，絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞)，在解凍之后，應直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。3可否使用與

收到細胞注意事項2015/11/04

收到細胞注意事項：1、收到細胞后，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快。2、，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要打開細胞培養(yǎng)瓶，應立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右，讓細胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。3、收到細胞

收到細胞后的操作流程及注意事項2015/11/04

1.如果細胞為貼壁細胞，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細胞都沒有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡，請及時實驗室，技術人員會跟進解決2.貼壁細胞生長緩慢：適當提高血清濃度（zui高不能超過20%），或可根據(jù)該細胞生長密度，考慮胰酶消化后，轉移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)3.生長不均：貼壁細胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細胞進行消化，重懸打散細

細胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程2015/11/04

（請嚴格遵照無菌操作）1．吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細胞兩次，加2~3ml0.25%胰酶進行消化細胞（注意把握消化時間，通?？刂圃?-2min）2．鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让?，加6~8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，盡量把細胞層吹落，吹散3．取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當?shù)?培養(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4．注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細胞密度達到80%以后重復1項操作或者凍存

ELISA試劑盒實驗操作注意事項2015/11/04

elisa實驗操作中常見問題分析由于ELISA(酶聯(lián)免疫試驗)具有靈敏度較高、特異性好的特點，已廣泛應用于各種傳染性疾病的篩查如肝炎、愛滋、優(yōu)生優(yōu)育等。雖然洗板只是ELISA實驗重要環(huán)節(jié)中的一個，但作為專業(yè)的洗板機生產(chǎn)廠家，我們必須對影響ELISA實驗結果各因素有一定的認識。的試劑，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA技術結果準確可靠的必要條件。如不注意，就易出現(xiàn)白板、花板、色弱和假陽性等現(xiàn)象。尤其是花板現(xiàn)象(就是空白、陰性、陽性對照以及室內(nèi)質控孔結果正常，而標本孔的OD值卻明顯偏高)是各個廠

ELISA試劑盒技術樣本的原理和步驟2015/11/04

自備物品1.酶標儀(盡量提前預熱)2.微量加液器、吸頭3.蒸餾水或去離子水以及濾紙樣本的采集及保存一般的生物標本包括有：血液、體液、內(nèi)臟器官、糞便、胃液、活檢組織、組織提取液、天然孔分泌物及各種表達系統(tǒng)的表達產(chǎn)物等一般為無菌操作，低溫保存(-80℃、液氮)一．如果采集的實質器官則要求：1、器官實質不能太小2、以采集實質性病灶區(qū)為佳：如淋巴結、心臟、非、肺、脾以及腸管等病毒、病菌聚集的地方為佳3、同一病例裝入同一容器，并做好標記4、應在0-8℃的低溫儲存和運輸5、實質性器官的處理：5.1、取實質性

小鼠神經(jīng)干細胞培養(yǎng)2015/10/10

小鼠神經(jīng)干細胞培養(yǎng)復蘇：將小鼠神經(jīng)干細胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細胞懸液轉移至含3-4ml小鼠神經(jīng)干細胞*培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離心5min。離心后將上清液吸除，另加入新鮮的小鼠神經(jīng)干細胞*培養(yǎng)液2ml，吹打懸浮。輕輕吹打，制成單細胞懸液，盡量避免氣泡。按照小鼠神經(jīng)干細胞說明書中建議復蘇培養(yǎng)體系轉移至一個T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，加入培養(yǎng)液6ml。放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。復蘇第二天

小鼠胚胎干細胞（mES細胞）、小鼠iPS無飼養(yǎng)層培養(yǎng)2015/10/10

小鼠胚胎干細胞（mES細胞）、小鼠iPS無飼養(yǎng)層培養(yǎng)復蘇：在T25培養(yǎng)瓶中加入0.2%明膠，搖勻后覆蓋底面即可，于37℃細胞培養(yǎng)箱至少放置15min以上。吸除0.2%明膠，加入事先水浴加熱至37℃的小鼠胚胎干細胞、小鼠iPS細胞培養(yǎng)液5ml。將小鼠胚胎干細胞、小鼠iPS細胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細胞懸液轉移至含3-4ml小鼠胚胎干細胞、小鼠iPS細胞培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離

小鼠胚胎干細胞（mES細胞）、小鼠iPS細胞培養(yǎng)2015/10/10

小鼠胚胎干細胞（mES細胞）、小鼠iPS細胞培養(yǎng)MEF細胞鋪制：在T25培養(yǎng)瓶中加入0.2%明膠，搖勻后覆蓋底面即可，于37℃細胞培養(yǎng)箱至少放置15min以上。吸除0.2%明膠，加入事先水浴加熱至37℃的MEF*培養(yǎng)液。一般地，一個T25培養(yǎng)瓶中加入5mlMEF*培養(yǎng)液。按實驗需要：小鼠胚胎干細胞使用KM-rP3MEF或CF-1P3MEF；小鼠iPS使用ICR-rP3MEF，復蘇MEF細胞若干支。將凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及

人脂肪間充質干細胞培養(yǎng)2015/10/10

人脂肪間充質干細胞的基本培養(yǎng)方法復蘇：將人脂肪間充質干細胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細胞懸液轉移至含3-4ml人間充質干細胞（hMSC）*培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離心5min。離心后將上清液吸除，另加入新鮮的人間充質干細胞*培養(yǎng)液2ml，吹打懸浮。輕輕吹打，制成單細胞懸液，盡量避免氣泡。按照人脂肪間充質干細胞說明書中建議復蘇培養(yǎng)體系轉移至一個T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，加入培養(yǎng)液6ml。

人臍帶間充質干細胞培養(yǎng)方法2015/10/09

人臍帶間充質干細胞培養(yǎng)復蘇：將人臍帶間充質干細胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細胞懸液轉移至含3-4ml人間充質干細胞（hMSC）*培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離心5min。離心后將上清液吸除，另加入新鮮的人間充質干細胞*培養(yǎng)液2ml，吹打懸浮。輕輕吹打，制成單細胞懸液，盡量避免氣泡。按照人臍帶間充質干細胞說明書中建議復蘇培養(yǎng)體系轉移至一個T25培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，加入培養(yǎng)液6ml。放入37℃

人胚胎干細胞（hES）培養(yǎng)方法2015/10/09

人胚胎干細胞（hES）培養(yǎng)MEF細胞鋪制：在T25培養(yǎng)瓶中加入5%Matrigel，搖勻后覆蓋底面即可，于37℃細胞培養(yǎng)箱中至少放置30min以上。吸除Matrigel，加入事先水浴加熱至37℃的MEF*培養(yǎng)液。一般地，一個T25培養(yǎng)瓶中加入5mlMEF*培養(yǎng)液。按實驗需要復蘇MEF若干支。將凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細胞懸液轉移至含2mlMEF*培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離心5m

人誘導型多能干細胞（hiPS）培養(yǎng)方法2015/10/09

人誘導型多能干細胞（hiPS）培養(yǎng)方法以下試劑和方法來自ATCC，僅供參考。若選用其它品牌的培養(yǎng)液請與您的試劑提供商。hiPS無飼養(yǎng)層*培養(yǎng)液（ATCC，ACS-3002），hiPS無飼養(yǎng)層消化液（ATCC，ACS-3010），hiPS無飼養(yǎng)層凍存液（ATCC，ACS-3020），基質膠（ATCC，ACS-3035），ROCKInhibitorY27632（ATCC，ACS-3030）復蘇：將人iPS細胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋

MEF P3細胞基本培養(yǎng)方法2015/10/09

MEFP3細胞的基本培養(yǎng)方法MEF細胞鋪制：一.作為【小鼠胚胎干細胞、小鼠iPS細胞】用飼養(yǎng)層時的使用方法：在T25培養(yǎng)瓶中加入0.2%明膠，搖勻后覆蓋底面即可，于37℃細胞培養(yǎng)箱中至少放置15min以上。吸除0.2%明膠，加入事先水浴加熱至37℃的MEF*培養(yǎng)液。一般地，一個T25培養(yǎng)瓶中約加入5mlMEF*培養(yǎng)液。按實驗需要：mES使用KM-rP3MEF；小鼠iPS使用ICR-rP3MEF或都使用CF-1-rP3MEF，復蘇MEF細胞若干支。將凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解

MEF P0細胞培養(yǎng)的基本方法2015/10/09

MEFP0細胞培養(yǎng)的基本方法復蘇：將MEFP0細胞凍存管從液氮中取出，置于37℃水浴中使之迅速融解，取出后拿到超凈臺內(nèi)用75%酒精擦拭凍存管旋口處及外壁，防止污染。將凍存管內(nèi)細胞懸液轉移至含3-4mlMEF*培養(yǎng)液的15ml離心管內(nèi)，以1000rpm，離心5min。離心后將上清液吸除，另加入新鮮的MEF*培養(yǎng)液2ml，吹打懸浮。輕輕吹打，制成單細胞懸液，盡量避免氣泡。按照MEF細胞說明書上建議的復蘇培養(yǎng)體系轉移至1個T75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，加入培養(yǎng)液14ml。放入37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。復蘇第二天觀察，

腫瘤細胞的基本培養(yǎng)方法2015/10/09

腫瘤細胞的基本培養(yǎng)方法分為八個步驟，分別為：(一)準備和安裝過濾器清洗好過濾器，干燥，放入一張孔徑0.22μm的微孔濾膜，用布包裝好，15磅20min進行高壓滅菌處理。在超凈臺內(nèi)打開過濾器架好，膠管一端接入濾泵再插入待除菌的液體中，出口端膠管深入到已消毒好的瓶子中。用泵過濾，過濾后要檢查濾膜是否完好無損。(二)合成培養(yǎng)基的配制1、根據(jù)細胞目錄中的說明，按下表選擇合適品牌及貨號的培養(yǎng)基干粉，用適量超純水充分溶解。培養(yǎng)基品牌貨號D-MEM/F-12GIBCO12400024Dulbecco'sMod

細胞凍存的具體操作步驟2015/09/24

細胞一般在凍存及復蘇的時候，很多客戶因為操作不當，比如溫度、保護劑、時間等沒控制好，導致凍存及復蘇細胞的時候，細胞容易出現(xiàn)活性差、狀態(tài)不好等情況，其實細胞凍存及復蘇的基本原則是“慢凍快融”，這樣可以zui大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多用甘油或二甲基亞砜（DMSO）作為保護劑，這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性；緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少冰晶對細胞的物理損傷。復蘇細胞采用快速融化的方法可以保證細胞外結晶在很短的時間內(nèi)融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞