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生長因子在細胞培養(yǎng)基中起到什么作用2023/02/24

細胞培養(yǎng)是生命科學的主要技術(shù)之一。它是指從動物或植物中取出細胞、組織或器官，然后將其置于有利于其生存和/或增殖的人工環(huán)境中的總稱。細胞最佳生長的基本環(huán)境要求是：控制溫度，細胞附著的底物，適當?shù)纳L介質(zhì)和培養(yǎng)箱，保持正確的pH值和滲透壓。細胞培養(yǎng)過程中最重要也是最關(guān)鍵的一步是選擇合適的培養(yǎng)基進行體外培養(yǎng)。生長培養(yǎng)基是一種液體或凝膠，用來支持微生物、細胞或小型植物的生長。細胞培養(yǎng)基一般包括適當?shù)哪芰縼碓春驼{(diào)節(jié)細胞周期的化合物。典型的培養(yǎng)基由氨基酸、維生素、無機鹽、葡萄糖和生長因子、激素和輔助因子等組

核糖核酸酶A(RNase A)的主要用途介紹2023/02/23

核糖核酸酶A（RNaseA）來源于牛胰臟，是一種內(nèi)切核糖核酸酶，可特異攻擊RNA上嘧啶殘基的3’端，切割胞嘧啶或尿嘧啶與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵，反應(yīng)終產(chǎn)物是3’嘧啶核苷酸和末端帶3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。無輔助因子及二價陽離子存在時，核糖核酸酶A的作用可以被胎盤RNA酶抑制劑（RNasin）或氧釩一核糖核苷復(fù)合物（vanadyl—ribonuclosidecomplex，VRC）所抑制。RNaseA的反應(yīng)條件極廣，且極難失活。在低鹽濃度（0～100mmol/lNaCl）下，RNaseA切割單

簡述一些常見連接酶的作用機制2023/02/23

常見種類和作用機制1、T4DNA連接酶T4DNA連接酶是目前應(yīng)用比較多的病毒基因組編碼的DNA連接酶，在基因重組中廣泛使用。噬菌體類型較多，目前研究發(fā)現(xiàn)T4噬菌體能夠合成T4DNA連接酶，并且已經(jīng)能夠從被T4嗜菌體感染的大腸桿菌中提取該酶，此外科學家也已經(jīng)定位該酶的合成基因，即噬菌體T4的30基因。T4DNA連接酶具有連接黏性末端和平末端的作用，研究人員總結(jié)DNA片段的連接過程，認為整個DNA連接反應(yīng)可以通過三個連續(xù)步驟來完成：（1）ATP通過斷裂最后一個高能磷酸鍵釋放能量，同時產(chǎn)生的AMP和T

關(guān)于不同種類的曲霉介紹2023/02/23

1、黃曲霉黃曲霉，半知菌類，一種常見腐生真菌。多見于發(fā)霉的糧食、糧制品及其它霉腐的有機物上。菌落生長較快，結(jié)構(gòu)疏松，表面灰綠色，背面無色或略呈褐色。菌體有許多復(fù)雜的分枝菌絲構(gòu)成。營養(yǎng)菌絲具有分隔；氣生菌絲的一部分形成長而粗糙的分生孢子梗，頂端產(chǎn)生燒瓶形或近球形頂囊，表面產(chǎn)生許多小梗（一般為雙層），小梗上著生成串的表面粗糙的球形分生孢子。分生孢子梗、頂囊、小梗和分生孢子合成孢子頭，可用于產(chǎn)生淀粉酶、蛋白酶和磷酸二酯酶等，也是釀造工業(yè)中的常見菌種。2、黑曲霉黑曲霉，半知菌亞門，絲孢綱，絲孢目，叢梗孢

原核細胞生物種類的介紹2023/02/23

原核生物（prokaryote）是以原核細胞構(gòu)成的，均為單細胞生物，通常稱為細菌（bacterium）。根據(jù)外表特征，可把原核生物粗分為“三菌三體”6種類型，即細菌（狹義的）、放線菌、藍細菌、支原體、立克次氏體和衣原體。1、細菌是在自然界分布zui廣、個體數(shù)量最多的有機體，是大自然物質(zhì)循環(huán)的主要參與者。細菌主要由細胞壁、細胞膜、細胞質(zhì)、核質(zhì)體等部分組成，有的細菌還有莢膜、鞭毛、菌毛等特殊結(jié)構(gòu)。絕大多數(shù)細菌的直徑大小在0.5-5微米之間。可根據(jù)形狀分成三類：球菌、桿菌和螺旋菌。2、放線菌微米放線菌

關(guān)于封閉液不得不說的這些事兒2023/02/22

最早的有關(guān)封閉的概念來源于免疫組化，1941年AlbertCoons發(fā)表文章，采用一種封閉液可以消除抗體的非特異性結(jié)合。原來，在免疫組化染色的過程中，發(fā)現(xiàn)有一些內(nèi)源性的生物素，酶等非特異性物質(zhì)干擾信號和增加背景，必須進行阻斷才能達到好的效果，這里有幾個英文詞來形容它的功能（blocking或quench）。所謂的好的視覺效果就是指高的信噪比（S/N），也就是降低背景信號。常用的封閉液一般有正常血清，脫脂奶粉，BSA，明膠等。進入分子生物學時代，出現(xiàn)了好幾個BLOT實驗，如westernblot，

簡述免疫熒光（IF）染色及優(yōu)化技巧2023/02/22

什么是IF（免疫熒光）染色？免疫熒光（IF）是一種用于檢測以及識別細胞和組織中蛋白質(zhì)和其他分子的亞細胞分布和遷移的強大檢測技術(shù)。IF可用作免疫組織化學(IHC)或免疫細胞化學(ICC)中使用的傳統(tǒng)顯色標記的替代物。通過使用多種標記物的二級抗體，可以研究感興趣蛋白的共定位，這是不能通過常規(guī)IHC或ICC實現(xiàn)。這是同時分析許多目標蛋白時的一個優(yōu)勢，可同時生成大量亞細胞定位的準確數(shù)據(jù)。什么時候使用IF？1.IF是一個很好的檢測技術(shù)工具，用于研究感興趣的產(chǎn)物如分子、蛋白質(zhì)或糖蛋白的表達、定位、分布和遷移

免疫球蛋白提取技術(shù)：IgG的分離與提純2023/02/22

免疫球蛋白（ImmunoglobulinIg）的含量代表著機體體液免疫的水平，并進一步代表著B細胞的功能，因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。隨著免疫學的發(fā)展和需要，免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為bi不可少的手段。純化的方法很多，有單一法，但大多數(shù)采用二步法以上相結(jié)合的方法，特別是以硫酸銨提純?yōu)榛A(chǔ)，再經(jīng)過層析柱的方法來提高免疫球蛋白及其各成分的純度最為常用。硫酸銨溶液能使蛋白質(zhì)膠體脫水并中和其電荷而使之沉淀下來（稱為鹽析）。不同濃度的硫酸銨鹽

細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型分析2023/02/22

培養(yǎng)基變渾濁的原因可能有如下幾點：1、細胞存在污染，污染早期可以見到細胞生長；2、不排除傳代時細胞密度過大，或者操作不當導(dǎo)致多數(shù)細胞不貼壁，大量細胞漂浮。3、細胞破碎。細胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細胞污染.他們在細胞培養(yǎng)中污染的特點如下：1、細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據(jù)感染細菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯.2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會

細胞裂解液各成分的作用與制備2023/02/21

細胞裂解液各成分的作用：1、第一種50mmol/LTris-HCl是緩沖液，保證細胞裂解時PH值也能穩(wěn)定，Tris是一種有機堿。2、第二種1.0mmol/LEDTA是一種金屬螯合劑。3、第三種150mmol/LNaCl是等滲體系電解質(zhì)，用于協(xié)調(diào)細胞膜內(nèi)外離子平衡。4、第四種0.1%SDS是十二烷基硫酸鈉，是一種表面活性劑和還原劑，有增溶作用。細胞裂解液的制備：一、試劑準備1、新鮮配制冷的RIPA裂解緩沖液:150mMNaCL1%NP-40(去垢劑)0.1%SDS(去垢劑)2ug/mlAproti

遠慕簡述化學感受態(tài)細胞的規(guī)范操作方法2023/02/21

化學感受態(tài)細胞是常規(guī)克隆和亞克隆實驗應(yīng)用較為合適的解決方案。經(jīng)氯化鈣處理，促進質(zhì)粒DNA黏附于感受態(tài)細胞膜上。將感受態(tài)細胞通過水浴熱激，使細胞膜孔打開，從而質(zhì)粒可以進入。操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）1、取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨毎麘乙悍盅b到無菌預(yù)冷的離心管中，置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100μl，可以根據(jù)實際情況分裝使用。應(yīng)注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。以下實驗以100μl感受態(tài)細胞為例。2、向感受態(tài)細胞懸液中加入

大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取及轉(zhuǎn)化2023/02/21

實驗概要本實驗包括大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取，質(zhì)粒DNA瓊脂糖凝膠電泳鑒定，大腸稈菌感受態(tài)細胞的制備及質(zhì)粒DNA高頻轉(zhuǎn)化大腸桿菌。實驗步驟1.大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提取堿裂解法：此方法適用于小量質(zhì)粒DNA的提取，提取的質(zhì)粒DNA可直接用于酶切、PCR擴增、銀染序列分析。方法如下：1)接1%含質(zhì)粒的大腸桿菌細胞于2mlLB培養(yǎng)基。2)37℃振蕩培養(yǎng)過夜。3)取1.5ml菌體于Ep管，以4000rpm離心3min，棄上清液。4)加0.lml溶液I(1％葡萄糖，50mM/LEDTApH8.0，25mM/L

如何評估質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量？2023/02/21

質(zhì)粒抽提過程中有很多步驟會影響最后的產(chǎn)量和質(zhì)量，那么如何評估質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量呢？目前使用分光光度法定量質(zhì)粒DNA和通過瓊脂糖凝膠電泳進行質(zhì)粒DNA產(chǎn)率和質(zhì)量的分析是兩種常用的方法。溶液中的核酸濃度可通過260nm的吸光度方便地進行計算。A260的數(shù)值處于0.1至1.0之間時測量結(jié)果具有良好的重復(fù)性，但當A260數(shù)值小于0.1或大于1.0的時候，結(jié)果的可重復(fù)性將顯著下降。而且，3.0以上的讀值是無法使用的，它可能會潛在導(dǎo)致對DNA質(zhì)量的低估。因此，為了獲得可靠的DNA分光光度定量結(jié)果，A26

細菌表達蛋白質(zhì)和樣本制備操作2023/02/20

一般直接用SDS凝膠加樣緩沖液裂解，具體方法如下：試劑與設(shè)備（1）表達待檢測蛋白質(zhì)的細菌。（2）50mmoL／LTris-HCl（pH7.4）。（3）2xSDS凝膠加樣緩沖液：100mmol／LTris—HCl（pH6.8）200mmol／L二硫蘇糖醇（DTT）4％SDS（電泳級）0.2％溴酚藍20％甘油不含有二硫蘇糖醇（DTT）的2XSDS凝膠加樣緩沖液可保存于室溫，臨用前須從1mol／L二硫蘇糖醇儲存液現(xiàn)用現(xiàn)加于上述緩沖液中。（4）臺式離心機。（5）超聲破碎儀。（6）水浴箱。（7）渦漩振蕩器

DNA凝膠加樣緩沖液(6×DNA Loading Buffer)簡介2023/02/20

DNA凝膠加樣緩沖液(6×DNALoadingBuffer)簡介：電泳是一種常用的實驗室技術(shù)，可鑒定、定量和純化核酸片段。將樣品上樣到瓊脂糖或丙烯酰胺凝膠的孔內(nèi)并放入電場，使帶負電荷的核酸向正極移動。較短的DNA片段遷移較快，而最長的片段將與起點距離最近，從而實現(xiàn)基于DNA片段大小的分離。DNA凝膠加樣緩沖液(6×DNALoadingBuffer)是一種經(jīng)過改良的六倍濃縮的DNA上樣緩沖液，主要用于DNA電泳。該試劑以二甲苯腈藍為指示劑，稀釋至1×后比重仍然較大，加樣后易下沉，且顏色清晰可見，起

RNA生物合成的抑制劑相關(guān)介紹2023/02/20

RNA生物合成的抑制劑相關(guān)介紹一、堿基類似物有些人工合成的堿基類似物能干擾和抑制核酸的合成。作用方式有以下兩類：（一）作為代謝拮抗物，直接抑制核苷酸生物合成有關(guān)酶類。如6-巰基嘌呤進入體內(nèi)后可轉(zhuǎn)變?yōu)閹€基嘌呤核苷酸，抑制嘌呤核苷酸的合成。可作為抗癌藥物，治療急性白血病等。此類物質(zhì)一般需轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的核苷酸才能表現(xiàn)出抑制作用。（二）進入核酸分子，形成異常RNA或DNA，影響核酸的功能并導(dǎo)致突變。5-氟尿嘧啶類似尿嘧啶，可進入RNA，與腺嘌呤配對或異構(gòu)成烯醇式與鳥嘌呤配對，使A-T對轉(zhuǎn)變?yōu)镚-C對。因為

DEAE-Sephadex A-50提取法純化多克隆抗體2023/02/17

DEAE-SephadexA-50（簡稱A-50）為弱堿性陰離子交換劑，經(jīng)過NaOH處理將Cl-型轉(zhuǎn)為OH-型后，可吸附酸性蛋白。γ1球蛋白屬中性蛋白，等電點為pH6.85～7.5，其余均屬酸性蛋白。在溶液為pH8.0時，酸性蛋白均被A-50吸附。從而可分離純化IgG。1.批量吸附法此法可在1天內(nèi)完成提取過程，純化前后樣品體積變化不大，所得IgG無變性現(xiàn)象，抗體效價亦無明顯降低。制品可達PAGE及免疫電泳純。適用于提純?nèi)?、羊、兔等血清中的IgG。【材料和試劑】（1）DEAE-SephadexA

DEAE-纖維素提取法純化多克隆抗體2023/02/17

DEAE-纖維素提取法純化多克隆抗體：該法提取IgG簡便，既可小量提取，也可大量制備。1．批量提取法稱取DEAE-纖維素（DE32或DE52）50g，置于1000ml燒杯中，先以蒸餾水漂浮除去細顆粒，再經(jīng)酸堿處理后，用0.01～0.05mol/L，pH8.0左右的磷酸鹽緩沖液（PB）平衡。將水分抽干，或用布氏濾斗（內(nèi)放兩層濾紙）過濾，收集濕纖維素，以降低其離子強度。按1ml血清加濕重5gDEAE纖維素，經(jīng)過充分攪拌，置4℃吸附1h。上清液可再如此處理一次，即獲得較純的IgG。該法提取I

遠慕簡述色素試劑-指示劑、顯色劑和染色劑2023/02/17

在化學試劑中，把帶有顏色或可改變顏色的一類試劑統(tǒng)稱為色素試劑，它包括了指示劑、顯色劑和染色劑。酸堿指示劑是遇到酸、堿能改變試劑顏色的指示劑，主要用來指示溶液的PH值，指示酸堿滴定的終點，如：甲基橙、酚酞、甲基紅等。這些酸堿指示劑也是一種染料，但一般染料并不能直接作為酸堿指示劑，一般要進行提純，嚴格控制試劑中的雜質(zhì)含量，否則可造成PH值變色范圍的遷移，影響滴定分析的結(jié)果。氧化還原指示劑是指遇到氧化劑或還原劑能改變顏色的試劑，主要指示溶液中的氧化劑或還原劑的存在、用于指示氧化還原滴定分析的終點，如二

革蘭氏染色實驗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)！2023/02/17

革蘭氏染色是一項經(jīng)典的細菌鑒別手段，自19世紀80年代丹麥的醫(yī)師GRAM創(chuàng)立起，至今已經(jīng)近一個半世紀，仍舊在細菌的檢測和鑒定分類上被廣泛應(yīng)用著。在我國，GB4789系列的國標中很多致病菌的檢測也都需要進行革蘭氏染色，可見其重要性。甚至可以說沒有精準掌握革蘭氏染色的微生物檢驗員，不會是一個合格的檢驗員。革蘭氏染色的原理：細菌細胞通過結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時，因失水反而使網(wǎng)