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純種微生物的分離、轉(zhuǎn)種和培養(yǎng)介紹2023/02/02: 實(shí)驗(yàn)概要本實(shí)驗(yàn)介紹了微生物分離和純化的基本原理，旨在掌握常用的分離純化微生物的方法、菌落特征的觀察、微生物的幾種接種技術(shù)、建立無菌操作的概念及無菌操作的基本環(huán)節(jié)。實(shí)驗(yàn)原理從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。平板分離法普遍用于微生物的分離與純化。其基本原理是選擇適合于待分離微生物的生長條件，如營養(yǎng)成分、酸堿度、溫度和氧等要求，或加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長，而抑制其他微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個菌落

制備“微生物”檢測培養(yǎng)基細(xì)節(jié)問題2023/02/02: 一、稱取用精確度1/100的電子天平稱取培養(yǎng)基所需藥品。先根據(jù)配方計算出配制一定量培養(yǎng)基所需各種成分藥品的量，然后用天平準(zhǔn)確稱取。稱量時用稱量紙折疊成簸箕狀盛放藥品。稱量紙折疊方法如圖所示。二、溶化培養(yǎng)基放入燒杯或搪瓷缸中，慢慢加入少量所需水，邊加入邊用玻棒攪拌。如果培養(yǎng)基中不含有瓊脂，培養(yǎng)基不需要加熱;如果含有瓊脂，則需要用本生燈或電磁爐加熱煮沸，wan全溶解后，再補(bǔ)齊所需水，并攪拌均勻(如圖3所示)。如果配制的培養(yǎng)基量很大，可用不銹鋼鍋加熱溶化，可先用溫水加熱并隨時攪動，防止焦化，如有焦化現(xiàn)

遠(yuǎn)慕分享培養(yǎng)基制備規(guī)程及使用規(guī)程！2023/02/02: 培養(yǎng)基制備規(guī)程1.目的規(guī)范本中心微生物實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基制備工作，保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。2.適用范圍本規(guī)程適用于使用商品化干粉培養(yǎng)基制備各種待用培養(yǎng)基。3.職責(zé)3.1培養(yǎng)基制備人員負(fù)責(zé)按本規(guī)程制備各類培養(yǎng)基，及時填寫成品培養(yǎng)基制備記錄，編制培養(yǎng)基目錄，粘貼標(biāo)簽。3.2科室負(fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)指導(dǎo)、監(jiān)督檢驗(yàn)人員按規(guī)程制備培養(yǎng)基。4.制備程序4.1概述4.1.1制備培養(yǎng)基所用的化學(xué)藥品，均為化學(xué)純。有些試劑在使用前應(yīng)先試用。4.1.2使用脫水培養(yǎng)基和其他含有有害物質(zhì)（如膽鹽或其他選擇劑）的成分時，應(yīng)遵循良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范

實(shí)驗(yàn)過程中的操作壞習(xí)慣你占了幾條？2023/02/01: “良好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣是實(shí)驗(yàn)成功的基礎(chǔ)?！边@一句金玉良言不需要多講了吧可是，有時候明知道自己的操作是錯誤的，卻一直將錯就錯下去，或是不以為意，或是以“習(xí)慣”為借口。殊不知，這樣不僅會給自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)帶來不確定性，甚至還會在無形中影響到他人，得不償失！接下來遠(yuǎn)慕生物列舉一些，實(shí)驗(yàn)室工作常見的壞習(xí)慣，大家好好對照自身哦！【實(shí)驗(yàn)過程中的壞習(xí)慣有哪些？】1.樣品稱量或者測定的時候，把數(shù)據(jù)先記錄在草稿紙上，樣品做完再抄到記錄本上去；有時候?qū)嶒?yàn)完畢才統(tǒng)一填寫記錄；2.需要計時的步驟，使用手機(jī)或者電腦上的時間，控制

你所在的實(shí)驗(yàn)室對于藥品、試劑如何分類存放？2023/02/01: 你所在的實(shí)驗(yàn)室對于藥品、試劑如何分類存放？有人說，“我們是液體放一邊，固體放一邊”。但這樣放置歸類不是很細(xì)，藥品少的時候還成，多的時候就不好找了；有人說?！拔覀冞@藥品不多，只分了有機(jī)和無機(jī)”，但即使是有機(jī)試劑應(yīng)該也分一下類別：醇、酚、醚、胺等便于尋找。還有人說，“我們分危險品，劇毒，易zhi毒，固體和液體分開放。然后普通試劑是鈉鹽放一起，鉀鹽放一起，銨鹽放一起，指示劑放一起，其他的放一起?！?。。。。。眾說紛紜，貌似都多少有點(diǎn)漏洞，那么，對于實(shí)驗(yàn)室藥品、試劑以及實(shí)驗(yàn)儀器，到底都該如何進(jìn)行科學(xué)的管理

微生物實(shí)驗(yàn)室干粉培養(yǎng)基的管理！2023/02/01: 在微生物檢驗(yàn)中，培養(yǎng)基的質(zhì)量關(guān)乎微生物的檢驗(yàn)結(jié)果。加強(qiáng)對培養(yǎng)基的質(zhì)量管理，能夠有效提升微生物檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和科學(xué)性，因此需要注重培養(yǎng)基的質(zhì)量管理工作。遠(yuǎn)慕從培養(yǎng)基的采購驗(yàn)收、質(zhì)量控制、培養(yǎng)基制備后的質(zhì)量控制以及培養(yǎng)基的滅菌和儲存等環(huán)節(jié)簡要分析了培養(yǎng)基的質(zhì)量控制工作。1、培養(yǎng)基供應(yīng)商選擇培養(yǎng)基應(yīng)當(dāng)從可靠的供應(yīng)商處采購，必要時應(yīng)當(dāng)對供應(yīng)商進(jìn)行評估。評估應(yīng)確定其生產(chǎn)工藝，運(yùn)輸條件是否符合規(guī)定，資質(zhì)是否齊全，質(zhì)量保證能力和生產(chǎn)能力是否符合需求。如果新增培養(yǎng)基供應(yīng)商，應(yīng)對該廠家所生產(chǎn)的不同批次的培養(yǎng)基理

質(zhì)粒表達(dá)載體按進(jìn)入受體細(xì)胞的類型分類2023/01/31: 質(zhì)粒表達(dá)載體具有克隆載體的基本元件還具有轉(zhuǎn)錄/翻譯所必需的DNA順序的載體。天然存在的野生型質(zhì)粒由于分子量大、拷貝數(shù)低、單一酶切位點(diǎn)少、遺傳標(biāo)記不理想等缺陷，不能滿足克隆載體的要求，因此往往需要以多種野生型質(zhì)粒為基礎(chǔ)進(jìn)行人工構(gòu)建。質(zhì)粒表達(dá)載體按進(jìn)入受體細(xì)胞的類型可分為：原核載體；真核載體；穿梭載體指在兩種宿主生物體內(nèi)復(fù)制的載體分子，因而可以運(yùn)載目的基因（穿梭往返兩種生物之間）。穿梭質(zhì)粒含原核和真核生物2個復(fù)制子，以確保兩類細(xì)胞中都能擴(kuò)增。質(zhì)粒表達(dá)載體之質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移方法：是細(xì)菌遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移的一個

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建與傳代步驟2023/01/31: 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建方法：慢病毒載體包裝慢病毒后感染Hela細(xì)胞，用嘌呤霉索篩選得到EGFP過表達(dá)多克隆細(xì)胞株。收到細(xì)胞的處理：根據(jù)客戶所在地及發(fā)貨季節(jié)，我們可能采用干冰運(yùn)輸?shù)膬龃婕?xì)胞或者常溫運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)瓶細(xì)胞兩種不同形式發(fā)貨。收到細(xì)胞后根據(jù)細(xì)胞運(yùn)輸類型采用下面兩種方式操作。穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株傳代方式:1、傳代前將細(xì)胞培養(yǎng)液、PBS和胰蛋白酶溫浴到37C。2、吸去細(xì)胞培養(yǎng)液。用PBS漂洗--次。3、加入適量胰蛋白酶，輕輕晃動細(xì)胞瓶，使胰蛋白酶均勻覆蓋細(xì)胞。吸去胰蛋白酶，將培養(yǎng)瓶放置在細(xì)胞培養(yǎng)箱中，37攝氏度消化

慢病毒包裝的作用和關(guān)鍵點(diǎn)說明2023/01/31: 慢病毒是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種，它能夠?qū)谢驅(qū)氲揭恍┹^難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，如原代細(xì)胞等，并且將靶基因隨機(jī)整合到宿主的基因組中，從而大大增加了轉(zhuǎn)染效率，并且能夠在細(xì)胞系中穩(wěn)定表達(dá)若干代，可以進(jìn)行穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的篩選。因?yàn)槭请S機(jī)整合，也有不確定因素，有些公司還能提供定點(diǎn)整合技術(shù)，將靶基因定點(diǎn)整合到基因組特定的部位，從而保證其高效表達(dá)并且對細(xì)胞不產(chǎn)生隨機(jī)整合可能產(chǎn)生的傷害。慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝shRNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產(chǎn)生高滴度的病毒顆粒，需要利用表達(dá)載體和包裝質(zhì)粒同時共

昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展和關(guān)鍵介紹2023/01/31: 隨著生命科學(xué)的迅速發(fā)展，細(xì)胞工程愈來愈受到人們的重視。以昆蟲細(xì)胞為對象的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)在現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)生物學(xué)上具有重要的價值,已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)及生物學(xué)的各個領(lǐng)域。昆蟲細(xì)胞是農(nóng)業(yè)生物應(yīng)用方面的高新技術(shù)，主要是提取來自昆蟲的一類真核細(xì)胞。通過培養(yǎng)制造宿主的病毒，這些病毒可以引起昆蟲流行病，但對人畜和植物無害，因而可作病毒殺蟲劑。還可以生產(chǎn)某些藥用蛋白。許多昆蟲培養(yǎng)基配方正不斷得到改進(jìn),以使之適于細(xì)胞生長。一般通用的商品培養(yǎng)基有Grace氏培養(yǎng)基、TC-100、IPL-41、TNM-FH以及經(jīng)改良的

自配標(biāo)準(zhǔn)溶液須具備的基本要求2023/01/12: 自配標(biāo)準(zhǔn)溶液須具備的基本要求1.應(yīng)采用潔凈的優(yōu)質(zhì)硬玻璃容量瓶作最終體積的容器。2、為保證標(biāo)準(zhǔn)溶液配制的可靠性和準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和環(huán)境設(shè)施應(yīng)符合其要求,(應(yīng)有監(jiān)測、控制和記錄環(huán)境條件。特別對灰塵、電磁干擾、放射、溫度、濕度、供電等)。3.高純度的溶質(zhì)或?qū)φ瘴?如金屬、金屬氧化物或金屬化合物；酸、堿、金屬有機(jī)化合物、適宜的鹽類、有機(jī)溶劑等)4、要有配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的純度高的溶劑（去離子水的雙重蒸餾，高純度濃度的酸、堿或有機(jī)溶液)。5.根據(jù)所配標(biāo)準(zhǔn)溶液對盛放容器的要求,標(biāo)準(zhǔn)溶液必須儲存在干凈的容器中存放

標(biāo)準(zhǔn)溶液和試液的配制及標(biāo)定2023/01/12: 1.目的管理好標(biāo)準(zhǔn)溶液及試液，保證化驗(yàn)正常運(yùn)行。2、適用范圍適用于標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制、標(biāo)定及試液的配制。3、責(zé)任者化驗(yàn)員應(yīng)嚴(yán)格遵照該操作規(guī)程,QC主管負(fù)責(zé)監(jiān)督本規(guī)程的實(shí)施。4、定義USP美國藥典CP中國藥典VS標(biāo)準(zhǔn)溶液5、規(guī)程1.標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)定如無特殊規(guī)定，應(yīng)嚴(yán)格按照USP25或CP2000規(guī)定的方法操作。2.每批標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)有明確的批號，其批號建立規(guī)則是VSxxxx(年)xx(月)xx(順序號)例：2000年5月標(biāo)定的第1批標(biāo)準(zhǔn)溶液，其批號VS20000501。3.使用專用的標(biāo)準(zhǔn)溶液配制及標(biāo)化

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)與中藥品對照品的應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)2023/01/12: 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中藥品對照品的應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)1、常用對照品（生活品）中檢院現(xiàn)有派發(fā)出示（可參閱中國藥典2010年版二部附則ⅩⅤG），且使用說明同樣時，應(yīng)應(yīng)用中檢院出示的現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)批號對照品（生活品），并出示其標(biāo)識和使用手冊，表明其生產(chǎn)批號，不可應(yīng)用別的來源于的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；使用說明與使用說明使用說明不一起，如判定對照品作為定量分析用、效價測量用生活品作為物理化學(xué)測定方法定量分析、UV法或容積法對照品作為色譜法定量分析等，應(yīng)選用適度并工作經(jīng)驗(yàn)證的方式再次校準(zhǔn)，并出示校準(zhǔn)方式和統(tǒng)計數(shù)據(jù)；若色譜法含水量測量用對照品作

這三大類型的抗體保存你有區(qū)分對待嗎？2023/01/11: 抗體（英語：antibody），（免疫球蛋白不僅僅只是抗體）是一種由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)。在今天的內(nèi)容中，主要涉及到單克隆抗體、多單克隆抗體、帶標(biāo)記的抗體。這三大類型的抗體保存方法各是怎樣的呢？遠(yuǎn)慕生物針對這三大類型的抗體保存做出了如下分析：一、單克隆抗體可以保存在50%的丙三醇存放于-20℃。也可以將其保存在飽和硫酸銨于4℃或-20℃保存。多年未見有失活、細(xì)菌滋生以及氧化。而凍干法（冷凍干燥，干燥或從冰凍狀態(tài)）為一些冰凍以后不

選擇合適的二抗，不再糾結(jié)！2023/01/11: 當(dāng)你徘徊在如何選擇二抗，或不知怎樣選擇最合適的二抗時，你的眼神告訴我，你糾結(jié)了，但是這不是你的錯。而當(dāng)看完以下內(nèi)容，你將不會再糾結(jié)，否則，那將是我的錯。1.弄清一抗的宿主物種是什么二抗指向一抗的物種。如果使用來源于兔的一抗，則需要來源于除兔以外的其它物種的抗兔二抗。例如山羊多克隆抗兔IgG二抗可以檢測兔多克隆抗Ki67一抗。換言之，二抗的宿主物種要求與一抗的宿主物種不同，而且種屬親緣關(guān)系越遠(yuǎn)越好。2.了解一抗蛋白類型二抗必須指向一抗同型。多克隆一抗通常來源于兔、山羊、綿羊或驢，并且是IgG同型。

遠(yuǎn)慕技術(shù)：抗血清的鑒定方法2023/01/11: 1.抗體特異性的鑒定常用雙向免疫擴(kuò)散法。（1）粗抗原及純抗原之間皆有一條沉淀線，且兩者互相融合，則已產(chǎn)生單價特異性抗體；（2）若純化抗原出現(xiàn)一條，而粗抗原出現(xiàn)多條線，且一條沉淀線與純抗原沉淀線相連接，需去除雜抗。（3）若不出現(xiàn)沉淀線，表示免疫失敗。2.抗體效價的測定顆粒性抗原采用凝集試驗(yàn)，可溶性抗原采用雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（棋盤滴定）、ELISA等方法。3.抗體純度的鑒定采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）、雙向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、免疫電泳等。若只出現(xiàn)一條蛋白電泳區(qū)帶說明抗體純化已達(dá)到要求。

如何確定一抗的稀釋比例？2023/01/11: 如果說明書中有推薦的稀釋比例，請按照該稀釋比例進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。但是由于標(biāo)本類型、實(shí)驗(yàn)條件、操作環(huán)境等各種因素的影響，推薦濃度僅作為參考。實(shí)驗(yàn)者需要在推薦濃度周圍進(jìn)行多個濃度梯度的實(shí)驗(yàn)，從中發(fā)現(xiàn)最佳的稀釋比例。如果說明書沒有推薦稀釋比例，僅注明“Useatanassaydependentdilution”，就需要做大量的預(yù)實(shí)驗(yàn)來摸索最佳的比例了。下表列出的純化抗體抗體用于不同實(shí)驗(yàn)方法時常用的工作濃度，可以作為預(yù)實(shí)驗(yàn)的參考。未純化的抗體一般在說明書中不會標(biāo)明抗體的濃度，因?yàn)榇蟛糠秩寡?、培養(yǎng)上清或腹水形

細(xì)胞培養(yǎng)的成敗關(guān)鍵在于無菌操作2023/01/10: 無菌操作是決定細(xì)胞培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵因素，即便使用設(shè)備完善的實(shí)驗(yàn)室，若實(shí)驗(yàn)者粗心大意，操作不規(guī)范，也會導(dǎo)致污染。因此，所有操作都要最大可能的保證無菌，每一項(xiàng)工作都必須做到有條不紊和wan全可靠。1、實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前：在開始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計劃和操作程序。有關(guān)數(shù)據(jù)的計算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，準(zhǔn)備各種所需器材和物品、清點(diǎn)無誤后將其放置操作場所(培養(yǎng)室、超凈臺)內(nèi)，然后開始消毒。這可以避免開始實(shí)驗(yàn)后，因物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會。2、無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或

流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)處理樣本步驟2023/01/10: 流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry，F(xiàn)CM）能夠快速測定細(xì)胞懸液中單個細(xì)胞的生物學(xué)性質(zhì)，并可以對特定的細(xì)胞進(jìn)行分選收集。廣泛用于細(xì)胞生物學(xué)，免疫學(xué)，遺傳學(xué)，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域。接下來的Protocol中以小鼠的淋巴細(xì)胞為例進(jìn)行細(xì)胞表面和胞內(nèi)染色。一.試劑準(zhǔn)備（遠(yuǎn)慕提供各種實(shí)驗(yàn)試劑）WashBuffer：PBS+1%FBS破膜劑（ICS）：用雙蒸水配置10%Saponin（Sigma）。破膜固定劑：將配好的ICS用4%多聚甲醛稀釋100倍ICSWashBuffer：將配好的ICS用WashBuff

細(xì)胞凋亡與細(xì)胞焦亡有何不同2023/01/10: 1、概念（1）細(xì)胞焦亡（Pyroptosis）細(xì)胞焦亡是一種炎癥程序性細(xì)胞死亡，由各種病理刺激引發(fā)，如中風(fēng)、心臟病發(fā)作、癌癥、微生物感染等。其它已知類型的程序性細(xì)胞死亡包括凋亡和壞死。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞焦亡依賴于caspase-1，這從根本上將細(xì)胞焦亡與其它細(xì)胞死亡途徑區(qū)分開來。由于caspase-1是細(xì)胞焦亡途徑中的主要效應(yīng)蛋白酶，因此caspase-1的活化是細(xì)胞發(fā)生焦亡的重要指標(biāo)。細(xì)菌的多糖結(jié)構(gòu)也會刺激caspase-4活化，發(fā)生細(xì)胞焦亡。（2）細(xì)胞凋亡（apoptosis）是指為維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)

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