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分離與純化的基本操作規(guī)程2023/01/03

酶的分離純化一般包括三個基本步驟：即抽提、純化、結晶或制劑。首先將所需的酶從原料中引入溶液，此時不可避免地夾帶著一些雜質，然后再將此酶從溶液中選擇性地分離出來，或者從此溶液中選擇性地除去雜質，然后制成純化的酶制劑。酶分離純化的最終目的是獲得單一純凈的酶，因此，容許在不破壞“目的酶”的限度內(nèi)，使用各種手段;酶與底物和抑制劑的結合常使其理化性質和穩(wěn)定性發(fā)生改變，這種特性已被用于酶的分離純化。由于酶及其來源的多樣性及與之共存的高分子物質的復雜性，目前還很難找到一種通用的方法以適用于一切酶的純化。為了使

生物菌種凍干保存步驟一覽2023/01/03

凍干機適用于大多數(shù)細菌、放線菌、病毒、噬菌體、立克次體、霉菌和酵母等的真空冷凍干燥保藏，但不適于霉菌的菌絲型、菇類、藻類和原蟲等。生物菌種凍干保存步驟，其操作流程如下：1、安瓿管準備安瓿管材料以中性玻璃為宜。清洗安瓿管時，先用2%鹽酸浸泡過夜，自來水沖洗干凈后，用蒸餾水浸泡至pH中性，干燥后、貼上標簽，標上菌號及時間，加入脫脂棉塞后，121℃下高壓滅菌15-20分鐘，備用。2、保護劑的選擇和準備保護劑種類要根據(jù)微生物類別選擇。配制保護劑時，應注意其濃度及pH值，以及滅菌方法。如血清，可用過濾滅菌

超純水（UPW)的制備和滅菌2022/12/30

儀器、耗材有刻度的玻璃硼硅酸鹽或消毒的塑料螺口瓶子螺旋蓋試紙膠帶標簽純水設備消毒鍋日記本實驗步驟1.在瓶子上標明日期、容量和批號。2.經(jīng)過過夜循環(huán)后的第二天早晨，從純水器中放出約50ml水，分別用相應的儀器測定傳導率（或電阻）和總有機碳（TOC）含量，記錄在日記本上。3.如果水的質量達到限定的標準（在25°C時，水的電阻≥10MΩ/cm，TOC≤10μg/L)，就直接收集至標注好的瓶子內(nèi)。4.灌至一定的體積，例如，如果用于稀釋10倍濃縮培養(yǎng)基，就分裝成430~450ml，如果要用于滅菌，就留出1

你知道HPLC法中的超純水有多重要嗎2022/12/30

先進、高效的實驗室分析方法搭配高精尖的科學儀器得出的實驗結果必然是越來越精確。其實，要得到高質量的檢測數(shù)據(jù)，實驗用試劑起著決定性意義。比如超純水就是起決定性作用的實驗材料。近幾年來，實驗室分析技術有了很大的改進。與此同時，檢測儀器設備也越來越精密、靈敏，這就要求所使用的試劑、稀釋劑和水要達到很高的質量標準。在高效液相色譜法分析中，水質的重要性到底如何呢?反相色譜的梯度洗脫最能說明問題。因為反相色譜中的多個色譜柱需要大量的水質溶劑，而水質溶劑的有機污染物會被色譜柱端部所吸附，在后續(xù)的梯度脫洗過程中

基準試劑,分析純AR,優(yōu)級純GR哪個更純?2022/12/30

試劑規(guī)格基本上按純度（雜質含量的多少）劃分，共有高純、光譜純、基準、分光純、優(yōu)級純、分析和化學純等7種。國家和主管部門頒布質量指標的主要優(yōu)級純、分級純和化學純3種。優(yōu)級純（GR:GuaranteedReagent）：又稱一級品或保證試劑，99.8%，這種試劑純度最高，雜質含量最di，適合于重要精密的分析工作和科學研究工作，使用綠色瓶簽。分析純（AR：AnalytialReagent）：又稱二級試劑，純度很高，99.7%，略次于優(yōu)級純，適合于重要分析及一般研究工作，使用紅色瓶簽。化學純（CP:Ch

化學試劑都有哪幾種純度？遠慕為你解答2022/12/30

1.一級品：即優(yōu)級純，又稱保證試劑（符號G.R.），我國產(chǎn)品用綠色標簽作為標志，這種試劑純度很高，適用于精密分析，亦可作基準物質用。2.二級品：即分析純，又稱分析試劑（符號A.R.），我國產(chǎn)品用紅色標簽作為標志，純度較一級品略差，適用于多數(shù)分析，如配制滴定液，用于鑒別及雜質檢查等。3.三級品：即化學純，（符號C.P.），我國產(chǎn)品用藍色標簽作為標志，純度較二級品相差較多，適用于工礦日常生產(chǎn)分析。4.四級品：即實驗試劑（符號L.R.），雜質含量較高，純度較低，在分析工作常用輔助試劑（如發(fā)生或吸收氣體

蛋白標準品（Marker）知識匯總！2022/12/29

蛋白Marker可分為：一、未預染的Marker即寬分子量蛋白標準、高分子量蛋白標準以及低分子量蛋白標準；二、預染的Marker即單色預染和多色預染。在westernblot過程中，分子量Marker就像個螺絲釘一樣沒雖然是個小細節(jié)，然而就是這樣一個小細節(jié)對實驗結果有著不可忽視的作用。這個WesternBlot參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小，只有標準量精確無誤了，實驗結果才有說服力，除此之外，蛋白標準還有表示轉移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇正確

遠慕教你如何搞定少量標準品的稱量和溶解2022/12/29

1mg或是幾mg的標準品怎么稱量?有人說，要用百萬分之一天平，用十萬分之一的達不到要求，誤差太大。還有人說，在稱幾個mg的標準品時，最好還是用減量法稱量，減量法會更準確。但是，少量標準品一般用分析天平稱好溶解后，再一步步稀釋得到，而不用一步稱到位，再溶解。我們都知道，有些標準品非常昂貴，廠商只能以非常小的包裝提供給客戶，如1mg\5mg\10mg等，所以，如何高效稱量，需要好好判斷好再行動哦。標準品的分級國際標準化委員會將標準品(參考物)的定義暫定為：它的一種或幾種物理或化學性質已經(jīng)充分確定，被

試劑標準品或校準品定值的溯源問題2022/12/29

歐盟關于體外診斷用品導則《Directive98/79/EC》中對體外診斷用品的溯源性進行了要求："校準物質和質控物質定值的溯源性必須通過已有的高一級的參考方法和參考物質予以保證"。該導則的實施意味著體外診斷用品的量值溯源問題已上升到了法律高度。為此，國際標準化組織（ISO）1999年起草了5個相關的ISO標準文件ISO/CD17511"校準物質和質控物質定值的計量學溯源性"和ISO/CD18153"酶催化濃度校準物質和質控物質定值的計量學溯源性"。量值的溯源性測量結果或標準量值的屬性，它使測量

單抗的標記技術詳細介紹2022/12/29

目前動物用單抗，在動物疫病診斷和檢疫、妊娠檢測、性別鑒定等方面有廣泛的應用，大多以診斷試劑(盒)的形式提供，其中核心試劑為標記的單抗。下面遠慕將介紹常用的幾種標記技術。1．酶標記(1)辣根過氧化物酶(HRP)標記辣根過氧化物酶(HRP)標記單抗和多克隆抗體的常用方法是過碘酸鈉法。其原理是HRP的糖基用過碘酸鈉氧化成醛基，加入抗體IgG后該醛基與IgG氨基結合，形成Schiff氏堿。為了防止HRP中糖的醛基與其自身蛋白氨基發(fā)生偶合，在用過碘酸鈉氧化前先用二硝基氟苯阻斷氨基。氧化反應末了，用硼qin

溶液儲存時可能的變質原因2022/12/28

溶液儲存時可能的變質原因（1）玻璃與水和試劑作用后多少會被侵蝕（特別是堿性溶液），使溶液中含有鈉、鈣、硅酸鹽等雜質。某些離子容易被吸附于玻璃表面，這對于低濃度的離子標準液更不可忽視。故低1mg/ml的離子溶液不適合長期保存。（2）由于試劑瓶密封不好，空氣中的二氧化碳、氧氣、氨或酸霧侵入使溶液發(fā)生變質。（3）某些溶液見光分解（硝酸銀、汞鹽），有些溶液放置時間長了會水解（鉍鹽、銻鹽），有些溶液會受微生物的分解。（4）含有易揮發(fā)的組分，使其濃度降低。溶液配制的注意事項（1）分析實驗所用的溶液應用GB6

遠慕教你使用容量瓶配制溶液2022/12/28

使用容量瓶配制溶液的方法是：(1)使用前檢查瓶塞處是否漏水。向容量瓶內(nèi)加少量水，塞好瓶塞，用食指頂住瓶塞，用另一只手的五指托住瓶底，把瓶倒立過來，如不漏水，正立，把瓶塞旋轉180度后塞緊，再倒立若不漏水，方可使用。(2)把準確稱量好的固體溶質放在燒杯中，用少量溶劑溶解。然后把溶液沿玻璃棒轉移到容量瓶里。為保證溶質能全部轉移到容量瓶中，要用溶劑多次洗滌燒杯，并把洗滌溶液全部轉移到容量瓶里。(3)向容量瓶內(nèi)加入的液體液面離標線1~2厘米左右時，應改用滴管小心滴加，最后使液體的彎月面（凹液面）與刻度線

固相萃取小柱和色譜柱的區(qū)別2022/12/28

固相萃取柱（英文,簡稱SPEcolumn，或SolidPhaseextractionCartridges，簡稱SPEcartridges）是從層析柱發(fā)展而來的一種用于萃取、分離、濃縮的樣品前處理裝置。固相萃取柱的容量是指固相萃取柱填料的吸附量。對于以硅膠為基質的固相萃取柱，其容量一般在1~5mg/100mg，也就是柱容量是填料質量的1%~5%。色譜是一種分離分析手段，分離是核心，因此擔負分離作用的色譜柱是色譜系統(tǒng)的心臟。色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及

免疫熒光操作步驟（漂片，冰凍切片）2022/12/28

實驗概要免疫熒光技術（Immunofluorescencetechnique）又稱熒光抗體技術，是標記免疫技術中發(fā)展最早的一種。它是在免疫學、生物化學和顯微鏡技術的基礎上建立起來的一項技術。很早以來就有一些學者試圖將抗體分子與一些示蹤物質結合，利用抗原抗體反應進行組織或細胞內(nèi)抗原物質的定位。實驗步驟1.將腦片放到，6孔板（或12孔板），按照二抗說明書，加3%雙氧水封閉10min（如果是從切片保護液取出，則要用PBS洗一遍）；（二抗不同，操作步驟有差別）；2.吸去雙氧水，PBS洗兩遍，將腦片周圍的

遠慕分享PCR緩沖液的相關介紹2022/12/27

用于PCR的標準緩沖液見PCR操作范例。于72℃時，反應體系的pH值將下降1個單位，接近于7.2。二價陽離子的存在至關重要，影響PCR的特異性和產(chǎn)量。實驗表明，Mg2優(yōu)于Mn2，而Ca2無任何作用。1．Mg2濃度Mg2的最佳濃度為1.5mmol/L（當各種dNTP濃度為200mmol/L時），但并非對任何一種模板與引物的結合都是最佳的。shou次使用靶序列和引物結合時，都要把Mg2濃度調(diào)到最佳，其濃度變化范圍為1～10mmol/L。Mg2過量易生成非特異性擴增產(chǎn)物，Mg2不足易使產(chǎn)量降低。樣品中

使用緩沖液注意這些問題2022/12/27

使用緩沖液注意這些問題1)緩沖液使用前必須過濾。2)溶劑、樣品易受到細菌和霉菌的影響，要注意清潔。3)一般不能直接用有機溶劑做清洗沖洗。4)梯度洗脫時，選低吸收值的緩沖液：例如：梯度洗脫時，緩沖液與有機相應預混，以防止析鹽。在保證峰不拖尾的情況下，盡可能選用低濃度的緩沖鹽，防止析鹽;緩沖鹽濃度，一般用20～30mM基本上就可以了，如果流動相中有機相含量高的話，流動相中的鹽類緩沖液濃度就不能過高，鹽的濃度起碼要保證在流動相條件下不會析出。離子對緩沖液濃度要高一點，一般50～100mM。緩沖液大量稀

雙酶切連接反應之全攻略2022/12/27

在進行PCR擴增時候，給引物兩端設計好酶切位點，一般說來，限制酶的選擇非常重要，盡量選擇粘端酶切和那些酶切效率高的限制酶，如BamHI、HindIII，提前看好各公司的雙切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。選好酶切位點后，在各個酶的兩邊加上保護堿基，其原則可參照此處。雙酶切時間及其體系：需要強調(diào)的是很多人建議酶切過夜，其實wan全沒有必要，一般酶切3個小時，其實1個小時已經(jīng)足夠。應用大體系，如100微升。純化問題：純化PCR產(chǎn)物割膠還是柱式，我推薦柱式，因為割膠手法不

凝膠層析法(gelchromatography)測定蛋白質分子量2022/12/26

一、實驗目的1.了解凝膠層析的原理及其應用。2.通過測定蛋白質分子量的訓練，初步掌握凝膠層析技術。二、實驗原理凝膠層析又稱排阻層析，凝膠過濾，滲透層析或分子篩層析等。它廣泛地應用于分離、提純、濃縮生物大分子及脫鹽、去熱源等，而測定蛋白質的分子量也是它的重要應用之一。凝膠是一種具有立體網(wǎng)狀結構且呈多孔的不溶性珠狀顆粒物質。用它來分離物質，主要是根據(jù)多孔凝膠對不同半徑的蛋白質分子（近于球形）具有不同的排阻效應實現(xiàn)的。亦即它是根據(jù)分子大小這一物理性質進行分離純化的。對于某種型號的凝膠，一些大分子不能進

RNA酶保護試驗詳細介紹2022/12/26

RNA酶保護法是一種全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是將標記的特異RNA探針（32P或生物素）與待測的RNA樣品液相雜交，標記的特異RNA探針按堿基互補的原則與目的基因特異性結合，形成雙鏈RNA；未結合的單鏈RNA經(jīng)RNA酶A或RNA酶T1消化形成寡核糖核酸，而待測目的基因與特異RNA探針結合后形成雙鏈RNA，免受RNA酶的消化，故該方法命名為RNA酶保護實驗。目錄·一、RNA酶保護試驗的介紹·二、試劑準備·三、操作步驟·四、電泳與放射自顯影·五、注意事項RNA酶保護試驗是通過液相雜交的方

酶的載體的固定化方法整理2022/12/26

酶的固定化方法不下百種，歸納起來大致可以分為三類，即載體結合法、交聯(lián)法和包埋法。（一）載體結合法載體結合法是指將酶固定到非水溶性載體上的方法。根據(jù)固定方式的不同，這種方法又可以分為物理吸附法、離子結合法和共價結合法。物理吸附法是指將酶吸附到固體吸附劑表面的方法，固體吸附劑多為活性炭和多孔玻璃等。離子結合法是指通過離子鍵將酶結合到具有離子交換基團的非水溶性載體上的方法，載體有離子交換樹脂等。共價結合法是指酶和載體以共價鍵的形式結合在一起的方法，這種方法需要酶和載體都具有氨基、羧基或羥基等官能團。（