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上海遠慕生物科技有限公司
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關(guān)于益生菌菌株的不同2022/12/19
益生菌產(chǎn)品都是以菌株為主,一些益生菌產(chǎn)品選用一種菌株,而更多益生菌產(chǎn)品則會添加幾種菌株混合,以疊加產(chǎn)品功效。益生菌菌株,多來自動物體內(nèi),如兩歧雙岐桿菌、鼠李糖桿菌,瑞士乳桿菌、植物乳桿菌等等。兩歧雙歧桿菌,是人體自出生就產(chǎn)生的,具有較高穩(wěn)定性,有助提高鈣鐵磷的利用率,舒緩腹瀉便秘,抑制有害菌生長,增強免疫力,雙岐桿菌會隨著年齡的衰老逐漸減少,所以不同年齡階段需要補充適當?shù)囊嫔?。鼠李糖桿菌,主要存在于人體或動物腸道內(nèi),安全性非常高,很容易被人體吸收、代謝,能夠很好的增強免疫力,防止呼吸道感染,預(yù)
蛋白質(zhì)怎么在制備過程中保持蛋白活性?2022/12/16
蛋白質(zhì)的制備是一項十分細致的工作。涉及物理學(xué)、化學(xué)和生物學(xué)的知識很廣。高分子蛋白質(zhì)具有一定的立體構(gòu)象,相當不穩(wěn)定,極易變性、變構(gòu),為得到天然狀態(tài)的蛋白質(zhì),盡量采用溫和的手段,如中性、低溫、避免起泡等,還要注意防腐。動物材料中的蛋白質(zhì)有些可溶的形式存在于體液(如血漿、消化硫等)中,可以不必經(jīng)過提取直接進行分離。蛋白質(zhì)中的角蛋白、膠原及絲蛋白等不溶性蛋白質(zhì),只需要適當?shù)娜軇┫慈タ扇苄缘陌殡S物,如脂類、糖類以及其他可溶性蛋白質(zhì),最后剩下的就是不溶性蛋白質(zhì)。這些蛋白質(zhì)經(jīng)細胞破碎后,用水、稀鹽酸及緩沖液等
有機溶劑沉淀蛋白質(zhì)現(xiàn)象與原因2022/12/16
1)蛋白質(zhì)沉淀原因:加入高濃度的中性鹽、加入有機溶劑、加入重金屬、加入生物堿或酸類、熱變性少量的鹽(如硫酸銨、硫酸鈉等)能促進蛋白質(zhì)的溶解。如果向蛋白質(zhì)水溶液中加入濃的無機鹽溶液,可使蛋白質(zhì)的溶解度降低,而從溶液中析出,這種作用叫做鹽析.這樣鹽析出的蛋白質(zhì)仍舊可以溶解在水中,而不影響原來蛋白質(zhì)的性質(zhì),因此鹽析是個可逆過程.利用這個性質(zhì),采用分段鹽析方法可以分離提純蛋白質(zhì).2)蛋白質(zhì)的變性在熱、酸、堿、重金屬鹽、紫外線等作作用下,蛋白質(zhì)會發(fā)生性質(zhì)上的改變而凝結(jié)起來.這種凝結(jié)是不可逆的,不能再使它們
膠原蛋白的結(jié)構(gòu)相關(guān)介紹2022/12/16
一級結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)分子中氨基酸以肽鍵連接的順序,每一種蛋白質(zhì)分子,都有其特定的氨基酸組成和排列方式,由此就決定了不同的空間結(jié)構(gòu)和功能。蛋白質(zhì)分子中一級結(jié)構(gòu)關(guān)鍵部位氨基酸的改變,會直接影響其功能,這個關(guān)鍵部位就是蛋白質(zhì)分子的活性中心。已發(fā)現(xiàn)并確認了不下30種類型的膠原蛋白。一般的蛋白質(zhì)是雙螺旋結(jié)構(gòu),而作為細胞外基質(zhì)(ECM)的一種結(jié)構(gòu)蛋白,膠原蛋白由三條多肽鏈構(gòu)成三股螺旋結(jié)構(gòu),或稱膠原域,即3條多肽鏈的每條都左旋形成左手螺旋結(jié)構(gòu),再以氫鍵相互咬合形成牢固的右手超螺旋結(jié)構(gòu)。膠原*的左旋a鏈相互纏繞構(gòu)成
Western blot出現(xiàn)兩個目標蛋白條帶?2022/12/16
1.因為WB的一抗識別的蛋白質(zhì)的表位是順序表位,不是空間表位,所以WB狀態(tài)下的抗原-抗體識別,與非變性的生理條件下的抗原-抗體識別不同。2.WB之前,先用分子篩純化同時也是檢測一下目的蛋白產(chǎn)物是否成功。也就是目的蛋白是否成功表達了,而且在提取后穩(wěn)定存在了。3.非特異性的條帶分子量偏大可能是SDSPAGE出的問題,膠的濃度不合適或者樣品溶解度不夠或者電泳時間不合適等,造成了目的條帶的表觀質(zhì)量變大。4.三個非特異性的分子量偏大條帶之一可能是目的蛋白在SDSPAGE出的問題出了問題,另外兩個帶可能本來
免疫球蛋白提取分離純化技術(shù)2022/12/15
實驗概要免疫球蛋白(ImmunoglobulinIg)的含量代表著機體體液免疫的水平,并進一步代表著B細胞的功能,因此測定血清Ig含量可以推知機體的體液免疫功能和診斷某些疾病引起的Ig的過高和過低。本實驗對禽血清IgG和IgA進行了分離純化。實驗原理免疫球蛋白包括IgG、IgM、IgA、IgE和IgD。隨著免疫學(xué)的發(fā)展和需要,免疫球蛋白的純化和其成分的提純成為bi不可少的手段。純化的方法很多,有單一法,但大多數(shù)采用二步法以上相結(jié)合的方法,特別是以硫酸銨提純?yōu)榛A(chǔ),再經(jīng)過層析柱的方法來提高免疫球蛋
瓊脂糖膠和PAGE膠制備方法2022/12/15
一、瓊脂糖凝膠的特點天然瓊脂(agar)是一種多聚糖,主要由瓊脂糖(agarose,約占80%)及瓊脂膠(agaropectin)組成。瓊脂糖是由半乳糖及其衍生物構(gòu)成的中性物質(zhì),不帶電荷,而瓊脂膠是一種含硫酸根和羧基的強酸性多糖,由于這些基團帶有電荷,在電場作用下能產(chǎn)生較強的電滲現(xiàn)象,加之硫酸根可與某些蛋白質(zhì)作用而影響電泳速度及分離效果。因此,目前多用瓊脂糖為電泳支持物進行平板電泳,其優(yōu)點如下。(1)瓊脂糖凝膠電泳操作簡單,電泳速度快,樣品不需事先處理就可以進行電泳。(2)瓊脂糖凝膠結(jié)構(gòu)均勻,含
PCR的試驗污染原因和預(yù)防對策2022/12/15
PCR的試驗污染PCR反應(yīng)的最大特點是具有較大擴增能力與ji高的靈敏性,但令人頭痛的問題是易污染,極其微量的污染即可造成假陽性的產(chǎn)生。污染原因1、標本間交叉污染:標本污染主要有收集標本的容器被污染,或標本放置時,由于密封不嚴溢于容器外,或容器外粘有標本而造成相互間交叉污染;標本核酸模板在提取過程中,由于吸樣槍污染導(dǎo)致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散,導(dǎo)致彼此間的污染。2、PCR試劑的污染:主要是由于在PCR試劑配制過程中,由于加樣槍、容器、雙蒸水及其它溶液被PCR
PCR檢測方法以及注意事項2022/12/15
PCR反應(yīng)的準備PCR反應(yīng)體系10×擴增緩沖液10μl4種dNTP混合物(終濃度)各100~250μmol/L引物(終濃度)各5~20μmol/L模板DNA0.1~2μgTaqDNA聚合酶5~10UMg2+(終濃度)1~3mmol/L補加雙蒸水100μl其中dNTP、引物、模板DNA、TaqDNA聚合酶以及Mg2+的加量(或濃度)可根據(jù)實驗調(diào)整,以上表格只提供大致參考值。PCR反應(yīng)五要素:參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即:引物(PCR引物為DNA片段,細胞內(nèi)DNA復(fù)制的引物為一段RNA鏈)、酶、
如何獲得精準的Western Blot實驗結(jié)果?2022/12/14
蛋白質(zhì)免疫印跡雜交實驗(WesternBlotting)是成熟mRNA翻譯指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成量分析檢測手段中經(jīng)典和廣泛為業(yè)界認可的一種,也是論文中最常見的數(shù)據(jù)呈現(xiàn)形式之一。雖然WesternBlot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結(jié)果重復(fù)性差,導(dǎo)致剛進實驗室的小伙伴們,實驗做的焦頭爛額。那么如何做出一手漂亮的WesternBlot實驗結(jié)果呢,請小伙伴們跟隨遠慕的腳步,了解WesternBlot實驗的相關(guān)知識,let'sgo!WesternBlotting實驗原理:蛋白質(zhì)印跡法(免疫印
Flag標簽蛋白檢測抗體實驗應(yīng)用說明2022/12/14
Flag標簽蛋白檢測抗體遠慕生物提供可用于WB,IF,IP應(yīng)用的Flag抗體,特異性檢測Flag標簽融合蛋白,F(xiàn)lag標簽抗體可識別在細胞內(nèi)表達的Flag標記重組蛋白,包括Flag位于氨基末端、中段以及羧基末端的重組蛋白。Flag標簽系統(tǒng)利用一個短的親水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目標蛋白。Flag標簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端,該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于細菌、酵母和哺乳動物細胞等多種細胞類型,相應(yīng)的Flag標簽抗體也被廣泛應(yīng)用。由于Flag標簽系統(tǒng)的純化條件是非變性的,因此可以純化所有有活性的
菌落總數(shù)測定方法的影響因素,科研人馬?。?/a>2022/12/14
一、菌落總數(shù)的概念及衛(wèi)生意義1、菌落總數(shù)食品檢樣經(jīng)過處理,在一定條件下培養(yǎng)后(如培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度和時間、pH、需氧性質(zhì)等),所得1mL(或1g)檢樣中形成菌落的總數(shù)。按國家標準方法規(guī)定,即在需氧情況下,37℃培養(yǎng)48h,能在平板計數(shù)瓊脂平板上生長的細菌菌落總數(shù),所以厭氧或微需氧菌、有特殊營養(yǎng)要求的以及非嗜中溫的細菌,由于現(xiàn)有條件不能滿足其生理需求,故難以繁殖生長。因此菌落總數(shù)并不表示實際中的所有細菌總數(shù),菌落總數(shù)并不能區(qū)分其中細菌的種類,所以有時被稱為雜菌數(shù),需氧菌數(shù)等。2、細菌總數(shù)細菌總數(shù)
磷酸化蛋白WB做不好?你可能忽略了這些2022/12/14
WB是檢測和定量磷酸化蛋白質(zhì)的重要實驗方法,然而大家一直都說磷酸化蛋白WB不好做!這是因為處于不同的細胞生長狀況和/或特定的細胞周期時,磷酸化蛋白可能僅占細胞總蛋白中的一小部分,處理不得當時,還會快速的去磷酸化。磷酸化蛋白質(zhì)WB做不好的原因有許多,比如封閉問題,抗體問題,或所需的磷酸化蛋白可能不存在于樣品中或者低于WB檢測的量。然而,有一個常被大家忽視的重要原因就是蛋白樣品制備所用的方法是否適合于磷酸化蛋白的提???其實蛋白質(zhì)提取的方法不僅影響提取效率,還會影響蛋白的質(zhì)量。大家目前常用的方法是利用
細胞培養(yǎng)用液的配制與消毒2022/12/13
一、器材與試劑:干粉型培養(yǎng)基、胰蛋白酶,青霉素、鏈霉素.純凈水系統(tǒng)、電子天平、PH計、磁力攪拌器。具體步驟:(1)水的制備:細胞培養(yǎng)用水必須非常純凈,不含有離子和其他的雜質(zhì)。需要用新鮮的雙蒸水、三蒸水或純凈水.(2)PBS的制備與消毒(也可用于其它BSS,如:Hanks,D-Hanks液的配制):1.溶解定容:將藥品(NaCl8.0g,KCl0.2g,Na2HPO4·H2O1.56g,KH2PO40.2g)倒入盛有雙蒸水的燒杯中,玻璃棒攪動,充分溶解,然后把溶液倒入容量瓶中準確定容至1000ml
表達蛋白的生物學(xué)活性的檢測2022/12/13
一、MTT比色法檢測細胞活性(一)原理活細胞內(nèi)線粒體琥珀酸脫氫酶能催化無色的MTT形成藍色的甲肷,其形成的量與活細胞數(shù)和功能狀態(tài)呈正相關(guān)。對細胞活力有影響的表達蛋白活性檢測可以通過MTT比色法進行。(二)試劑準備1、青鏈霉素溶液(100X):青霉素100萬U,鏈霉素100萬U,溶于100mlddH2O中,抽濾除菌。2、L15基礎(chǔ)培養(yǎng)基:1000mlL15培養(yǎng)基,加2g碳酸氫鈉,10ml100X青鏈霉素,5mlHEPES。3、MTT液:5mg/ml溶于L15基礎(chǔ)培養(yǎng)基。4、SDS處理液:20gSD
細胞培養(yǎng)為什么要先裂解紅細胞?2022/12/13
紅細胞裂解液一、基本介紹紅細胞裂解液是一種去除紅細胞最/簡便易行的方法,即用裂解液裂解紅細胞,它既不損傷有核細胞又能充分的去除紅細胞。裂解液裂解是一種比較溫和的紅細胞去除方法,主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細胞的分離純化,淋巴細胞的分離純化以及組織細胞蛋白與核酸提取等實驗中紅細胞的去除。經(jīng)紅細胞裂解液裂解得到的組織細胞中不含紅細胞,可進一步用于原代培養(yǎng)、細胞融合、流式細胞分析、核酸與蛋白的分離和提取等。二、使用說明①組織細胞樣品1、新鮮組織經(jīng)胰酶或膠原酶等消化分散成單個細胞懸液,離心棄去上清液。2、
可見分光光度法的基本原理2022/12/13
可見分光光度法的基本原理利用的是朗伯—比耳定律。布格(Bouguer)和朗伯(Lambert)先后于1729年和1760年闡明了光的吸收程度和吸收層厚度成正比:A∝b。1852年比耳(Beer)又提出了光的吸收程度和吸收物濃度之間也具有成正比的關(guān)系:A∝c。二者的結(jié)合稱為朗伯—比耳定律:當一束平行的單色光通過均勻、非散射的稀溶液時,溶液對光的吸收程度與溶液的濃度及液層厚度的乘積成正比。可見分光光度法的基本原理詳解:1、當一束強度為I0的單色光垂直照射某物質(zhì)的溶液后,由于一部分光被體系吸收,因此透
免疫球蛋白G的分子結(jié)構(gòu)介紹2022/12/12
Ig分子的基本結(jié)構(gòu)是對稱的四條多肽鏈,即兩條相同的輕鏈(L鏈)和兩條相同的重鏈(H鏈),借鏈間二硫鍵連結(jié)而成“Y”字型單體分子。Ig分子不同類別是由各自重鏈的結(jié)構(gòu)決定的。重鏈分為γ、μ、α、δ及ε鏈五類,又可按重鏈抗原性的不同分為若干亞類。五類Ig分子的輕鏈都相同,可分為κ型和λ型,兩型間的氨基酸和抗原性不盡相同。輕鏈和重鏈氨基末端的氨基酸順序易發(fā)生變化,故這部分稱為可變區(qū)(V區(qū))。V區(qū)是用以識別抗原和決定抗體特異性的部位。肽鏈其余部分(即羧基末端)氨基酸的數(shù)目和順序相對恒定,故稱穩(wěn)定區(qū)(C區(qū))
核酸濃度測定的五種方法介紹2022/12/12
1、定磷法核糖核酸(RNA)含磷量約為9.5%,脫氧核糖核酸(DNA)含磷量約為9.2%,采用定磷法可準確測出磷含量,進而折算出樣品中核酸含量。原理:在酸性條件下,定磷試劑中的鉬酸銨以鉬酸形式與樣品中的磷酸反應(yīng)生成磷鉬酸,當還原劑存在時磷鉬酸立即轉(zhuǎn)變?yōu)樗{色的還原產(chǎn)物——鉬藍;鉬藍最大的剛吸收在650-660nm波長處,根據(jù)吸光值制作標準曲線,從而確定核酸的濃度。測定范圍在1-10μg優(yōu)缺點:簡單、快速;但易受蛋白與核苷酸的影響。2、定糖法原理:核糖中的戊糖可在濃鹽酸或者濃硫酸作用下脫水生成醛類化
蛋白質(zhì)形成凝膠的兩種類型和機理介紹2022/12/12
蛋白質(zhì)凝膠的形成可以定義為蛋白質(zhì)分子的聚集現(xiàn)象,在這種聚集過程中,吸引力和排斥力處于平衡,以至于形成能保持大量水分的高度有序的三維網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)或基體。如果吸引力占主導(dǎo),則形成凝結(jié)物,水分從凝膠基體排除出來。如果排斥力占主導(dǎo),便難以形成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。蛋白質(zhì)凝膠的類型主要決定于蛋白質(zhì)分子的形狀。由于凝膠過程是一個動態(tài)過程,也受外界環(huán)境的pH、離子強度及加熱的溫度和時間的影響。纖維狀蛋白質(zhì)分子,如明膠和肌漿球蛋白凝膠的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)由隨機的或螺旋結(jié)構(gòu)的多肽鏈組成。明膠的凝膠網(wǎng)絡(luò)為線性分子通過形成連接區(qū)而形成凝膠網(wǎng)絡(luò)
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