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選擇重組蛋白表達(dá)的合適方法2022/06/17: 選擇合適丑組蛋白表達(dá)方法對于能否及時獲取所需數(shù)量和質(zhì)量的重z組蛋白非常關(guān)鍵。選擇了錯誤的表達(dá)宿主可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)錯誤折疊或低量表達(dá).缺少必要的翻譯后修飾或不適當(dāng)?shù)男揎?。選擇表達(dá)系統(tǒng)時需騎慮的因素包括蛋白質(zhì)的大小、二硫鍵的數(shù)目、所需翻譯后修飾的類型及目標(biāo)蛋自質(zhì)的定位。純化后的重組蛋自的期應(yīng)用在決策過程中也是很關(guān)鍵的，其應(yīng)用領(lǐng)域有四大類:結(jié)構(gòu)研究、體外活性分析、作為抗原制備抗體和體內(nèi)研究。本章的目的是為研究者選擇合適的表達(dá)系統(tǒng)提供指導(dǎo)。然而，即便憑借這些指導(dǎo)原則，很多倩況下仍然無法預(yù)先確定哪種表達(dá)系統(tǒng)

有關(guān)于鏈霉菌，你了解多少？2022/06/17: 放線菌目的一科?；鶅?nèi)菌絲不斷裂，氣生菌絲通常發(fā)育良好，形成長（有時短）的孢子絲。孢子不能運動，外鞘上常有疣、刺或毛發(fā)等狀飾物。簡介鏈霉菌（Streptomycetaceae）是高等的放線菌。放線菌目的一科。有發(fā)育良好的分枝菌絲，菌絲無橫隔，分化為營養(yǎng)菌絲、氣生菌絲、65孢子絲。孢子絲再形成分生孢子。孢子絲和孢子的形態(tài)、顏色因種而異，是分種的主要識別性狀之一。已報道的有千余種，主要分布于土壤中。愛醫(yī)培訓(xùn)/搜集整理已知放線菌所產(chǎn)抗生素的90%由本屬產(chǎn)生?；拘再|(zhì)基內(nèi)菌絲不斷裂，氣生菌絲通常發(fā)育良好，

你知道為什么液體菌種要用發(fā)酵罐發(fā)酵嗎2022/06/17: 從優(yōu)點來看，用發(fā)酵罐發(fā)酵液體菌種，可以防止污染，控制發(fā)酵參數(shù)。液體菌種的培養(yǎng)就叫發(fā)酵，承液體的東西以圓形的體積大，面積小，用料少。圓形的承液體的東西一般都較罐。因為是發(fā)酵用的，所以就叫發(fā)酵罐了。制作液體菌種的基本要求：1.必須是密封性容器2.必須能夠承受高溫高壓或高溫3.供氣系統(tǒng)必須達(dá)到無菌。這是基本要求。只要是符合以上幾點就能生產(chǎn)菌種，無非是生產(chǎn)量的多少，成功率高低問題。從理論上講15L的礦泉水桶也能生產(chǎn)，只不過技術(shù)要很好才行.使用發(fā)酵罐，不銹鋼的多，以前搪瓷的也有，不銹鋼發(fā)酵罐優(yōu)點多，成功率

關(guān)于自然菌種選育的步驟介紹2022/06/17: 自然選育的步驟主要是：采樣，增長培養(yǎng)，培養(yǎng)分離和篩選等。采樣篩選的菌種采集的對象以土壤為主，也可以是植物、腐/敗物品和某些水域等。土壤是微生物的匯集地，從土壤中幾乎可以分離到任何所需的微生物，故土壤往往是首/選的采集目標(biāo)。微生物的營養(yǎng)需求和代謝類型與生長環(huán)境有很大關(guān)系。富集培養(yǎng)由于采集樣品中各種微生物數(shù)量有很大差異，若估計到要分離的菌種數(shù)量不多時，就要人為增加分離的概率，增加該菌種的數(shù)量，稱為富集培養(yǎng)。純種培養(yǎng)盡管通過增長培養(yǎng)的效果很好，但是得到的微生物還是處于混雜狀態(tài)，因為樣品中本身含有許多種

細(xì)菌培養(yǎng)箱出現(xiàn)霉菌我們該如何做呢？2022/06/17: 細(xì)菌培養(yǎng)箱適用于環(huán)境保護、衛(wèi)生防疫、農(nóng)林畜牧、水產(chǎn)等科研生產(chǎn)部門，是水體分析的BCD測定、細(xì)菌、微生物的培養(yǎng)、植物栽培、育種試驗必須的試驗設(shè)備。細(xì)菌培養(yǎng)箱應(yīng)用廣泛，但是在使用的過程中也會出現(xiàn)一些現(xiàn)象，例如會出現(xiàn)霉菌，那么這個時候我們該如何做呢？細(xì)菌培養(yǎng)箱中的水盤里出現(xiàn)霉菌，雖然沒有污染到細(xì)胞，而且也在水盤里加入新潔爾滅，但還是不放心，并且培養(yǎng)箱中現(xiàn)有很多細(xì)胞，有一種方法可以在不移除細(xì)胞的情況下能夠消滅培養(yǎng)箱中的霉菌，已經(jīng)長出霉菌，建議把所有細(xì)胞移出到其他培養(yǎng)箱。將這個培養(yǎng)箱全面消毒，噴酒精，紫外

凝膠過濾(gel filtration,GF)注意事項2022/06/16: 1.層析柱的選擇層析柱大小主要是根據(jù)樣品量的多少以及對分辨率的要求來進(jìn)行選擇。一般來講，主要是層析柱的長度對分辨率影響較大，長的層析柱分辨率要比短的高；但層析柱長度不能過長，否則會引起柱子不均1、流速過慢等實驗上的一些困難。一般柱長度不超過100cm，為得到高分辨率，可以將柱子串聯(lián)使用。層析柱的直徑和長度比一般在1:25－1:100之間。用于分組分離的凝膠柱，如脫鹽柱由于對分辨率要求較低，所以一般比較短。2.凝膠柱的鑒定凝膠柱的填裝情況將直接影響分離效果，關(guān)于填裝的方法前面已有介紹，這里主要介紹

酶聯(lián)免疫法基本原理及注意事項2022/06/16: 酶聯(lián)免疫法基本原理及注意事項這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性，顯色清晰者為陽性。但在ELSIA試劑盒中，正常人血清反應(yīng)后?？沙霈F(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因elisa試劑盒的組成和實驗的條件不同而異，因此實驗中必須加測陰性對照。陰性對照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物(見3.6)。在用肉眼判斷結(jié)果時，更宜用顯色深于陰性對照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨

可溶性抗原(solubleantigen)的制備及鑒定2022/06/16: 蛋白質(zhì)、糖蛋白、脂蛋白、酶類、補體、脂多糖、細(xì)菌外毒素和核酸等均為可溶性抗原，它們有相當(dāng)部分來源于組織和細(xì)胞，成分復(fù)雜。制備這類免疫原時，首先須將組織和細(xì)胞破碎，然后再從組織和細(xì)胞勻漿中提取目的蛋白或其他抗原，提純的抗原需鑒定后才能用做免疫原。一、組織勻漿的制備用于制備免疫原的材料必須是新鮮或低溫保存的。材料獲得后立即去除包膜或結(jié)締組織，臟器應(yīng)進(jìn)行灌洗，去除血管內(nèi)殘留的血液，用含0.5g/LNaN3的生理鹽水洗去血跡及污物；在4℃水浴或冰浴中將洗凈的組織剪成0.3～0.5cm3小塊，加入適量生理

遠(yuǎn)慕實驗：常用電泳法介紹2022/06/16: 1、醋酸纖維素薄膜電泳（電泳法測定）醋酸纖維素是提纖維素的羥基乙?；纬傻睦w維素醋酸酯。由該物質(zhì)制成的薄膜稱為醋酸纖維素薄膜。電泳時經(jīng)過膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。此電泳特點是分離速度快、電泳時間短、樣品用量少。因此特別適合于病理情況下微量異常蛋白的檢測。2、紙電泳紙電泳（PE）是指用濾紙作為支持載體的電泳方法。是zui早使用的區(qū)帶電泳，由于操作簡單方便，因此在很多領(lǐng)域得以廣泛應(yīng)用。比如，分離、確定某些蛋白質(zhì)，如糖蛋白、脂蛋白等，尤其是在分離氨基酸的混合物時，

多肽物質(zhì)分離與分析方法研究進(jìn)展2022/06/15: 多肽類化合物廣泛存在于自然界中，其中對具有一定生物活性的多肽的研究，一直是藥物開發(fā)的一個主要方向。生物體內(nèi)已知的活性多肽主要是從內(nèi)分泌腺組織器官、分泌細(xì)胞和體液中產(chǎn)生或獲得的，生命活動中的細(xì)胞分化、神經(jīng)激素遞質(zhì)調(diào)節(jié)、腫瘤病變、免疫調(diào)節(jié)等均與活性多肽密切相關(guān)。隨著現(xiàn)代科技的飛速發(fā)展，從天然產(chǎn)物中獲得肽類物質(zhì)的手段也不斷得到提高。一些新方法、新思路的應(yīng)用。不斷有新的肽類物質(zhì)被發(fā)現(xiàn)應(yīng)用于防病治病之中。本文介紹了近幾年肽類物質(zhì)分離、分析的主要方法研究進(jìn)展。1分離方法采取何種分離純化方法要由所提取的組織材

蛋白質(zhì)特性與分離純化技術(shù)的選擇2022/06/15: 蛋白質(zhì)在組織或細(xì)胞中一般都是以復(fù)雜的混合物形式存在，每種類型的細(xì)胞都含有成千種不同的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)的分離和提純工作是一項艱巨而繁重的任務(wù)，到目前為止，還沒有一個單獨的或一套/現(xiàn)成的方法能把任何一種蛋白質(zhì)從復(fù)雜的混合物中提取出來，但對任何一種蛋白質(zhì)都有可能選擇一套適當(dāng)?shù)姆蛛x提純程序來獲取高純度的制品。蛋白質(zhì)提純的總目標(biāo)是設(shè)法增加制品純度或比活性，對純化的要求是以合理的效率、速度、收率和純度，將需要蛋白質(zhì)從細(xì)胞的全部其他成分特別是不想要的雜蛋白中分離出來，同時仍保留有這種多肽的生物學(xué)活性和化學(xué)完整性

做實驗薄層色譜法的相關(guān)知識要了解！2022/06/15: 薄層色譜法，系將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上，成一均勻薄層。待點樣、展開后，與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比，用以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。1.儀器與材料(1)玻板除另有規(guī)定外，用5cm×20cm，10cm×20cm或20cm×20cm的規(guī)格,要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。(2)固定相或載體最/常用的有硅膠G、硅膠GF、硅膠H、硅膠HF,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F等。其顆粒大小,一般要求直徑為10～40μm。薄層涂

遠(yuǎn)慕生物淺談微生物的代謝！2022/06/15: 微生物在生長發(fā)育和繁殖過程中，需要不斷地從外界環(huán)境中攝取營養(yǎng)物質(zhì)，在體內(nèi)經(jīng)過一系列的生化反應(yīng)，轉(zhuǎn)變成能量和構(gòu)成細(xì)胞的物質(zhì)，并排出不需要的產(chǎn)物。這一系列的生化過程稱為新陳代謝。代謝作用是生物體維持生命活動過程中的一切生化反應(yīng)的總稱。它是生命活動的最基本特征。代謝作用包括分解代謝(異化作用)和合成代謝(同化作用)。分解代謝是指生物體將各種營養(yǎng)物質(zhì)和細(xì)胞物質(zhì)降解成簡單的產(chǎn)物，即由大分子物質(zhì)降解成小分子物質(zhì)并產(chǎn)生能量的過程。合成代謝是指將分解代謝所提供的或從環(huán)境中所吸收的小分子物質(zhì)合成大分子物質(zhì)的過程。

酶制備的三部曲：提取和分離純化2022/06/14: (一)細(xì)胞破碎處理許多酶都存在于細(xì)胞內(nèi)。為了提取這些胞內(nèi)酶，首先需要對細(xì)胞進(jìn)行破碎處理。細(xì)胞破碎的方法很多，主要包括機械破碎法、物理破碎法、化學(xué)破碎法和酶學(xué)破碎法等。機械破碎法是指利用搗碎機、研磨器或勻漿器等將細(xì)胞破碎。物理破碎法是指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細(xì)胞破碎。化學(xué)破碎法是指利用甲醛、丙酮等有機溶劑或表面活性劑作用于細(xì)胞膜，使細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變。酶學(xué)破碎法是指選用合適的酶，使細(xì)胞壁遭到破壞，進(jìn)而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎。(二)提取酶的提取是指在一定條件下，用適當(dāng)?shù)娜?

淺談蛋白質(zhì)提取純化的這幾種方法2022/06/14: 蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣泛，要利用不同蛋白間內(nèi)在的相似性與差異，利用各種蛋白間的相似性來除去非蛋白物質(zhì)的污染，而利用各蛋白質(zhì)的差異將目的蛋白從其他蛋白中純化出來。根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同，蛋白質(zhì)的分離純化可分為鹽析法和等電點沉淀法。鹽析一般是指溶液中加入無機鹽類而使溶解的物質(zhì)析出的過程。如：向某些蛋白質(zhì)溶液中加入某些無機鹽溶液后，可以降低蛋白質(zhì)的溶解度，使蛋白質(zhì)凝聚而從溶液中析出。這是一種物理變化，可復(fù)原。等電點沉淀法是利用蛋白質(zhì)在等電點時溶解度最/低而各種蛋白質(zhì)又具有不同等電點的

PCR試劑產(chǎn)物的純化與回收實驗報告2022/06/14: PCR產(chǎn)物的直接純化：一、原理PCR產(chǎn)物一般都含有過量的引物、TaqDNA酶及dNTP，這些成分的存在將直接影響到后續(xù)的酶切、雙脫氧PCR測序反應(yīng)等過程,因此有必要除去。目前核酸純化的方法有很多,商用化試劑盒的出現(xiàn)使得DNA的純化過程變得更加簡便快捷。本實驗中,BufferPCR-A促使大于100bp的DNA片斷選擇性地吸附到silica膜上。經(jīng)BufferW.BufferW2洗滌去除殘留在sica膜上的小于50-mer的引物、酶蛋白、單核苷酸、熒光染料或放射性同位素標(biāo)記的單核苷酸后,吸附到si

抗體純化：deaesephadexa50柱層析法2022/06/14: 一、原理deae-sephadexa-50（二乙氨基—乙基-葡萄糖凝膠a-50）為弱堿性陽離子交換劑。用NaOH將Cl-型轉(zhuǎn)變?yōu)镺H-型后，可吸附酸性蛋白。血清中的γ球蛋白屬于中性蛋白（等電點為pH6.85～7.5），其余均屬酸性蛋白。pH7.2～7.4的環(huán)境中，酸性蛋白均被deae-sephadexa-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附。因此，通過柱層析，γ球蛋白便可在洗脫中先流出，而其他蛋白則被吸附在柱上，從而便可分離獲得純化的IgG。1、試劑（1）鹽析提取的人γ球蛋白（2）0.5NNaOH，0

四環(huán)素的鑒別試驗主要有哪幾種2022/06/13: 四環(huán)素類抗生素的測定方法主要包括微生物抑制法、charmⅡ微生物受體分析法、酶聯(lián)免疫法、分光光度法、毛細(xì)管電泳色譜法、薄層色譜法、高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法等。樣品經(jīng)過提取和凈化后，四環(huán)素類抗生素可通過薄層色譜或液相色譜進(jìn)行分離，再采用分光光度、熒光或質(zhì)譜檢測系統(tǒng)進(jìn)行定量測定。微生物法是一種傳統(tǒng)的測定四環(huán)素類化合物和其他抗生素的分析方法。微生物通常對四環(huán)素類抗生素具有固有的敏感性．對某些四環(huán)素別敏感，因而仍然在使用微生物抑制法。蠟狀芽孢桿菌ATCC11778是一種經(jīng)典的用于分析四環(huán)索類的微

純化凝膠選擇的具體方法2022/06/13: 生物分子下游純化的對象一般包括蛋白、酶、重組蛋白、單抗、抗體及抗原、肽類、病毒、核酸等。純化前首先需要測定生物分子的各物理和化學(xué)特性，然后通過實驗選擇出最/有效的純化流程。測定——分子量、PI當(dāng)目標(biāo)蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚時，可用PAGE電泳方法或?qū)游龇椒右詼y定。分離范圍廣闊的SuperoseHR預(yù)裝柱很適合測定未知蛋白的分子量。用少量離子交換介質(zhì)在多個含不同PH緩沖液的試管中，可簡易地測出PI，并選擇純化用緩沖液的最佳PH。選擇——層析方法若對目標(biāo)蛋白的特性或樣品成分不太了解，

抗原抗體反應(yīng)的抗血清的純化與保存2022/06/13: （1）采血：加強免疫的動物2—3次后，可通過耳靜脈或眼球（小鼠）采血，進(jìn)行抗血清效價測定。當(dāng)效價達(dá)到理想的高度后，可以采血。采血方式可以從心臟直接取血，也可通過動脈放血。待血液凝固后用針筒或吸管吸取血清。（2）抗血清的純化與保存：除抗體外血清中含有多種其他蛋白成分。為了避免這些蛋白質(zhì)干擾抗體（免疫球蛋白）標(biāo)記反應(yīng)和抗原抗體反應(yīng)，抗血清可經(jīng)過純化以獲得單一的機體（常為IgG）組分。常用的純化IgG的方法為飽和硫酸胺鹽析和層析法。蛋白質(zhì)在不同的鹽濃度的溶液中，其溶解度不一樣，鹽離子干擾蛋白質(zhì)和水分子

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