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酵母和細(xì)菌蛋白質(zhì)的代謝放射標(biāo)記的方法2021/11/08: 材料與儀器細(xì)胞基本培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)步驟1.接種細(xì)胞于只含有必需氨基酸和輔因子的已知成分的基本培養(yǎng)基，于合適溫度中度振蕩培養(yǎng)過(guò)夜。2.用新鮮的基本培養(yǎng)基稀釋培養(yǎng)物，繼續(xù)溫育至107細(xì)胞/ml（酵母）或?qū)?shù)期中期（細(xì)菌）。3.5000g室溫離心10分鐘收集細(xì)胞，用無(wú)硫酸鹽基本培養(yǎng)基重懸至107細(xì)胞/ml（酵母）或5X108細(xì)胞/ml（細(xì)菌）。4.加H235SO4至終濃度20μCi/ml。于適宜溫度輕度振蕩培養(yǎng)1小時(shí)（酵母）或20分鐘（細(xì)菌）。5.5000g室溫離心10分鐘收集細(xì)胞，吸出培養(yǎng)基，倒入放射性廢

用[35S]蛋氨酸和[35S]半胱氨酸標(biāo)記哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方法2021/11/08: 材料與儀器細(xì)胞培養(yǎng)基實(shí)驗(yàn)步驟1.制備活躍生長(zhǎng)著的細(xì)胞。從單層培養(yǎng)細(xì)胞（約鋪滿75%表面積）中吸去培養(yǎng)基。用預(yù)熱至37℃的無(wú)血清培養(yǎng)基沖洗兩次（培養(yǎng)基中應(yīng)該不含蛋氨酸和半胱氨酸）。對(duì)于懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，通過(guò)400g離心5分鐘收集細(xì)胞。用頂熱至37℃的無(wú)蛋氨酸培養(yǎng)基重懸沉淀，400g離心5分鐘。盡可能地去掉上清，用無(wú)蛋氨酸培養(yǎng)基重懸細(xì)胞至107細(xì)胞/ml后轉(zhuǎn)移至一塊小培養(yǎng)板。2.加入預(yù)熱的無(wú)蛋氨酸和半胱氨酸的培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)20分鐘，以耗盡胞內(nèi)含硫氨基酸庫(kù)。3.吸去培養(yǎng)基，立刻換上預(yù)熱的、無(wú)蛋氨酸和

成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層實(shí)驗(yàn)步驟2021/11/05: 材料與儀器鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmolLEDTA受精后8h的胚胎FBSLDF基礎(chǔ)培養(yǎng)液LDF原代培養(yǎng)液LDF維持培養(yǎng)液D培養(yǎng)液Holtfreter緩沖液培養(yǎng)瓶實(shí)驗(yàn)步驟鱒魚(yú)胚胎提取物：(a)收集胚胎（受精后28天的ShastaRainbow或其他鱒魚(yú)種系，在10°C條件下飼養(yǎng)，或者受精后3天的斑馬魚(yú)，在28°C條件下飼養(yǎng)），在-80°C條件下凍存(b)為了制備提取物，將約150g胚胎融化后，采用Tissuemizer勻漿器（Tekmar)用10mlLDF在冰上勻漿2min

玻璃器皿的準(zhǔn)備和滅菌步驟2021/11/05: 材料與儀器消毒劑（次氯酸鹽）清潔劑浸泡池試管刷不銹鋼籃子鋁箔無(wú)菌指示器無(wú)菌指示膠帶或塞滅菌烤箱實(shí)驗(yàn)步驟一、玻璃器皿的收集和清洗1.玻璃器皿用后要立即將其收集到含有消毒劑（次氯酸鹽，用清潔劑稀釋?zhuān)钌賾?yīng)含有300μg/g的氯，如常規(guī)用的次氯酸鈉）的清潔劑（如，7×或Decon）中。在浸泡或清洗前絕不能讓玻璃器皿變干，否則會(huì)非常難清洗。2.在清潔劑中浸泡過(guò)夜。3.漂洗：(a)次日早，用試管刷手工刷洗或機(jī)器刷洗玻璃器皿，自來(lái)水沖洗4次后用去離子水沖洗3次。保持水流噴射非常有必要，否則每次都要將瓶子裝滿

報(bào)告基因：β-半乳糖苷酶的原位染色實(shí)驗(yàn)方法2021/11/05: 材料與儀器β-gal表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞D-PBSA染色液6孔培養(yǎng)板恒溫箱倒置顯微鏡實(shí)驗(yàn)步驟一、材料非消毒物品1.D-PBSA2.底物：X-gal（nvitrogen），以二甲基甲酰胺配成20mg/mL，用多聚丙烯管-20℃避光保存，最長(zhǎng)可達(dá)6個(gè)月3.固定液：1.8%的甲醛和0.05%戊二醛，均以PBSA液配制；將85mL水、10mL的10xD-PBSA、5mL福爾馬林（37%甲醛溶液）及0.2mL戊二醛（25%溶液）混合，制備成固定液，于4℃儲(chǔ)存4.染色液：含5mmol/L鐵氰鉀，5mmol/L亞

表皮角質(zhì)形成細(xì)胞模型構(gòu)建實(shí)驗(yàn)方法2021/11/05: 材料與儀器皮膚組織熱解素胰蛋白酶SKDM角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)液D-PBSAEDTA分析級(jí)甘油dispase低溫保存管尼龍網(wǎng)離心管細(xì)胞過(guò)濾器手術(shù)刀彎鑷實(shí)驗(yàn)步驟一、材料無(wú)菌實(shí)驗(yàn)前3天制備飼養(yǎng)層（見(jiàn)方案23.4)。照射3T3細(xì)胞（30Gy)和人成纖維細(xì)胞（70Gy)，最好用含較多細(xì)胞的懸液FAD:Wu等[1982]研制的一種用于飼養(yǎng)層培養(yǎng)的高鈣培養(yǎng)液，含有Ham'sF12、DMEM和添加物。HamF12和DMEM混合培養(yǎng)液（1:3)添加1.8Xl0-4mol/L腺嘌呤、10-10mol/L霍亂毒素、1

白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)步驟2021/11/05: 材料與儀器推玻片一塊干凈玻片數(shù)塊消毒的針頭75%酒精棉球蠟筆擦鏡紙顯微鏡瑞氏染液蒸餾水顯微鏡油二甲苯實(shí)驗(yàn)步驟一、血涂片制作1.以75%酒精棉球消毒指頭，用消毒的針頭刺進(jìn)局部，先拭去第一滴血，然后取血一小滴（米粒大?。┲糜诟蓛舨Ｆ系囊欢恕?.用干凈推玻片的一端放在血滴前方，將推玻片略向后移，使與血滴相接觸，讓血滴在推片與載玻片的夾角間平均散開(kāi)后，用30-45度角不加壓力，平穩(wěn)地推至另一端制成均勻的血膜薄片（見(jiàn)圖41）。3.血片涼干后，滴上瑞氏染液，使蓋滿整個(gè)血膜片，大約半分鐘后再加一倍蒸餾水，輕

學(xué)會(huì)這6步，輕松搞定transwell實(shí)驗(yàn)2021/11/02: 做腫瘤研究的人，很少有不知道transwell實(shí)驗(yàn)的，它是用來(lái)研究腫瘤細(xì)胞的遷移侵襲轉(zhuǎn)移情況的一種簡(jiǎn)便快捷的實(shí)驗(yàn)方法，還可以構(gòu)建兩種細(xì)胞的共培養(yǎng)體系以及趨化性試驗(yàn)。今天咱們就來(lái)講講怎么做腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)。Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)，其實(shí)原理簡(jiǎn)單地說(shuō)，就是用一層膜將高營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)液和低營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)液隔開(kāi)，細(xì)胞放在低營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)液里，為了找吃的，細(xì)胞會(huì)往高營(yíng)養(yǎng)的培養(yǎng)液里面跑，但是有膜擋著，所以要穿過(guò)膜才行。我們?cè)谀ど贤可弦粚踊|(zhì)膠，模仿細(xì)胞外基質(zhì)，于是細(xì)胞就要分泌金屬蛋白酶將基質(zhì)消化了才可以從低營(yíng)養(yǎng)

做好流式太難？可能方法就用錯(cuò)了，解決思路看這里!2021/11/02: 流式細(xì)胞術(shù)（FCM）是利用流式細(xì)胞儀對(duì)單個(gè)細(xì)胞或者生物微顆粒的生物學(xué)性質(zhì)進(jìn)行分析的檢測(cè)方式。其特點(diǎn)是能夠快速、精準(zhǔn)的分析單個(gè)細(xì)胞的多種特性，適用于定性、定量分析細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中的各種細(xì)胞成分，還可以研究細(xì)胞的各種功能狀態(tài)等，特別適用于大量樣品的檢測(cè)?，F(xiàn)已被廣泛用于免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、血液學(xué)、腫瘤學(xué)、微生物學(xué)等多個(gè)領(lǐng)域。典型的應(yīng)用實(shí)例包括血液系統(tǒng)疾病的免疫分型，腫瘤學(xué)中細(xì)胞DNA的倍體和周期分析，細(xì)胞生物學(xué)研究中的細(xì)胞凋亡、增殖，細(xì)胞表面或胞內(nèi)的抗原檢測(cè)等。其中，流式技術(shù)較為廣泛的應(yīng)用是使

臨床M2巨噬細(xì)胞相關(guān)基因輔助治療胰腺導(dǎo)管腺癌2021/11/02: 胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)是全球七大癌癥相關(guān)死亡原因，也是最常見(jiàn)的人類(lèi)惡性腫瘤之一。根據(jù)2018年全球癌癥統(tǒng)計(jì)，大約有45.9萬(wàn)名新確診患者和近43.2萬(wàn)人死亡患者。由于早期準(zhǔn)確診斷和腫瘤快速進(jìn)展等困難，大量PDAC（胰腺導(dǎo)管腺癌）病例在診斷時(shí)出現(xiàn)臨床晚期或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。因此，開(kāi)發(fā)新的、可靠的預(yù)后評(píng)估和療效預(yù)測(cè)指標(biāo)以進(jìn)一步推進(jìn)針對(duì)性治療具有十分重要的意義。越來(lái)越多的證據(jù)支持浸潤(rùn)M2巨噬細(xì)胞在胰腺導(dǎo)管腺癌(PDAC)的腫瘤進(jìn)展中起關(guān)鍵作用。然而，對(duì)M2巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和中樞基因(FAM53B)在臨床結(jié)局和免

抗生素突破性進(jìn)展！科學(xué)家終于弄清楚青霉素如何殺死細(xì)菌！2021/11/02: 我們現(xiàn)在所熟知的青霉素是人類(lèi)發(fā)現(xiàn)的第一種抗生素。它的問(wèn)世結(jié)束了以細(xì)菌為主導(dǎo)致大規(guī)模傳染病的肆虐時(shí)代，拯救了上千萬(wàn)被病痛折磨的人。那么青霉素又是怎么被發(fā)現(xiàn)的呢？青霉素的發(fā)現(xiàn)這就要提到英國(guó)的亞歷山大·弗萊明。第一次世界大戰(zhàn)期間，弗萊明是醫(yī)療隊(duì)的隊(duì)長(zhǎng)。當(dāng)時(shí)很多士兵由于戰(zhàn)爭(zhēng)受傷感染而死亡。雖然，在治療過(guò)程中已經(jīng)使用消毒水對(duì)傷口簡(jiǎn)單的消毒，但是消毒水的作用是廣譜的，在殺死有害的細(xì)菌時(shí)，人體內(nèi)有用的細(xì)菌也被殺死了。亞歷山大·弗萊明于是，在之后的十幾年里弗萊明一直想找到一個(gè)更有效的殺菌方法。1927年，一篇關(guān)

細(xì)胞培養(yǎng)試劑這樣用，你都對(duì)了嗎？2021/11/02: 01為什么要在溶解的一周內(nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液?答：胰蛋白酶在4℃就可能開(kāi)始降解，如果在室溫下放置超過(guò)30分鐘，就會(huì)變得不穩(wěn)定，但是胰酶在消化細(xì)胞前必須要預(yù)熱，否則容易出現(xiàn)酶活力不夠，也會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞消化不下來(lái)，所以為了更好的培養(yǎng)細(xì)胞，在細(xì)胞培養(yǎng)不多的時(shí)候可以分裝使用，這樣就不會(huì)出現(xiàn)上面的兩種情況了，還有就是配制胰酶的時(shí)候一定要注意降低熱源哦。02培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢的原因有哪些？其解決辦法有哪些？答：可能得原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)

白細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)2021/11/01: 實(shí)驗(yàn)步驟1．用血紅蛋白吸管吸血20mm3刻度處，拭去管尖血污漬。2．將管內(nèi)血液放入盛有白細(xì)胞稀釋液的小試管內(nèi)，洗滌數(shù)次，立即搖勻。3．稍候，取一小滴懸液，放入血細(xì)胞計(jì)數(shù)池內(nèi)，靜置1-2分鐘。4．用低倍鏡計(jì)數(shù)，計(jì)算四角四個(gè)大方格中的白細(xì)胞總數(shù)。計(jì)算白細(xì)胞數(shù)/L=4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)÷4×20×106?即：4個(gè)大方格內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)×50×106=白細(xì)胞總數(shù)/L式中：÷4為每個(gè)大方格（即0.1ul）內(nèi)白細(xì)胞平均數(shù)，×101個(gè)大方格容積為0.1ul,換算成1ul;×20血液稀釋倍數(shù)，×106由1ul換算

變移上皮形態(tài)學(xué)觀察實(shí)驗(yàn)2021/11/01: 實(shí)驗(yàn)步驟1.染色：HE2.肉眼觀察：標(biāo)本是收縮狀態(tài)的膀胱，著紫藍(lán)色的一側(cè)是膀胱腔面的變移上皮。3.低倍鏡觀察：變移上皮由多層細(xì)胞構(gòu)成，各層細(xì)胞形態(tài)不一。上皮游離面與基底面基本平行，基膜不明顯。4.高倍鏡觀察：從深面向淺層觀察各層細(xì)胞的形態(tài)。（1）基底層：為一層矮柱狀細(xì)胞。（2）中層細(xì)胞：位于基底層之上，有數(shù)層不規(guī)則的多邊形細(xì)胞。（3）表層細(xì)胞：位于上皮表面，為一層長(zhǎng)方形或立方形細(xì)胞，細(xì)胞大，有時(shí)細(xì)胞內(nèi)有兩個(gè)核?？拷砻娴募?xì)胞質(zhì)染成深紅色。

補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗(yàn)2021/11/01: 材料與儀器小鼠Hank's液抗小鼠Thy-1的單克隆抗體補(bǔ)體伊紅-Y染液解剖器械平皿不銹鋼網(wǎng)試管吸量管尖吸管載玻片蓋玻片實(shí)驗(yàn)步驟1.小鼠胸腺細(xì)胞懸液的制備將4～6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死，取出胸腺放入已加入約4ml冷Hank's液的平皿中，在100目的不銹鋼網(wǎng)上研磨后，過(guò)篩，放入試管，離心1000rpm，5分鐘，用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細(xì)胞重懸于Hank's液中，配成1×107/ml細(xì)胞懸液。2.取試管3支，標(biāo)明順序，依據(jù)下表依次加入1×107/ml胸腺細(xì)胞懸液、抗小鼠Thy-1的單克

補(bǔ)體介導(dǎo)法細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)2021/11/01: 材料與儀器C57BL／6J小鼠Hank’s液?jiǎn)慰寺】贵w補(bǔ)體伊紅-Y染液眼科剪眼科鑷平皿不銹鋼網(wǎng)試管吸量管尖吸管載玻片蓋玻片顯微鏡實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)方法1.小鼠胸腺細(xì)胞懸液的制備：將4～6周齡小鼠采用頸椎脫臼法處死，取出胸腺放入已加入約4ml冷Hank’s液的平皿中，在100目的不銹鋼網(wǎng)上研磨后，過(guò)篩，放入試管，離心1000rpm，5分鐘，用Hank’s液洗兩次。將沉淀的細(xì)胞重懸于Hank’s液中，配成1×107/ml細(xì)胞懸液。2.取試管3支，標(biāo)明順序

AO染色法（丫啶橙染色法）檢測(cè)細(xì)胞凋亡2021/11/01: 材料與儀器【試劑】pH4.8～6.0Tritionx-100的PBS緩沖液，AO染料：將AO染料溶于含1%TritionX-100的PBS中，終濃度為6μg/ml，含Rnase100μg/ml，避光保存。【儀器】熒光顯微鏡實(shí)驗(yàn)步驟制備活細(xì)胞懸液106/ml；取95μl細(xì)胞懸液，加5μl的AO染液混合、避光作用10min；加入5mlPBS，1500r/min離心5min，棄上清，重復(fù)洗滌2次；重懸細(xì)胞，吸一滴滴于玻片上并用蓋玻片封片；要點(diǎn)在熒光顯微鏡下，選用515nm激發(fā)光鏡檢：AO染色細(xì)胞DNA

氨甲喋呤抗性和DHFR擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)方法2021/10/29: 材料與儀器中國(guó)倉(cāng)鼠細(xì)胞或生長(zhǎng)快的人或小鼠細(xì)胞系氨甲蝶呤鈉鹽0.15molLNaCl組織培養(yǎng)瓶吸管不含胸苷和次黃（口票）呤的培養(yǎng)瓶倒置顯微鏡液氮罐實(shí)驗(yàn)步驟1.克隆培養(yǎng)親代細(xì)胞形成生長(zhǎng)旺盛、基因型一致的細(xì)胞群體，用于篩選。2.用無(wú)菌NaCl0.15mol/L(0.85%)稀釋MTX，臨床使用的包裝是濃度為2.5mg/ml的溶液。3.在幾個(gè)相同的培養(yǎng)瓶中分別種2.5×105個(gè)細(xì)胞，每個(gè)培養(yǎng)瓶中加入不含MTX或含0.01μg/ml、0.02μg/ml、0.05μg/ml和0.1μg/mlMTX的*培養(yǎng)基

貼壁細(xì)胞培養(yǎng)2021/10/29: 材料與儀器凍存細(xì)胞70%乙醇PBS胰酶／EDTA25cm2和150cm2組織培養(yǎng)瓶CO2培養(yǎng)箱實(shí)驗(yàn)步驟1.將含有凍存細(xì)胞的安瓿放入37℃水浴中解凍。2.用70%乙醇對(duì)安瓿的頂端進(jìn)行消毒，打開(kāi)安瓿，用吸管將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有5ml起始培養(yǎng)基的25cm2組織培養(yǎng)瓶中，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)瓶中，將其放入5%CO2加濕培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。3.吸出起始培養(yǎng)基，換成適當(dāng)?shù)木S持培養(yǎng)基。將細(xì)胞放回CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)，每天檢查細(xì)胞是否生長(zhǎng)至匯片。4.如果細(xì)胞生長(zhǎng)至匯片，吸出培養(yǎng)基。5.用PBS

懸浮細(xì)胞培養(yǎng)2021/10/29: 材料與儀器凍存HeLaS3細(xì)胞70%乙醇*MEM-10胰酶／EDTA旋轉(zhuǎn)瓶*培養(yǎng)基-525cm2組織培養(yǎng)瓶C02培養(yǎng)箱SorvallH-6000A轉(zhuǎn)子100ml或200ml通氣旋轉(zhuǎn)瓶和帶濾膜的瓶蓋實(shí)驗(yàn)步驟1.將含有凍存HeLaS3細(xì)胞的安瓿放入37℃水浴中解凍。2.用70%乙醇對(duì)安瓿的頂端進(jìn)行消毒，打開(kāi)安瓿，用吸管將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到含有5ml*MEM-10培養(yǎng)基的25cm2組織培養(yǎng)瓶中，輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞均勻分布于培養(yǎng)瓶中，放入5%CO2加濕培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。3.將培養(yǎng)基吸出，用0.5ml3

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