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撫生試劑-各項對照控制試驗條件2014/06/13

各項對照控制試驗條件其中包括:（1）固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。（2）包被抗體（或抗原）的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18

撫生試劑-生物體內(nèi)成像的應(yīng)用研究2014/06/11

生物體內(nèi)成像的應(yīng)用研究分析水分形態(tài)和內(nèi)部結(jié)構(gòu)對于生物組織冷凍特性的影響.進一步結(jié)合熱科學(xué)的理論和研究方法,重點考察核化過程、冰晶界面特性、晶枝（略）以及界面附近的流動形態(tài)等基礎(chǔ)現(xiàn)象,進行深入基礎(chǔ)理論探析,全面了解和認識生物多孔介質(zhì)冷凍過程中的傳遞現(xiàn)象及其機理.生物材料（略）生生長及凍融過程后生物活性的維持,都與生物組織中水分形態(tài)及分布有密切,而生物組織內(nèi)部結(jié)構(gòu)影響了水分分布,并且冷凍過程中本身的變化,也會對冰晶產(chǎn)生及界面附近的傳遞現(xiàn)象產(chǎn)生影響.水分存在形態(tài)與生物組織的內(nèi)部結(jié)構(gòu)存在（略）合效應(yīng).剝

撫生試劑-人ELISA試劑盒雷帕霉素靶蛋白酶聯(lián)遺傳新成果2014/06/10

人ELISA試劑盒雷帕霉素靶蛋白酶聯(lián)應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人雷帕霉素靶蛋白（mTOR）水平。用純化的人雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入雷帕霉素靶蛋白（mTOR），再與HRP標(biāo)記的雷帕霉素靶蛋白（mTOR）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雷帕霉素靶蛋白（mTOR）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD

撫生試劑-小鼠肝糖原合成酶ELISA試劑盒實驗方法2014/06/09

小鼠肝糖原合成酶ELISA試劑盒1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時

撫生試劑-ELISA法檢測白細胞介素-42014/06/06

ELISA法檢測白細胞介素-4白細胞介素-4(1L-4)是Th2細胞分泌的一類重要細胞因子，可促進巨噬細胞的黏附，介導(dǎo)IgE的產(chǎn)生，在局部炎性細胞浸潤中發(fā)揮作用，同時IL-4可使IgE受體表達增強，誘導(dǎo)嗜酸細胞聚集和遷移。[檢測方法]ELISA法[方法學(xué)原理]在微孔反應(yīng)板上包被抗人IL-4單克隆抗體，待測標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的IL-4會與抗人IL-4單克隆抗體結(jié)合，游離的成分被洗去，同時加入生物素化的抗人IL-4抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素。生物素與親和素特異結(jié)合，抗人IL-4抗體與結(jié)合在單克隆抗

撫生試劑-探針標(biāo)記各種標(biāo)記物及選擇2014/06/05

探針標(biāo)記各種標(biāo)記物及選擇1．核素標(biāo)記物放射性核素是目前應(yīng)用zui多的一類探針標(biāo)記物。放射性核素的靈敏度*，可以檢測到10-14～10-18克的物質(zhì)，在zui適條件下可以測出樣品中少于1000個分子的核酸含量。常用標(biāo)記核酸探針的核素有32P、3H、35S，在Southern印跡雜交中以“Pzui常用。還應(yīng)根據(jù)標(biāo)記方法的不同選擇相應(yīng)標(biāo)記方位的核素，一般情況下，大多數(shù)標(biāo)記方法需要的是a—32P，而5，末端標(biāo)記必須是r-32P。2．非放射性標(biāo)記物多年來，科學(xué)家們致力于尋找一些安全、可靠、靈敏度高的物質(zhì)代

撫生試劑-酶標(biāo)記熒光信號放大技術(shù)的基本原理2014/06/04

酶標(biāo)記熒光信號放大技術(shù)的基本原理酶標(biāo)記熒光(enzyme-labeledfluorescent)信號放大系統(tǒng)是另一種*的免疫熒光信號放大技術(shù)。其原理是酶促反應(yīng)(酶+底物)過程中在酶活性部位產(chǎn)生熒光沉積物，這樣一個過程稱為酶標(biāo)熒光。目前可獲得許多產(chǎn)生熒光和發(fā)光的酶底物，例如ELF-97磷酸鹽、X—Gal、BCIP／NBT、堅固紅、堅固藍等。圖3—11顯示水溶性的ELF-97磷酸鹽底物通過磷酸酶的作用，轉(zhuǎn)為它的水解產(chǎn)物ELF-97乙醇。這種高度不溶性的二維分子在磷酸酶活性部位形成一種強黃綠色熒光沉積

撫生試劑-免疫酶細胞化學(xué)酶標(biāo)抗體法2014/05/30

免疫酶細胞化學(xué)酶標(biāo)抗體法酶標(biāo)抗體的染色可分為直接法和間接法。直接法是將酶直接標(biāo)記在每一種抗體上，間接法是將酶標(biāo)記在第2抗體上，檢測組織細胞內(nèi)的特定抗原物質(zhì)。間接法所用的第l抗體是對組織細胞內(nèi)某種抗原的特異性抗體(80％～90％的抗血清系由家兔制得，而絕大多數(shù)單克隆抗體系由小鼠制備)；第2抗體則為第1抗體[家兔和(或)小鼠的IgG]的抗體。所以，只要不同的第1抗體均來自同一種屬，同一標(biāo)記的第2抗體就能用來顯示不同特異性抗原的存在，這樣可避免直接法中標(biāo)記每一種第1抗體的麻煩，并且提高了敏感度。目前的

撫生試劑-酵母菌免疫染色的操作步驟2014/05/29

酵母菌免疫染色的操作步驟(1)在細胞染色之前，制備溶于蒸餾水的lmg／m1多聚賴氨酸溶液(平均分子質(zhì)量400kDa)。將多聚賴氨酸涂于載玻片上，孵育15min。用水沖洗玻片，干燥后將玻片保存在室溫。(2)建立對數(shù)生長期的酵母菌細胞。取出生長培養(yǎng)的樣品。(3)加入5倍體積的新鮮配制的4％多聚甲醛(見附錄Ⅳ，但不溶于PBS中而用0．1mol／L磷酸鉀溶解，pH6．5)。(4)混均后于室溫下孵育90min。(5)用0．1mol／L磷酸鉀(pH6．5)洗細胞3次。(6)zui后將沉淀重懸于1．2m01／

撫生試劑-抗神經(jīng)元細胞核抗體自身抗原2014/05/28

抗神經(jīng)元細胞核抗體自身抗原ANNA—l靶抗原是一組特異地表達于神經(jīng)元和相關(guān)腫瘤上的35—40kD堿性蛋白。分子克隆研究提示，這組蛋白抗原由三種*的基因：HuD、HuC／ple21和Hel—N1編碼。其中HuD基因位于lp34，HuC／ple21和Hel-N1分別位于19和9號染色體上。ANNA-2靶抗原分別為55k．D和80kD的兩種神經(jīng)元蛋白。Hu抗原是果蠅基因Elav的一種同源基因產(chǎn)物，Elav與果蠅神經(jīng)元分化密切相關(guān)。Elav表達于神經(jīng)母細胞的細胞周期末期，其突變會導(dǎo)致神經(jīng)元分化的停滯和神

撫生試劑-AP融合蛋白的測定2014/05/27

AP融合蛋白的測定A．酶裂解測定法1．在離心管中加入恒定濃度(1—5ug)的AP融合蛋白以及相應(yīng)的能夠結(jié)合此融合蛋白的抗親和性結(jié)構(gòu)域標(biāo)簽樹脂。室溫反應(yīng)2小時，溫和搖動。2．5000g離心1分鐘，棄去上清。用1mlTE重懸并再次離心。以TE和蛋白酶反應(yīng)緩沖液分別洗滌樹脂一次。3．以200ul蛋白酶反應(yīng)緩沖液重懸此洗滌過的樹脂。為達到一個適合的反應(yīng)速率所需的蛋白酶的量需要通過預(yù)實驗進行測定。對于一個預(yù)實驗，陽性對照和陰性對照的底物融合蛋白應(yīng)該用一系列濃度的蛋白酶進行處理。4．在不同的時間間隔，從反應(yīng)

撫生試劑-抗原和免疫原、抗體和免疫球蛋白的區(qū)別2014/05/26

抗原和免疫原、抗體和免疫球蛋白的區(qū)別抗原和免疫原的區(qū)別這兩個概念很相似，經(jīng)常作為同義詞使用?？乖兔庖咴菍Ψ肿訌牟煌嵌人鞯亩x。免疫原是指任何外來的并能刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的物質(zhì)?？乖侵改芘c抗體或T細胞受體結(jié)合的物質(zhì)。在免疫反應(yīng)中免疫原和抗原可互換，因為誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的關(guān)鍵步驟就是結(jié)合抗體和T細胞受體。然而在提到依賴于抗體的免疫組化技術(shù)時則只使用抗原這個概念?？贵w和免疫球蛋白的區(qū)別由于免疫學(xué)在不同領(lǐng)域的應(yīng)用導(dǎo)致這兩個概念的出現(xiàn)，但它們指的是同一類蛋白。盡管有時在某種情況下更傾向于使用其中的

撫生試劑-ELISA試劑組成2014/05/23

ELISA試劑組成1．抗原在ELISA中應(yīng)用的抗原要求有較高的特異性、親和力和純度。主要有3類，即自然抗原、人工合成抗原和基因重組抗原。自然抗原的純度不高，特異性不強；合成抗原一般為多肽片段，缺乏天然抗原所具有的立體結(jié)構(gòu)表位，親和力不高，可能導(dǎo)致相應(yīng)表位的抗體漏檢；基因重組抗原具有安全、特異性強、親和力高、產(chǎn)量大等特點，是一種比較理想的抗原，但其純化比較困難。2．抗體在ELISA中應(yīng)用的抗體可分為多克隆抗體(多抗)和單克隆抗體(單抗)。多抗取白免疫動物的抗血清，制備較簡單，但抗血清成分復(fù)雜，除含

撫生試劑-單克隆抗體技術(shù)概念、原理、基本方法和操作流程2014/05/22

單克隆抗體技術(shù)概念、原理、基本方法和操作流程骨髓瘤細胞及飼養(yǎng)細胞的制備選擇瘤細胞株的zui重要的一點是與待融合的B細胞同源。如待融合的是脾細胞，各種骨髓瘤細胞株均可應(yīng)用，但應(yīng)用zui多的是Sp2/0細胞株。該細胞株生長及融合效率均佳，此外，該細胞株本身不分泌任何免疫球蛋白重鏈或輕鏈。細胞的zui高生長刻度為9×105/ml，倍增時間通常為10～15h。融合細胞應(yīng)選擇處于對數(shù)生長期、細胞形態(tài)和活性佳的細胞（活性應(yīng)大于95％）。骨髓瘤細胞株在融合前應(yīng)先用含8-氮鳥嘌呤的培養(yǎng)基作適應(yīng)培養(yǎng)，在細胞融合的

撫生試劑-蛋酶3特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體自身抗原2014/05/21

蛋酶3特異性抗中性粒細胞胞質(zhì)抗體自身抗原1．定義PR3是cANCA的主要靶抗原，為一種陽離子蛋白(等電點，pH9．4)，含有228個氨基酸屬于絲氨酸蛋白酶中的色氨酸家族，僅在靈長類和人類表達，是多種功能蛋白如彈性蛋白、血紅蛋白、黏蛋白、層黏蛋白、Ⅲ型膠原的蛋白水解酶，對Calbicans大腸桿菌具有抗菌作用并參與骨髓細胞分化等。2．來源PR3見于多核細胞、單核細胞的MPO陽性顆粒中以及人類內(nèi)皮細胞、早幼粒細胞株(HL-60)和人腎癌細胞株(SK—RCll)中。通常PMN是天然PR3的惟一來源。利

撫生試劑-免疫復(fù)合物的測定2014/05/20

免疫復(fù)合物的測定免疫復(fù)合物(immunecomplex，IC)或抗原抗體復(fù)合物是抗原與其對應(yīng)抗體相結(jié)合的產(chǎn)物。在正常情況下，機體內(nèi)的游離抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成IC，可被機體的防御系統(tǒng)清除，作為清除異物抗原的一種方式，對機體有利。但在某些情況下，體內(nèi)形成的IC不能被及時清除，則可在局部沉積，通過激活補體，并在血小板、中性粒細胞等參與下，引起一系列連鎖反應(yīng)而導(dǎo)致組織損傷，出現(xiàn)臨床癥狀，稱為免疫復(fù)合物病(immunocomplexdisease，lCD)。由于抗原與抗體比例不同，所形成的IC分子大小各

撫生試劑-膠體金標(biāo)記蛋白的制備2014/05/16

膠體金標(biāo)記蛋白的制備膠體金對蛋白的吸附主要取決于pH值，在接近蛋白質(zhì)的等電點或偏堿的條件下，二者容易形成牢固的結(jié)合物。如果膠體金的pH值低于蛋白質(zhì)的等電點時，則會聚集而失去結(jié)合能力。除此以外膠體金顆粒的大小、離子強度、蛋白質(zhì)的分子量等都影響膠體金與蛋白質(zhì)的結(jié)合。1．待標(biāo)記蛋白溶液的制備將待標(biāo)記蛋白預(yù)先對0.005Mol/LpH7.0NaCl溶液中4℃透析，以除去多余的鹽離子，然后100000g4℃離心1h，去除聚合物。2．待標(biāo)膠體金溶液的準(zhǔn)備以0.1Mol/LK2CO3或0.1Mol/LHCl調(diào)

撫生試劑-表皮生長因子（EGF）的測定方法2014/05/15

表皮生長因子(EGF)的測定方法EGF主要來源于頒下腺。成年人許多組織中也表達EGF。人成纖維細胞、唾液腺癌細胞等也可產(chǎn)生EGF。EGF的作用沒有種屬特異性，人和小鼠的EGF對人成纖維細胞的作用相同。1．Swiss3T3細胞增殖法(1)用含5％FCS的DMEM培養(yǎng)液將Swiss3T3細胞調(diào)整成1×104／mL，接種于60mm的培養(yǎng)皿中(5mL)，置37C5％C02溫箱中培養(yǎng)4～5d，待細胞匯合后，更換上述培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2～3d，此時細胞數(shù)不再增多。(2)分別加入200ral系列稀釋的待測樣品或

撫生試劑-免疫組織化學(xué)組織細胞的組織切片2014/05/14

免疫組織化學(xué)組織細胞的組織切片一、載玻片的處理免疫組化染色時間長，特別是雙PAP、免疫金銀染色等方法，所需時間更長，并要反復(fù)洗滌，切片在試劑中長時間浸泡，經(jīng)多次洗滌，極易造成脫片而影響實驗的結(jié)果。需采用以下方法處理：載玻片先置于洗潔液(或洗衣粉溶液)中煮沸30min，清水洗干凈后放人清潔液中浸泡12—24h，漂洗，用蒸餾水清洗后置于烤箱內(nèi)干燥，然后涂以切片黏合劑。切片黏合劑的配制方法如下。(1)明礬—明膠的配制方法明礬、明膠各1g，加入到100ml1％甘油中，加熱至70~C熔化，并攪拌混合至*透

撫生試劑-酶聯(lián)免疫斑點（ELISPOT）2014/05/13

酶聯(lián)免疫斑點(ELISPOT)酶聯(lián)免疫斑點(enzyme-linkedimmunosorbentspot,ELISPOT)檢測技術(shù)是通過兩種高親和力的特異性抗細胞因子抗體來檢測淋巴細胞分泌細胞因子情況的一種方法。淋巴細胞在體內(nèi)被抗原激活后，或者在體外培養(yǎng)中被培養(yǎng)液中含有的特異性抗原或刺激劑激活后，將這些細胞轉(zhuǎn)入ELISPOT培養(yǎng)板中。這些活化的淋巴細胞所分泌的細胞因子，在孵育的過程中可在分泌細胞原位被ELISPOT培養(yǎng)板上包被的特異性細胞因子抗體所捕獲。將細胞和過量的細胞因子洗除后，加入生物素標(biāo)