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蛋白質(zhì)組學的樣品制備2022/05/07

想要研究蛋白質(zhì)，首先要得到高度純化且具有生物活性的目的物質(zhì)，因此，蛋白樣品的制備是重要前提。蛋白提取的質(zhì)量和效果對后續(xù)的研究分析有重要影響。不同種類的樣本在制備過程中，存在一些差異，要根據(jù)樣本特征調(diào)整實驗方案和操作細節(jié)?；驹瓌t樣品處理盡量簡單，減少蛋白損失；盡量避免蛋白的降解；盡可能提高樣品蛋白的溶解度；防止溶液介質(zhì)中對蛋白質(zhì)的人為修飾；去除非蛋白雜質(zhì)。制備過程蛋白質(zhì)的制備一般要經(jīng)過以下四個階段：選擇材料和預處理，材料的破碎，提取和純化，濃縮、干燥和保存。由于蛋白種類繁多，性質(zhì)差異較大，因此不

蛋白質(zhì)組學實用分析技術(shù)一覽2022/05/07

分析其實也屬于技術(shù)的一部分，且在蛋白質(zhì)組學研究中顯得尤為重要，因為蛋白質(zhì)組學研究提供的數(shù)據(jù)是生物學上最龐大的，而且蛋白質(zhì)組比基因組具有更大的復雜性，因此蛋白質(zhì)組信息學更有挑戰(zhàn)性。今天小編先拋磚引玉地介紹幾個常用的分析方法和軟件。蛋白質(zhì)定性分析蛋白質(zhì)定性分析通常是指利用質(zhì)譜法進行蛋白質(zhì)鑒定和序列分析。蛋白質(zhì)定性分析分為top-down分析和bottom-up分析兩種策略。目前，bottom-up分析策略被更廣泛的應(yīng)用于蛋白質(zhì)定性分析工作。根據(jù)使用儀器可分為：MALDI-TOF/TOF、LC-ESI

RNA電泳如何得出漂亮的條帶？2022/05/06

方法:1.電泳槽,制膠器,梳子等的清洗:去污劑浸泡過夜——自來水沖洗干凈——ddH20沖洗——3%H2O2灌滿浸泡過夜——滅活的0.1%DEPC水沖洗干凈——超凈臺內(nèi)紫外線照射過夜.2.燒瓶,燒杯,藥匙,量筒等制膠器械的清洗:0.1%DEPC水浸泡過夜后高壓消毒滅活,烘箱烘干.或者ddH20清洗干凈,超凈臺內(nèi)紫外線照射過夜.3.電泳緩沖液必須是RNasefree.4.預電泳5-10min減少了非特異RNA條帶的出現(xiàn),有利于分離和純化,同時可根據(jù)電泳儀是否冒泡判斷電泳儀裝置是否有誤.5.樣品是在電

RNA提取又失敗了，咋肥四？2022/05/06

目的研究基因的表達和調(diào)控時，需要從組織或細胞中分離純化RNA。RNA質(zhì)量的高低常常影響RT-PCR、cDNA庫構(gòu)建和NorthernBlot等分子生物學實驗的成敗。主要試劑Trizol是一種新型總RNA抽提試劑，內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì)，能迅速破碎細胞，抑制細胞釋放出的核酸酶。1.Trizol試劑含有苯/酚，具有毒性和刺激性，注意操作。2.RNase污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉，注意配帶手套，樣品盡可能蓋嚴；3.細胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不*會降低最后得率，因為一部分RNA會殘留

酵母RNA的提取及組份鑒定（稀堿法）說明2022/05/06

實驗原理由于RNA的來源和種類很多，因而提取制備方法也很各異。一般有苯/酚法、去污劑法和鹽酸胍法。其中苯/酚法又是實驗是最/常用的。組織勻漿用苯/酚處理并離心后，RNA即溶于上層被酚飽和的水相中，DNA和蛋白質(zhì)則留在酚層中。向水層加入乙醇后，RNA即以白色絮狀沉淀析出，此法能較好的除去DNA和蛋白質(zhì)。上述方法提取的RNA具有生物活性。工業(yè)上常用稀堿法和濃鹽法提取RNA，用這兩種方法所提取的核酸均為變性的RNA，主要用作制備核苷酸的原料，其工藝比較簡單。濃鹽法使用10%左右氯化鈉溶液，90℃提取3

ELISA常用檢測法——競爭法原理介紹2022/05/06

做ELISA實驗，有幾種常見的實驗方法，他們分別是競爭法、捕獲法、間接法、夾心法、而夾心法又可以分為雙抗體夾心法和雙抗原夾心法！在今天的文章中，遠慕生物將詳細得跟大家講述競爭法的實驗原理！競爭法一般分為直接競爭法和間接競爭法，這里我們以直接競爭法為例進行原理講解。直接競爭法，其基本原理是：將合適濃度的包被抗體包被于微孔板中，加入無關(guān)蛋白載體封閉未結(jié)合位點，加入標準品（樣本）和生物素標記的抗原物質(zhì)進行競爭結(jié)合，經(jīng)合適的溫度和一定時間的孵育，洗滌后，加入HRP標記的鏈霉親和素進行反應(yīng)，TMB顯色，微

如何獲得正確的支原體檢測結(jié)果？2022/05/06

可以說，到目前為止，針對體外細胞培養(yǎng)的支原體檢測的方法還沒有一種單獨使用就可以保證正確，既不會漏檢（假陰性），也不會多檢（假陽性）。（1）支原體固體培養(yǎng)法。通過固體培養(yǎng)法無法檢測污染細胞的一種-常見的支原體，即豬鼻支原體（M.Hyorhinis）。這是因為豬鼻支原體無法在支原體固體培養(yǎng)基上形成可見的菌落，而豬鼻支原體約占所有支原體污染的20-50%。這就意味支原體固體培養(yǎng)法漏檢率高達20-50%。（2）PCR法。PCR法導致的假陽性大家比較熟悉，無需多說。值得注意的是，由于細胞培養(yǎng)液中，經(jīng)常會含

培養(yǎng)的NK細胞不滿意，哪步出了錯？2022/05/05

對培養(yǎng)的NK細胞不滿意，是培養(yǎng)基的問題，還是試劑盒的問題？關(guān)于NK細胞培養(yǎng)的問題，不能只認為培養(yǎng)基不好或試劑盒不好，很多客戶在培養(yǎng)過程中遇到接種密度的問題、補液程序的問題、血漿問題以及樣本的問題，所以影響NK細胞培養(yǎng)效果的因素非常之多，下面遠慕生物為大家進行排查。1、血液樣本問題首先確認樣本的狀態(tài)，理論上來講外周血樣本應(yīng)在抽取的6個小時內(nèi)進行細胞分離，這個時段細胞是處于最-好的狀態(tài)，所以培養(yǎng)前請確認樣本是否新鮮，以及血液是否出現(xiàn)溶血現(xiàn)象血液樣本保存時間過長，會導致單核細胞無法成功誘導激活。血液如

把菌種培養(yǎng)成菌液的處理方法2022/05/05

⒈光合菌群：EM菌液中的光合菌群（好氧性和厭氧性）屬于獨立營養(yǎng)微生物，它能利用土壤接受太陽熱能或以紫外線為能源，將土壤中的硫化氫和碳氫化合物中的氫分離出來，變有害物質(zhì)為無害物質(zhì)，并以植物根部的分泌物、有機物、有害氣體（硫化氫等）及二氧化碳、氮等為基質(zhì)，合成糖類、氨基酸、維生素類、氮素化合物和生理活性物質(zhì)等，是肥沃土壤和促進動植物生長的主力部隊。光合菌的代謝物質(zhì)或者被植物直接吸收，或者成為其它微生物繁殖的養(yǎng)分，光合細菌如果能夠增殖，其它的有益微生物也會增殖。⒉乳酸菌群：乳酸菌（厭氧型）,它以攝取光

原代細胞真的可以永生化？2022/05/05

原代細胞因它可以模仿人體的新陳代謝逐日成為科研學者青睞的研究工具，但是原代細胞曾是出了名的難培養(yǎng)，需要耗費大量的時間、成本和資源。即使細胞捱過了極其嚴苛的解離步驟，但污染仍然是一個隱患，有可能讓幾天的成果化為烏有。此外還存在其他細胞污染、生長緩慢以及數(shù)量有限的問題。細胞系因容易培養(yǎng)且產(chǎn)量可觀而成為研究首-選。然而，它們并不完-美。細胞系會不斷突變。連續(xù)傳代導致它們的基因型和表型發(fā)生變化。有時候，它們已經(jīng)變得面目全非。一個研究小組曾經(jīng)發(fā)現(xiàn)，HEK293細胞系的腺病毒轉(zhuǎn)化產(chǎn)生的細胞更接近未成熟神經(jīng)元

做實驗應(yīng)該選擇原代細胞還是細胞株？2022/05/05

原代細胞：從體內(nèi)直接分離的細胞。功能、代謝、形態(tài)類似體內(nèi)細胞的特點，因此原代細胞適用于分析單個細胞形態(tài)、代謝、功能。原代細胞的缺點是：細胞均一性差，因為從特定組織取下來的原代細胞可能處于不同的發(fā)育時期。增殖能力差、培養(yǎng)時間受限、轉(zhuǎn)染效率低。細胞株：原代細胞經(jīng)過長期培養(yǎng)和篩選后，功能、代謝、形態(tài)趨于均一化的無限增殖細胞。適用于整體水平實驗。優(yōu)點是：容易培養(yǎng)、好感染、干擾因素少、便于同步化、實驗好操作。缺點是：與整體差別大、可能喪失原代細胞的特性，細胞株在長期傳代過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生變異。所以同一個學

遠慕教您如何自己動手配制標準溶液2022/04/29

實驗室如何自己動手配制標準溶液？有哪些基本要求？一起來看！自行配制的標準溶液必須具備8個基本要求1.1應(yīng)采用具有高純度的溶質(zhì)或基準物質(zhì)（如金屬、金屬氧化物或金屬化合物；酸、堿、金屬有機化合物、適宜的鹽類、有機溶劑等）。1.2為確保配制標準溶液的可靠性、準確性，實驗室的設(shè)備、環(huán)境設(shè)施均應(yīng)滿足其要求。（應(yīng)有監(jiān)測、控制和記錄環(huán)境條件。特別對灰塵、電磁干擾、放射、溫度、濕度、供電等）。1.3具有符合稱量要求器具、應(yīng)有正確稱量的電子分析天平，并通過周期性的檢定，有質(zhì)檢部門檢定的證書。1.4要有配制標準溶液

【實驗干貨】如何解決液相的“堵”和“漏”？2022/04/29

液相色譜對于很多人來說都是很好上手的儀器了，是屬于“易學難用”的儀器，有些經(jīng)驗豐富，用了好幾年的分析員們也會習慣于一些錯誤操作，引發(fā)出一些儀器的故障。液相色譜最常見的故障就是“堵”和“漏”，那么接下來遠慕就以這兩點來分別說明。堵“堵”的表現(xiàn)現(xiàn)象就是柱壓異常升高，直接原因就是流路不暢。堵塞的主要位置就是在色譜柱的前端，最主要原因就是流動相里有雜質(zhì)，雜質(zhì)的主要來源就是細菌?！岸隆钡脑?、配制流動相時細菌污染首先，我們要認識到，一般的國產(chǎn)甲醇其實不需要額外過濾處理，直接使用沒有問題。即使是有些固態(tài)微

關(guān)于細菌培養(yǎng)你了解多少？2022/04/29

細菌培養(yǎng)是一種用人工方法使細菌生長繁殖的技術(shù)。細菌在自然界中分布極廣，數(shù)量大，種類多，它可以造福人類，也可以成為致病的原因。大多數(shù)細菌可用人工方法培養(yǎng)，即將其接種于培養(yǎng)基上，使其生長繁殖。培養(yǎng)出來的細菌用于研究、鑒定和應(yīng)用。細菌培養(yǎng)是一個復雜的技術(shù)。一、培養(yǎng)條件培養(yǎng)時應(yīng)根據(jù)細菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基，制定培養(yǎng)條件（溫度、pH值、時間，對氧的需求與否等）。一般操作步驟為先將標本接種于固體培養(yǎng)基上，做分離培養(yǎng)。再進一步對所得單個菌落進行形態(tài)、生化及血清學反應(yīng)鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、蛋白胨、

遠慕實驗：無菌取樣技術(shù)匯總貼！2022/04/29

在討論無菌取樣的原因和采集方法之前，必須要理解“無菌的”的這一術(shù)語，“無菌”一般用于取樣中，意味著取樣過程中，避免操作引起污染。一個無菌樣品的采集，應(yīng)該通過這樣一種方式，即：在收集過程中，本身應(yīng)避免污染，然后放入消毒容器中。無菌樣品的采集基本是為了支持、針對工廠的衛(wèi)生條件狀況的檢查結(jié)果。檢驗前的準備工作1．包裝無菌取樣的工具：擁有正確的采取產(chǎn)品或加工過程的無菌取樣器械工具是至關(guān)重要的。除非使用合適的采集工具，否則樣品的完整性會被懷疑，甚至樣品毫無意義。為了避免沒有合適的取樣工具，建議建立一個無菌

實驗室純水存放要求與使用要點2022/04/28

純水存放要求01.超純水取水后很容易遭到環(huán)境污染，所以使用前取水(即取即用)方式時最合適的。只有把超純水與環(huán)境接觸的時間縮到極短，才能夠獲得純度*的超純水。02.在配置高純度的化學試劑時，盡量不要使用長時間儲桶中存放的超純水，因為儲桶經(jīng)長時間使用后，會因雜質(zhì)、微生物的污染而造成水質(zhì)的劣化，超純水像這種水，在使用時已經(jīng)不再是超純水。03.純水儲桶最好安裝空氣過濾器，防止環(huán)境因素造成的污染。04.儲水桶請勿放置在日光直射處，水溫上升，容易造成微生物繁殖。特別是半透明儲水桶，也會因為日光通透而造成藻類

化學實驗中分離與提純的痛苦，將在這里終結(jié)！2022/04/28

柱層析就是通常所說的過柱子，又叫柱色譜，屬于色譜法中使用*泛的一種方法。對于含有多種有機物的混合樣品，用重結(jié)晶無法提純時，柱層析法可以說是有機實驗中*的分離手段。實驗室中常用的是以硅膠和氧化鋁做固定相的吸附柱。硅膠層析法的分離原理是根據(jù)物質(zhì)在硅膠上的吸附力不同而得到分離，一般情況下極性較大的物質(zhì)易被硅膠吸附，極性較弱的物質(zhì)不易被硅膠吸附，整個層析過程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸過程。遠慕生物為大家總結(jié)了在使用柱層析時的幾個技巧，好好學習，化學實驗中分離與提純的痛苦，將在這里終結(jié)！硅膠的使用初做

非標實驗方法應(yīng)包含哪些內(nèi)容你知道嗎2022/04/28

非標準方法是指國際標準、區(qū)域標準或國家標準發(fā)布的方法以外的檢測方法。起草一個非標方法，在非標方法中至少應(yīng)該包含如下內(nèi)容：1、方法適當?shù)臉俗R；2、方法范圍；3、被檢測或校準物品類型的描述；4、被測定的參數(shù)或量和范圍；5、儀器和設(shè)備，包括技術(shù)性能要求；6、所需的參考標準和標準物質(zhì)（參考物質(zhì)）；7、要求的環(huán)境條件和所需的穩(wěn)定周期；8、操作程序的描述，包括：1）物品的附加識別標志、處置、運輸、存儲和準備；2）工作開始前所進行的檢查；3）檢查設(shè)備工作是否正常，需要時，在每次使用之前對設(shè)備進行校準和調(diào)整；4

為什么您的化學試劑變質(zhì)那么快？2022/04/28

化學試劑變質(zhì)的原因和措施1試劑變質(zhì)的原因引發(fā)和促使化學試劑發(fā)生變化的原因，大致可歸納如下。1、揮發(fā)2、升華3、潮解4、風化5、濃縮和析晶6、水解7、分解8、氧化和還原9、非氧化——還原反應(yīng)10、聚合和縮合11、光化學反應(yīng)12、霉變2如何預防化學試劑變質(zhì)a.密封這是最/普遍通用的方法。試劑瓶的材料和密封程度應(yīng)根據(jù)試劑性質(zhì)而定。如：強腐蝕的“三酸”和液溴，可用帶磨口玻璃的試劑瓶，或是有塑料襯墊的螺旋蓋的玻璃瓶，氫氟酸則應(yīng)密封貯藏在銀制或塑料制容器內(nèi)，等等。密封適用于易揮發(fā)、升華、潮解、稀釋、風化、水

關(guān)于標準物質(zhì)的這些問題遠慕為您解答2022/04/27

標準物質(zhì)是技術(shù)基礎(chǔ)中的核心和基礎(chǔ)部分，是分析測量結(jié)果質(zhì)量的重要保證。隨著分析測量的重要作用不斷加深，分析測量結(jié)果的質(zhì)量、結(jié)果的可靠性和有效性與標準物質(zhì)的依存度將更為顯著。那如何選擇合適的標準物質(zhì)、在分析中如何正確使用標準物質(zhì)呢？是不是有很多疑問？下面遠慕為你一一解答。選擇、購買標準物質(zhì)應(yīng)考慮哪些要素？（1）特性量的種類及定值方法：某些標準物質(zhì)可能只適用某一特定方法或?qū)兕I(lǐng)域的應(yīng)用，某些標準物質(zhì)的值有特殊規(guī)定，如含結(jié)晶水的值，應(yīng)對證書中該類說明加以注意，防止誤選誤用；（2）特性量水平：標準物質(zhì)的特