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上海雅吉生物科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第8年
細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)實(shí)驗(yàn)2019/01/14
實(shí)驗(yàn)方法原理細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)是測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)的常用方法,是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo)。一般細(xì)胞傳代之后,經(jīng)過(guò)短暫的懸浮然后貼壁,隨后度過(guò)長(zhǎng)短不同的潛伏期,即進(jìn)入大量分裂的指數(shù)生長(zhǎng)期。為了準(zhǔn)確描述整個(gè)過(guò)程中細(xì)胞數(shù)目的動(dòng)態(tài)變化,典型的生長(zhǎng)曲線(xiàn)可分為生長(zhǎng)緩慢的潛伏期,斜率較大的指數(shù)生長(zhǎng)期,呈平臺(tái)狀的平頂期及退化衰亡4個(gè)部分。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)的測(cè)定一般可利用細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)材料細(xì)胞試劑、試劑盒D-Hanks液牛血清RPMI1640雙抗0.08%胰酶儀器、耗材凈化工作臺(tái)離心機(jī)恒溫水浴箱冰箱倒置相差顯微鏡培養(yǎng)箱吸管
大鼠肺成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)2019/01/10
實(shí)驗(yàn)方法原理將大鼠的肺成纖維細(xì)胞從機(jī)體中取出,經(jīng)胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細(xì)胞,置合適的生長(zhǎng)培養(yǎng)基培養(yǎng)基中培養(yǎng),使細(xì)胞得以生存、生長(zhǎng)和繁殖。實(shí)驗(yàn)材料Wistar乳鼠試劑、試劑盒PBS牛血清青霉素鏈霉素EDTA胰酶碘酒酒精儀器、耗材綿球科直剪眼科彎剪眼科直鑷眼科彎鑷玻璃平皿塑料培養(yǎng)瓶實(shí)驗(yàn)步驟一、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備1.動(dòng)物出生后1-4天的Wistar乳鼠1只。2.試劑PBS、培養(yǎng)液(Hyclone的低糖DMEM,含Hyclone的10%新生牛血清、100U/ml青鏈霉素、1%明膠PBS、0
從臍血來(lái)源多能祖細(xì)胞(CB-MNCs)中分離并培養(yǎng)CD34+細(xì)胞實(shí)驗(yàn)2019/01/04
實(shí)驗(yàn)方法原理實(shí)驗(yàn)材料CB-MNCs試劑、試劑盒滅菌培養(yǎng)基過(guò)柱緩沖液FcR阻斷劑CD34微球儀器、耗材柱子(MS+RS+或LS+VS+)磁珠細(xì)胞分離儀尼龍過(guò)濾網(wǎng)30μm實(shí)驗(yàn)步驟(a)準(zhǔn)備過(guò)柱緩沖液,用抽真空裝置去除氣體。(b)每108個(gè)CB-MNCs用終體積300μL緩沖液重懸。(c)每108個(gè)CB-MNCs懸液加100μLFcR阻斷劑,抑制CD34微珠非特異性結(jié)合或通過(guò)Fc受體介導(dǎo)與非靶細(xì)胞的結(jié)合。(d)每108個(gè)CB-MNCs懸液加100μLCD34微球進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記,充分混勻后在6?12℃冰箱
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)2019/01/03
實(shí)驗(yàn)方法原理基本原理類(lèi)似于DNA的天然復(fù)制過(guò)程,其特異性依賴(lài)于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成:①模板DNA的變性:模板DNA經(jīng)加熱至94℃左右一定時(shí)間后,使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結(jié)合,為下輪反應(yīng)做準(zhǔn)備;②模板DNA與引物的退火(復(fù)性):模板DNA經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合;③引物的延伸:DNA模板--引物結(jié)合物在Taq酶的作用下,以dNTP為
細(xì)胞電融合2019/01/03
實(shí)驗(yàn)方法原理將制備的游離細(xì)胞或原生質(zhì)體,置于電融合室中,在高頻交流電場(chǎng)的作用下,細(xì)胞被極化,成為偶極子,造成細(xì)胞之間相互連接,如果施加的高頻交流電壓(即正弦波的p-p值)過(guò)高或作用時(shí)間過(guò)長(zhǎng),則細(xì)胞連接成串珠狀,應(yīng)適當(dāng)控制以上條件,盡量使兩細(xì)胞處于點(diǎn)接觸狀態(tài),然后施加方波脈沖予以刺激,由于電脈沖的瞬間作用,可擊破兩細(xì)胞接觸點(diǎn)部位的質(zhì)膜,此時(shí)質(zhì)膜的脂類(lèi)分子發(fā)生重組,同時(shí)由于細(xì)胞表面的張力作用,使兩細(xì)胞融合逐步*。實(shí)驗(yàn)材料動(dòng)物游離細(xì)胞植物原生質(zhì)體試劑、試劑盒甘露醇氧化鈉纖罐索醇離析酶蝸牛酶CaCl2M
植物磷脂酸(PA )試劑盒原理2019/01/02
植物磷脂酸(PA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)植物磷脂酸(PA)試劑盒原理,本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T0.8nmol/L-40nmol/L使用目的:本試劑盒用于測(cè)定植物組織,細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中磷脂酸(PA)含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中植物磷脂酸(PA)水平。用純化的植物磷脂酸(PA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入植物磷脂酸(PA),再與HRP標(biāo)記的磷脂酸(PA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色。TM
神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)2019/01/02
實(shí)驗(yàn)方法原理由于神經(jīng)干細(xì)胞(NeuralStemCell)具有自我更新和多向分化的潛能,因此,可以采用懸浮神經(jīng)球培養(yǎng)的方法來(lái)獲得和研究。即將胚胎腦組織處理成單個(gè)細(xì)胞后,只有具有自我更新能力的細(xì)胞才能在培養(yǎng)液中克隆增殖成為懸浮的神經(jīng)球,并隨著傳代的進(jìn)行,保持增殖能力和向多種神經(jīng)子代細(xì)胞分化的能力。實(shí)驗(yàn)材料新生SD大鼠試劑、試劑盒多聚甲醛蒸餾水PBSDAB血清培養(yǎng)基多聚賴(lài)氨酸胎牛血清雙蒸水儀器、耗材解剖顯微鏡眼科剪吸管24孔培養(yǎng)板制冰機(jī)勻漿器實(shí)驗(yàn)步驟1.獲得特定腦組織。2.獲取單細(xì)胞懸液通常有兩種方
小 鼠 胚 胎 飼 養(yǎng) 細(xì) 胞(MEF) 的 制 備2018/12/29
實(shí)驗(yàn)步驟2.3小鼠胚胎飼養(yǎng)細(xì)胞(MEF)的制備廣泛地用于支持hES的伺養(yǎng)層細(xì)胞來(lái)自小鼠胚胎[丁]^〇1113〇1161&1,,1998;Reu-binoffetal.,2000],如小鼠胚胎飼養(yǎng)細(xì)胞(MEFs),盡管它們可能是原始的間葉細(xì)胞的前體細(xì)胞。每一種hES細(xì)胞系在不同的詞養(yǎng)層細(xì)胞上的生長(zhǎng)可能不同,這點(diǎn)要注意,對(duì)于率的增殖有些飼養(yǎng)層細(xì)胞比另外一些細(xì)胞更合適,通常要傳5?10代以確保細(xì)胞適應(yīng)于新的伺養(yǎng)細(xì)胞。始終要做到只要細(xì)胞培養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)條件改變,就要對(duì)細(xì)胞的核型穩(wěn)定性和多能性進(jìn)行嚴(yán)格的核查。方案
雞胚成纖維細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)2018/12/29
減毒的復(fù)制缺陷痘苗病毒Ankara(MVA),作為標(biāo)準(zhǔn)痘苗病毒株的替代物,可以作為載體表達(dá)外源蛋白。MVA是痘苗病毒Ankara在雞胚成纖維細(xì)胞中通過(guò)多次傳代(570次)得到的。盡管MVA可以表達(dá)重組蛋白,但其在人類(lèi)和大部分哺乳動(dòng)物細(xì)胞中不能包裝成具有感染能力的病毒顆粒,因此需制備專(zhuān)門(mén)用于培養(yǎng)MVA的雞胚成纖維細(xì)胞。本實(shí)驗(yàn)主要介紹雞胚成纖維細(xì)胞的制備。實(shí)驗(yàn)方法原理用雞胚制備培養(yǎng)雞胚成纖維細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)材料9日齡雞胚試劑、試劑盒70%乙醇胰酶/EDTA無(wú)添加MEM培養(yǎng)基*MEM-10培養(yǎng)基儀器、耗材無(wú)
新生大鼠心臟細(xì)胞的分離和培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)2018/12/29
實(shí)驗(yàn)材料SpragueDawley幼鼠試劑、試劑盒胰酶液乙醇儀器、耗材攪拌臺(tái)燒杯實(shí)驗(yàn)步驟組織消化和分離細(xì)胞1.在細(xì)胞操作間內(nèi),放一個(gè)加熱攪拌臺(tái),上放一個(gè)裝有100ml滅菌水的容量600ml的燒杯,加熱至37℃。2.準(zhǔn)備胰酶液。用水浴或溫箱使胰酶液溫度保持在37℃。3.做一個(gè)冰臺(tái):將一只平皿裝滿(mǎn)冰后倒置即可,70%乙醇擦拭平皿后放進(jìn)操作臺(tái)。取3個(gè)60mm的一次性組織培養(yǎng)用平皿,加入5ml鹽水A,標(biāo)記上1,2,3放進(jìn)操作臺(tái)的冰臺(tái)上。4.取一只干凈加蓋的燒杯,內(nèi)放一塊Metofane飽和的紗布,把0~
標(biāo)記裂解培養(yǎng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)2018/12/28
實(shí)驗(yàn)方法原理實(shí)驗(yàn)材料待標(biāo)記的培養(yǎng)細(xì)胞試劑、試劑盒37℃標(biāo)記培養(yǎng)液1Ci/mlH3(32)PO4(溶于HCl)冰冷Tris平衡鹽水(TBS)/磷酸鹽平衡鹽水(PBS)溫和裂解緩沖液/RIPA裂解緩沖液儀器、耗材樹(shù)脂玻璃擋板(1in厚)取液器吸頭樹(shù)脂玻璃盒37℃微量離心管一次性吸管橡皮細(xì)胞刮子Sorvall冷凍離心機(jī)(或其他)樹(shù)脂玻璃薄板/4℃樹(shù)脂玻璃管架實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)試劑儀器的具體要求見(jiàn)「其他」。1.培養(yǎng)待標(biāo)記的細(xì)胞至適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)期。生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞中磷酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)達(dá)到高峰,除非研究靜止期細(xì)胞的蛋白質(zhì)磷酸化
從石蠟包埋固定的組織中制備 RNA 實(shí)驗(yàn)2018/12/28
實(shí)驗(yàn)材料石蠟包埋的組織樣品試劑、試劑盒甲酰胺消化緩沖液乙醇肝糖異丙醇苯酚蛋白酶KTrizol二甲苯儀器、耗材微量離心管恒溫箱實(shí)驗(yàn)步驟一、材料1.緩沖液、溶液和試劑去離子化的甲酰胺焦碳酸二乙酯(DEPC)處理過(guò)的水消化緩沖液(lmol/L異硫氰酸胍,25mmol/Lβ-巰基乙醇,0.5%N-月桂酰肌氨酸,20mmol/LTris-HCl,pH7.5)乙醇,100%和70%肝糖異丙醇苯酚(pH4.3):(70%:30%)蛋白酶K(60mg/ml,20U/mg)Trizol(Invitrogen)二甲
分子標(biāo)記—AFLP原理和操作步驟2018/12/28
實(shí)驗(yàn)方法原理AFLP是通過(guò)PCR反應(yīng)先把酶切片段擴(kuò)增,然后把擴(kuò)增的酶切片段在高分辨率的順序分析膠上進(jìn)行電泳,多態(tài)性即以擴(kuò)增片段的長(zhǎng)度不同被檢測(cè)出來(lái)。實(shí)驗(yàn)中酶切片段首先與含有與其共同粘末端的人工接頭連接,連接后的粘末端順序和接頭順序就作為以后PCR反應(yīng)的引物結(jié)合位點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)中,根據(jù)需要通過(guò)選擇在末端上分別填加了1~3個(gè)選擇性核苷的不同引物,可以達(dá)到選擇性擴(kuò)增的目的。這些選擇性核苷酸使得引物能選擇性地識(shí)別具有特異配對(duì)順序的內(nèi)切酶片段,進(jìn)行結(jié)合,導(dǎo)致特異性擴(kuò)增。實(shí)驗(yàn)材料DNA樣品試劑、試劑盒Taq酶Ec
胰島素受體對(duì)胰島素親和性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)2018/12/28
本實(shí)驗(yàn)介紹胰島素受體對(duì)胰島素親和性的測(cè)定方法。本實(shí)驗(yàn)來(lái)源于蛋白質(zhì)純化與鑒定實(shí)驗(yàn)指南實(shí)驗(yàn)步驟材料[125I]胰島素(受體級(jí))(DuPontNENNEX196)豬胰島素(如,SigmaChemicalCo,I3505)牛血淸白蛋白(BSA;1%)試劑結(jié)合緩沖液(冷配體置換實(shí)驗(yàn)用)(配方,見(jiàn)“試劑的配制”,PP.234~240)操作程序1)于微量離心管中建立下列反應(yīng)體系:2)各離心管置搖床上,室溫下孵育2h。3)各管用微型離心機(jī)離心20min,去上清。4)用γ-計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)離心管內(nèi)的放射性強(qiáng)度。分別從第
SCL-1人皮膚磷癌細(xì)胞培養(yǎng)方法2018/12/25
培養(yǎng)操作及注意事項(xiàng)說(shuō)明一.產(chǎn)品簡(jiǎn)介SCL-1人皮膚磷癌細(xì)胞培養(yǎng)方法1、細(xì)胞名稱(chēng):SCL-1;人皮膚磷癌細(xì)胞2、生長(zhǎng)特性:□貼壁□懸浮□半懸浮半貼壁3、細(xì)胞生長(zhǎng)條件:培養(yǎng)條件90%RPMI-1640+10%FBS+1%P/S溫度37℃空氣條件5%CO2,100%AIR傳代方法1:2傳代,2~3天換液凍存條件90%FBS+10%DMSO二.使用方法SCL-1人皮膚磷癌細(xì)胞培養(yǎng)方法1、您收到細(xì)胞后,請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作:取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細(xì)
左旋肉堿(L-Carnitine)農(nóng)殘?jiān)噭┖姓f(shuō)明書(shū)2018/12/25
左旋肉堿(L-Carnitine)農(nóng)殘?jiān)噭┖姓f(shuō)明書(shū)左旋肉堿(L-Carnitine)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用。1使用目的:本試劑盒用于飼料、魚(yú)、蝦和肉類(lèi)組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中左旋肉堿(L-Carnitine)殘留的定量檢測(cè)。2實(shí)驗(yàn)原理左旋肉堿(L-Carnitine)農(nóng)殘?jiān)噭┖姓f(shuō)明書(shū)本試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法,在微孔板包被有左旋肉堿(L-Carnitine)偶聯(lián)抗原,加入左旋肉堿(L-Carnitine)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游
細(xì)胞浸潤(rùn)生長(zhǎng)性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)2018/12/21
實(shí)驗(yàn)方法原理浸潤(rùn)性生長(zhǎng)是細(xì)胞浸入或穿透其它組織增殖生長(zhǎng)能力,浸潤(rùn)生長(zhǎng)性檢測(cè)是檢測(cè)癌性細(xì)胞的一項(xiàng)有意義的指標(biāo)。檢測(cè)方法需用其它正常組織和癌細(xì)胞共同培養(yǎng),觀(guān)察癌細(xì)胞向正常組織浸潤(rùn)生長(zhǎng)的情況。實(shí)驗(yàn)材料雞胚試劑、試劑盒Bacto瓊脂Eagle緩沖液小牛血清福爾馬林Hanks液碘酒儀器、耗材玻璃圈CO2溫箱培養(yǎng)皿平皿蓋手術(shù)剪手術(shù)鉗離心機(jī)注射器燒杯實(shí)驗(yàn)步驟常用雞胚皮膚或心肌組織塊,作為被浸潤(rùn)生長(zhǎng)的對(duì)象;今以雞胚皮膚為例,培養(yǎng)過(guò)程如下1.程序(1)雞胚浸出液制備(2)瓊脂層制備1%Bacto瓊脂(用不含NaH
神經(jīng)細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)2018/12/21
實(shí)驗(yàn)方法原理神經(jīng)細(xì)胞的原代培養(yǎng)是盡量創(chuàng)造適合于各類(lèi)神經(jīng)細(xì)胞生長(zhǎng)的體外環(huán)境,獲得狀態(tài)良好,純度較高細(xì)胞的方法。腦部組織來(lái)源的各種神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)具有相似的取材過(guò)程和部分通用的培養(yǎng)條件。實(shí)驗(yàn)材料動(dòng)物組織試劑、試劑盒消化液(0.25%胰蛋白酶+O.04%的EDTA)*培養(yǎng)基(DMEM+10%胎牛血清+雙抗)D-PBS液多聚賴(lài)氨酸(包被濃度1OOµgml)滅菌超純水殯伏75%酒精儀器、耗材體視顯微鏡相差顯微鏡精細(xì)器械(彎鑷、直鑷、虹膜剪、75%酒精消毒)眼科器械(彎鑷、直鑷、剪刀共3套高壓消毒)各種規(guī)格細(xì)
植物查爾酮合酶(CHS)試劑盒操作說(shuō)明2018/12/20
植物查爾酮合酶(CHS)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說(shuō)明書(shū)本試劑盒僅供研究使用。檢測(cè)范圍:96T2U/L-90U/L使用目的:植物查爾酮合酶(CHS)試劑盒操作說(shuō)明本試劑盒用于測(cè)定植物組織,細(xì)胞及其它相關(guān)樣本中查爾酮合酶(CHS)活性。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中植物查爾酮合酶(CHS)水平。用純化的植物查爾酮合酶(CHS)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入植物查爾酮合酶(CHS),再與HRP標(biāo)記的查爾酮合酶(CHS)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*
EA.hy926人臍靜脈融合細(xì)胞2018/12/20
培養(yǎng)操作及注意事項(xiàng)說(shuō)明一.產(chǎn)品簡(jiǎn)介1、細(xì)胞名稱(chēng):EA.hy926人臍靜脈融合細(xì)胞EA.hy926人臍靜脈融合細(xì)胞描述:在PEG脅迫下,將原代培養(yǎng)的人臍靜脈細(xì)胞與抗硫鳥(niǎo)嘌呤的A549克隆株融合,構(gòu)建了人臍靜脈細(xì)胞株,EA.hy926。融合子在HAT培養(yǎng)基上生長(zhǎng)并以八因子相關(guān)抗原篩選。EA.hy926已經(jīng)過(guò)100次以上的群體倍增(PDLs)。電鏡照片顯示W(wǎng)eibel-Palade小體的細(xì)胞質(zhì)分布以及組織特異性的細(xì)胞器,分化的內(nèi)皮細(xì)胞特性如血管生成,體內(nèi)平衡/血栓形成,血壓及炎癥反應(yīng)。生長(zhǎng)特性:成纖維
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