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為何你的基因總是無(wú)法正確構(gòu)建到載體上？2021/12/28: 最初接觸基因克隆和構(gòu)建載體時(shí)，總會(huì)遇到這樣那樣的問(wèn)題，構(gòu)建載體作為很多實(shí)驗(yàn)的必須步驟，不應(yīng)該成為阻擋后續(xù)實(shí)驗(yàn)的障礙。這是因?yàn)橥ǔ?lái)說(shuō)，載體構(gòu)建相關(guān)的問(wèn)題都過(guò)于簡(jiǎn)單，下面就來(lái)了解一下！構(gòu)建載體常出現(xiàn)的問(wèn)題1、無(wú)法成功克隆到基因2、基因無(wú)法成功連接至載體3、檢測(cè)質(zhì)粒時(shí)發(fā)現(xiàn)目的基因大小不對(duì)4、檢測(cè)質(zhì)粒時(shí)發(fā)現(xiàn)大小差不多，但測(cè)序結(jié)果不對(duì)一般，在構(gòu)建載體時(shí)，能遇到的也就這幾個(gè)問(wèn)題，如果有其他問(wèn)題存在也大概與上述四個(gè)問(wèn)題是密切相關(guān)的。需要說(shuō)的是，如果載體構(gòu)建出了狀況，就不要一味的重復(fù)了，一遍不成功，十遍也絕不

微載體培養(yǎng)技術(shù)實(shí)驗(yàn)人了解一下2021/12/28: 一、微載體培養(yǎng)應(yīng)用此技術(shù)于1967年被用于動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)。經(jīng)過(guò)三十余年的發(fā)展，該技術(shù)目前已漸日趨完善和成熟，并廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)疫苗、基因工程產(chǎn)品等。微載體培養(yǎng)是目前*的最有發(fā)展前途的一種動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)，其兼具懸浮培養(yǎng)和貼壁培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)，放大容易。目前微載體培養(yǎng)廣泛用于培養(yǎng)各種類型細(xì)胞，生產(chǎn)疫苗、蛋白質(zhì)產(chǎn)品，如293細(xì)胞、成肌細(xì)胞、Vero細(xì)胞、CHO細(xì)胞。二、微載體是指直徑在60-250μm，能適用于貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各種合成的聚合物組成。自VanWezel用DE

蛋白質(zhì)相互作用你有多了解？2021/12/28: 為什么要研究蛋白質(zhì)相互作用？蛋白質(zhì)是細(xì)胞的功能分子，控制了細(xì)胞中所有生物系統(tǒng)。但是，通常它們不是“孤軍奮戰(zhàn)”，絕大多數(shù)蛋白質(zhì)會(huì)與其他的蛋白質(zhì)相互作用，一起參與生命的過(guò)程。因此了解未知或已知蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能和從細(xì)胞水平上確定細(xì)胞機(jī)制，已成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究的主要目標(biāo)。而當(dāng)前研究蛋白質(zhì)相互作用的主要技術(shù)方法，包括免疫共沉淀，熒光共定位，熒光雙分子互補(bǔ)，熒光雙分子互補(bǔ)，熒光能量共振轉(zhuǎn)移等研究方法，通過(guò)了解各種研究方法的原理和特點(diǎn)，在實(shí)驗(yàn)中可根據(jù)不同的要求和目的選擇合適的方法。免疫共沉淀(co-IP)原

實(shí)驗(yàn)室噬菌體！怎么防治？2021/12/28: 噬菌體是一類侵害細(xì)菌的病毒，又稱為細(xì)菌病毒(bacterialvirus)。英文名稱為bacteriaophage，簡(jiǎn)稱phage，來(lái)源于希臘文“phagos”，意為“吞噬”。1.噬菌體特征噬菌體具有一般病毒所有的特征：為非細(xì)胞生物，其結(jié)構(gòu)主要由蛋白質(zhì)和核酸（DNA或RNA）組成；它們只能在活細(xì)胞內(nèi)營(yíng)專性寄生，靠其宿主代謝補(bǔ)充，協(xié)助來(lái)復(fù)制核酸合成蛋白質(zhì)等組分，然后再進(jìn)行裝配增殖。在離體條件下，能以無(wú)生命的化學(xué)大分子狀態(tài)長(zhǎng)期存在并保持其侵染活性；非常專一的寄生性，在自然環(huán)境條件下，它們只能侵染細(xì)菌

影響核酸凝膠電泳結(jié)果的原因分析2021/12/27: 凝膠電泳是一種常用的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)，可鑒定、定量和純化核酸片段。我們常用的是瓊脂糖凝膠電泳，可以用來(lái)分離鑒定和純化DNA--pian段。將樣品上樣到瓊脂糖膠的孔內(nèi)并放入電場(chǎng)，使帶負(fù)電荷的核酸向正極移動(dòng)。蛋白質(zhì)和核酸會(huì)根據(jù)pH不同帶有不同電荷，在電場(chǎng)中受力大小不同，因此跑的速度不同，根據(jù)這個(gè)原理可將其分開(kāi)。較短的DNA--pian段遷移較快，而最長(zhǎng)的片段的遷移最為緩慢，從而實(shí)現(xiàn)基于DNA--pian段大小的分離。每當(dāng)提取完質(zhì)粒之后在鑒定檢測(cè)DNA時(shí)，制備使用瓊脂糖凝膠的過(guò)程中應(yīng)該要多注意，DNA酶污染

原代細(xì)胞如何取材，這些你都會(huì)嗎？2021/12/27: 人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。所以今天詳細(xì)給大家分享一下有關(guān)原代細(xì)胞的取材，想了解的小伙伴往下看喲~一、取材的基本要求1．取材要注意新鮮和保鮮2．應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌3．防止機(jī)械損傷4．去除無(wú)用組織和避免干燥5．應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等6．作好記錄二、各類組織的取材技術(shù)皮膚和粘膜的取材內(nèi)臟和實(shí)體瘤的取材血液細(xì)胞的取材骨髓、羊水、胸/腹水細(xì)胞取材動(dòng)物組織取材人胚體組織取材雞（鴨）鳥(niǎo)類胚胎組織取材皮膚和粘膜的取材主要取自于手術(shù)過(guò)程中的皮片，方法似外科取斷層皮片

慢病毒實(shí)驗(yàn)相關(guān)操作方法與問(wèn)題解答2021/12/27: 慢病毒（Lentivirus）是以人類免疫缺陷型病毒（HIV）為基礎(chǔ)發(fā)展起來(lái)的基因治療載體，它可以感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞，可有效地感染包括幾乎所有的哺乳動(dòng)物細(xì)胞、干細(xì)胞和原代細(xì)胞。此外，慢病毒具有嗜核性，可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上，從而可以在體內(nèi)較長(zhǎng)期表達(dá)。慢病毒的多種優(yōu)點(diǎn)，使它成為基因傳遞的強(qiáng)大而有效的工具，獲得了廣泛的應(yīng)用。因此，慢病毒成為了實(shí)驗(yàn)室的一大?？?。在使用慢病毒的過(guò)程中，我們會(huì)遇到一些問(wèn)題，比如細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率低，細(xì)胞狀態(tài)差等等。為了在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中更好地使用慢病毒，我們應(yīng)該

全面解析Western blot實(shí)驗(yàn)原理2021/12/27: WB是一種把電泳分離的組分從凝膠轉(zhuǎn)移到一種固相支持物(NC膜或PVDF膜)，并以針對(duì)特定氨基酸序列的特異性試劑作為探針檢測(cè)。WB采用抗體作為探針，抗體可以與附著在固相支持物的靶蛋白的抗原表位發(fā)生抗原-抗體免疫反應(yīng)。這種技術(shù)的作用是對(duì)細(xì)胞或組織提取的蛋白混合物(即總蛋白混合物)中的某一特異蛋白進(jìn)行鑒別和半定量分析，旨在鑒別特異性蛋白的類型(如亞型、聚體、剪切體等)和蛋白表達(dá)量的變化。WB可大致分為以下7步，分別是蛋白提取、蛋白定量、SDS-PAGE電泳、電轉(zhuǎn)印、封閉、抗原-抗體免疫反應(yīng)、蛋白檢測(cè)。

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室需要的儀器2021/12/24: 細(xì)胞學(xué)在生命科學(xué)科中起著至關(guān)重要的作用，近年來(lái)細(xì)胞學(xué)蓬勃發(fā)展，并取得了重大的進(jìn)展，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)建也是各個(gè)院校生物學(xué)科bi備的實(shí)驗(yàn)室。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)謹(jǐn)慎復(fù)雜，需要的實(shí)驗(yàn)設(shè)備種類繁多，下面就這些動(dòng)物細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室bi備儀器進(jìn)行簡(jiǎn)單介紹：一、CO2培養(yǎng)箱CO2培養(yǎng)箱是細(xì)胞培養(yǎng)的bi備儀器，它為細(xì)胞提供了個(gè)體外培養(yǎng)的舒適環(huán)境，如適宜的溫度、濕度、酸堿度、O2濃度等。細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)很容易受到各種細(xì)菌、微生物的感染，因此，CO2培養(yǎng)箱的滅菌和抑菌能力就顯得尤為重要。二、純水系統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)用水一般要求雙蒸水(0.8M

血清熱滅活真的是在浪費(fèi)時(shí)間嗎？2021/12/24: 血清的熱滅活是很多培養(yǎng)者感興趣的話題，價(jià)格不菲的血清中含有諸如生長(zhǎng)因子，維生素，氨基酸等珍貴物質(zhì)，而將它們置于50℃以上的溫度長(zhǎng)達(dá)30分鐘是*沒(méi)有必要的。盡管如此，在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室之中血清的熱滅活還是作為常規(guī)來(lái)執(zhí)行，多數(shù)實(shí)驗(yàn)者并沒(méi)有考慮熱處理對(duì)血清中的生長(zhǎng)因子，氨基酸等成分帶來(lái)的負(fù)面影響，在我們的技術(shù)熱線中最常被提到的就是否該對(duì)血清進(jìn)行熱滅活，下面我們就對(duì)胎牛血清的熱滅活進(jìn)行一些探討和解釋。根據(jù)調(diào)查，至少70％的研究者對(duì)血清的滅活僅僅是因?yàn)樽裾粘Ｒ?guī)操作，或者說(shuō)認(rèn)為是理所當(dāng)然的。常規(guī)滅活建議的溫度在

細(xì)胞的復(fù)蘇經(jīng)驗(yàn)總結(jié)！實(shí)驗(yàn)人收藏！2021/12/24: 在細(xì)胞復(fù)蘇過(guò)程中，有多次復(fù)蘇失敗，最終在查閱了相關(guān)技術(shù)積累了足夠的復(fù)蘇技能后復(fù)蘇成功，現(xiàn)將細(xì)胞復(fù)蘇的操作程序和注意事項(xiàng)總結(jié)如下，望能為實(shí)驗(yàn)人提供些參考。材料1.常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)儀器設(shè)備、恒溫水浴振蕩器。2.培養(yǎng)液（DMEM）胎牛血清（CBS）二甲基亞砜（DMSO）。操作程序1.細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)消毒，紫外照射40min以上。2.培養(yǎng)液（DMEM）、0.25％胰蛋白酶（Trypsin）恒溫水浴箱370C預(yù)熱20min，備用。3.二甲基亞砜（DMSO)在4度冰箱中冷藏30min，備用。4.從液氮保存罐中

細(xì)胞沒(méi)養(yǎng)好,看看是不是血清沒(méi)用對(duì)！2021/12/24: 牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中最chang用的天然培養(yǎng)基，與合成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配合使用，一般添加使用量在10~20%，主要作用是提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、激素和生長(zhǎng)因子等。養(yǎng)過(guò)細(xì)胞的小伙伴們應(yīng)該都知道：血清，由于其復(fù)雜的內(nèi)在成分和難以控制的外界因素，它既是細(xì)胞生長(zhǎng)的bi備營(yíng)養(yǎng)，也是細(xì)胞死亡的“致命du藥”，當(dāng)我們廢寢忘食的，嘔心瀝血的，鞠躬盡瘁的養(yǎng)著細(xì)胞同時(shí)，也極有可能因?yàn)橐粫r(shí)的疏忽和大意選擇了品質(zhì)不好的血清，導(dǎo)致珍貴的細(xì)胞意外身外，一切歸零，不得不重頭開(kāi)始!血清質(zhì)量的差異性大市場(chǎng)上各種血清產(chǎn)品魚(yú)龍混珠，一

牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用與質(zhì)量要求2021/12/23: 生物技術(shù)已經(jīng)被世界各國(guó)視為一種高技術(shù)，在整個(gè)科學(xué)技術(shù)中占據(jù)了特殊的顯著地位，特別是生命科學(xué)的發(fā)展更離不生物技術(shù)，生命科學(xué)的發(fā)展備受各國(guó)的重視。我國(guó)在很多大學(xué)中都設(shè)立了生命科學(xué)院?，F(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù)，而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系，特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展，細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價(jià)值。比如基因工程藥物或疫苗在研究生產(chǎn)過(guò)程中很多是通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的?；蚬こ桃腋我呙绾芏嗍且訡HO細(xì)胞作為載體；細(xì)胞工程中更是離不細(xì)胞培養(yǎng)，雜交瘤

檢定和校準(zhǔn)都有哪些區(qū)別？2021/12/23: 在國(guó)ji標(biāo)準(zhǔn)術(shù)語(yǔ)中，校準(zhǔn)與檢定的定義是不同的。簡(jiǎn)單地說(shuō)，校準(zhǔn)是把被測(cè)儀器或測(cè)量系統(tǒng)與已知參考標(biāo)準(zhǔn)的比較過(guò)程，并報(bào)告比較的結(jié)果。而檢定屬于法制計(jì)量范疇，除與校準(zhǔn)一樣的比較過(guò)程外，檢定還要對(duì)照技術(shù)規(guī)范——通常是計(jì)量器具廠家給定的技術(shù)指標(biāo)，給出合格與否的結(jié)論。校準(zhǔn)與檢定的對(duì)象都是測(cè)量?jī)x器、測(cè)量系統(tǒng)或計(jì)量器具。校準(zhǔn)和檢定有本質(zhì)區(qū)別，兩者不能混淆，更不能等同?，F(xiàn)就兩者之間的主要區(qū)別做如下討論。檢定過(guò)程必須嚴(yán)格執(zhí)行國(guó)家計(jì)量技術(shù)規(guī)范，帶有強(qiáng)制性;檢定結(jié)果要給出計(jì)量器具是否合格、能否投入使用的結(jié)論。而校準(zhǔn)過(guò)程，

流式試劑選擇及常見(jiàn)問(wèn)題解答2021/12/23: 一、如何搭配流式抗體熒光標(biāo)記流式抗體熒光標(biāo)記搭配主要由3個(gè)因素決定的：流式細(xì)胞儀能檢測(cè)多少個(gè)通道、需要同時(shí)檢測(cè)檢測(cè)多少個(gè)指標(biāo)、廠家的抗體有多少種熒光標(biāo)記。如果流式細(xì)胞儀的通道越多，那么同一份樣本能同時(shí)做的表面/胞內(nèi)標(biāo)志就越多A、如何根據(jù)流式細(xì)胞儀搭配流式抗體1）BD流式細(xì)胞儀流式細(xì)胞儀能檢測(cè)多少個(gè)通道是由有多少根激光決定的以及每根激光的功能決定的，所以首先需要注意兩點(diǎn)：流式細(xì)胞儀有哪些激光。比如標(biāo)配的FACSCalibur只有一根488nm的激光，能做FL1、FL2、FL3三個(gè)熒光通道/三個(gè)顏色

對(duì)照品的使用方法你真的知道嗎2021/12/23: 同標(biāo)準(zhǔn)品一樣，對(duì)照品也是實(shí)驗(yàn)室中的“常客”，有人說(shuō)標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品就如同雙胞兄弟，這話其實(shí)真沒(méi)錯(cuò)，雖然兩者間是有必然區(qū)別，但關(guān)系卻是密不可分，既然是實(shí)驗(yàn)室常客，其用途主要也是用于生化研究，含量測(cè)定等，據(jù)不*統(tǒng)計(jì)，對(duì)照品的品種已經(jīng)高達(dá)幾百甚至于上千種，這么多的對(duì)照品，我們應(yīng)該如何正確去使用呢?其標(biāo)定方法的注意細(xì)節(jié)你都知道嗎?鑒于對(duì)照品的品種眾多，對(duì)于它的保存方法我們也是一定的要求，一般來(lái)說(shuō)應(yīng)將對(duì)照品置于干燥陰涼處，大家都知道對(duì)照品是實(shí)驗(yàn)室?？停匀绻４娌划?dāng)，會(huì)直接影響到它的實(shí)驗(yàn)精準(zhǔn)性，但是對(duì)于不

培養(yǎng)基按用途可分為7項(xiàng)培養(yǎng)基2021/12/22: 一、基礎(chǔ)培養(yǎng)基:營(yíng)養(yǎng)要求相同的微生物，所需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)除少數(shù)幾種不同外，其他大部分營(yíng)養(yǎng)物是共同的，即為基礎(chǔ)培養(yǎng)基?；A(chǔ)培養(yǎng)基，再按照某一微生物的特殊需要，添加某種營(yíng)養(yǎng)物即可。如前述肉湯培養(yǎng)基和肉湯瓊脂培養(yǎng)基均屬此類。1%蛋白胨水培養(yǎng)基就是一個(gè)最jian單的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，該基礎(chǔ)培養(yǎng)基本身可供靛基質(zhì)試驗(yàn)用，若再分別加入各種糖類或醇類、苷類等材料，則可配成各種糖發(fā)酵培養(yǎng)基，供各種發(fā)酵試驗(yàn)用，于是就成為鑒別培養(yǎng)基。盡管不同微生物的營(yíng)養(yǎng)需求各不相同，但大多數(shù)微生物所需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)是相同的?；A(chǔ)培養(yǎng)基是含有

研制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)樣品的定值方法2021/12/22: 在我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)領(lǐng)域，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)是一個(gè)通用術(shù)語(yǔ)，有多種形式：國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品、參考品、國(guó)內(nèi)外廠家生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)樣品。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)經(jīng)過(guò)全國(guó)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)管理委員會(huì)審查，由國(guó)家質(zhì)檢總局計(jì)量行政部門批準(zhǔn)發(fā)布;國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)樣品由全國(guó)標(biāo)準(zhǔn)樣品技術(shù)委員會(huì)實(shí)施、監(jiān)督和管理，經(jīng)過(guò)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)評(píng)審、審批和發(fā)布，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和標(biāo)準(zhǔn)樣品都是有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。研制標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)樣品的定值方法：標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、標(biāo)準(zhǔn)樣品的定值方法分為基準(zhǔn)測(cè)量方法、參考方法和國(guó)內(nèi)外*的有效方法3種?；鶞?zhǔn)測(cè)量方法是具有最高計(jì)量學(xué)特性的方法，其操作可以被完整

標(biāo)準(zhǔn)溶液自配需要具備什么要求?2021/12/22: 標(biāo)準(zhǔn)溶液的提取有兩種方法，一種是直接制備對(duì)照品，另一種是已知準(zhǔn)確濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液的校準(zhǔn)和提取。標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的準(zhǔn)確與否直接關(guān)系到檢測(cè)結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度，其制備條件有非常嚴(yán)格的要求。下面小編跟大家分享一下~自配標(biāo)準(zhǔn)溶液須具備的基本要求：1.應(yīng)采用潔凈的優(yōu)質(zhì)硬玻璃容量瓶作最終體積的容器。2、為保證標(biāo)準(zhǔn)溶液配制的可靠性和準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)室設(shè)備和環(huán)境設(shè)施應(yīng)符合其要求,(應(yīng)有監(jiān)測(cè)、控制和記錄環(huán)境條件。特別對(duì)灰塵、電磁干擾、放射、溫度、濕度、供電等)。3.高純度的溶質(zhì)或?qū)φ瘴?如金屬、金屬氧化物或金屬化合物;酸、

自制標(biāo)準(zhǔn)品需求進(jìn)行的操作規(guī)程2021/12/22: 自制標(biāo)準(zhǔn)品需求進(jìn)行的操作規(guī)程是什么?企業(yè)如需克己作業(yè)規(guī)范品或?qū)φ掌?，?yīng)當(dāng)樹(shù)立作業(yè)規(guī)范品或?qū)φ掌返馁|(zhì)量規(guī)范以及制備、辨別、查驗(yàn)、批準(zhǔn)和貯存的操作規(guī)程，每批作業(yè)規(guī)范品或?qū)φ掌窇?yīng)當(dāng)用法定規(guī)范品或?qū)φ掌愤M(jìn)行標(biāo)化，并確認(rèn)有效期，還應(yīng)當(dāng)通過(guò)定時(shí)標(biāo)化證明作業(yè)規(guī)范品或?qū)φ掌返男r(jià)或含量在有效期內(nèi)保持穩(wěn)定。標(biāo)化的進(jìn)程和成果應(yīng)當(dāng)有相應(yīng)的記錄。1.企業(yè)對(duì)克己作業(yè)規(guī)范品或?qū)φ掌返墓芾響?yīng)滿意以上條件，不需送樣到藥檢所查驗(yàn)。2.對(duì)作業(yè)規(guī)范品非常全面的規(guī)則了，關(guān)鍵是企業(yè)的標(biāo)定流程和成果一定要符合要求。法定標(biāo)準(zhǔn)品及標(biāo)定查驗(yàn)辦法

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