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深圳市安培生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第5年
EB 病毒轉(zhuǎn)化成淋巴細(xì)胞2023/01/11
材料與儀器全血刀豆凝集素ARPMI生長(zhǎng)培養(yǎng)基離心管步驟1.混合10ml全血和10mlRPMI生長(zhǎng)培養(yǎng)基。生長(zhǎng)培養(yǎng)基(RPMI1640800ml,F(xiàn)BS200ml,2mmol/L-谷氨酰胺,5μg/ml兩性霉素,50μg/ml慶大霉素)2.取15ml無(wú)菌離心管,加3mlHisto-paque1077(Sigma),在其上加4ml稀釋血,分離淋巴細(xì)胞。3.室溫300g離心30分鐘,棄上層清亮血漿。4.收集不透明淋巴細(xì)胞層,細(xì)胞懸液倒入50ml無(wú)菌離心管。5.20mlRPMI1640生長(zhǎng)培養(yǎng)基洗兩次,
細(xì)胞復(fù)蘇的小細(xì)節(jié)操作讓您的細(xì)胞嗨起來(lái)2023/01/10
假期太快結(jié)束,又到了復(fù)蘇細(xì)胞開(kāi)始實(shí)驗(yàn)的環(huán)節(jié)了,以下是整理的一些復(fù)蘇細(xì)胞的注意事項(xiàng):1.細(xì)胞儲(chǔ)存在液氮中,溫度達(dá)-196℃,理論上儲(chǔ)存時(shí)間是無(wú)限的。只要一直在液氮,凍存沒(méi)有問(wèn)題,那么復(fù)蘇也不會(huì)出現(xiàn)很大的問(wèn)題,不存在有效期限,而且可能發(fā)生的是,細(xì)胞保存的時(shí)間越久,可能代次越靠前哦,細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,復(fù)蘇一定越快越好,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。2.取細(xì)胞時(shí)應(yīng)做好防護(hù)措施,帶好防凍手套,護(hù)目鏡。細(xì)胞凍存管可能漏入液氮,解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。3.必須在1
3D 細(xì)胞培養(yǎng)具體操作2023/01/10
體外三維細(xì)胞建模和成像是候選分子毒性評(píng)估的一個(gè)有價(jià)值的早期步驟,3D細(xì)胞培養(yǎng)很大程度上可檢測(cè)臨床前藥物開(kāi)發(fā)工作流程,包括在細(xì)胞、組織、器官和整個(gè)有機(jī)體的迭代更高生物水平上的毒性評(píng)估。在這些層次上建模和成像的能力是分子評(píng)估和發(fā)展的強(qiáng)大工具。3D細(xì)胞培養(yǎng)中的單個(gè)細(xì)胞提供了關(guān)于分子亞細(xì)胞對(duì)一般細(xì)胞功能的影響的數(shù)據(jù),如細(xì)胞生長(zhǎng)速度。3D細(xì)胞培養(yǎng)也用于評(píng)估特定細(xì)胞類(lèi)型的毒性,提供組織和器官功能的數(shù)據(jù)。3D細(xì)胞培養(yǎng)允許細(xì)胞生長(zhǎng),培養(yǎng)物向各個(gè)方向擴(kuò)展,從而模擬自然的微結(jié)構(gòu)。這種類(lèi)型的培養(yǎng)提供了對(duì)分子對(duì)細(xì)胞間相
細(xì)胞活性測(cè)定方法大全2023/01/10
代謝增殖測(cè)定MTT檢測(cè)法活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶,能使額外添加的MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan),并沉積在細(xì)胞中,死細(xì)胞則無(wú)此現(xiàn)象。接著用二甲基亞砜(DMSO)溶解沉積在細(xì)胞中的甲瓚后,可利用酶標(biāo)儀490nm波長(zhǎng)測(cè)光吸收值,依據(jù)吸光值(OD值)計(jì)算出活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),吸光值與細(xì)胞活性成正比?!鲌D例XTT檢測(cè)法與MTT原理相似,皆是利用添加物與活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶反應(yīng),并利用酶標(biāo)儀測(cè)定產(chǎn)物光吸收值;不同于MTT法的是,XTT法還原產(chǎn)物是水溶性的橙黃
血清沉淀知多少2023/01/10
血清沉淀是什么?血清中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀,其成分有多種類(lèi)型,產(chǎn)生的原因有很多,主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。1.纖維蛋白(Fibrin)血清中肉眼可見(jiàn)的沉淀物大多屬于這一類(lèi)型。由于在生產(chǎn)過(guò)程中,血清采集、過(guò)濾(3次0.1μm過(guò)濾)和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成,此時(shí)血清中纖維蛋白原(Fibrinogen)處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后,血清中纖維蛋白原往往會(huì)發(fā)生凝集,形成肉眼可見(jiàn)的沉淀。2.磷酸鈣(CalciumPhosphate)這是一種常見(jiàn)的沉淀成分,通常會(huì)造成血清出現(xiàn)云霧狀
T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)2023/01/10
原理T細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí),受到非特異性有絲分裂原(如PHA、ConA)刺激后,可出現(xiàn)細(xì)胞體積增大,代謝旺盛,蛋白和核酸合成增加,即向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的高低可以反映機(jī)體的細(xì)胞免疫水平,因此可作為測(cè)定機(jī)體免疫功能的指標(biāo)之一。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)有形態(tài)計(jì)數(shù)法、MTT法和同位素法三種。MTT法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法。MTT是一種噻唑鹽,化學(xué)名3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑,水溶液為黃橙色。小鼠脾細(xì)胞受到ConA作用后發(fā)生增殖活化,其胞內(nèi)線粒體琥珀酸脫氫酶活性相
消除微生物污染2023/01/06
原理通過(guò)沖洗單層培養(yǎng)物或通過(guò)離心重懸非貼壁細(xì)胞,以高濃度抗生素清洗培養(yǎng)物數(shù)次,然后將培養(yǎng)物傳代,用加抗生素的培養(yǎng)基傳三次,再用不加抗生素的培養(yǎng)基傳三次,每次傳代后都要檢測(cè)是否污染。材料與儀器DBSS高濃度抗生素培養(yǎng)液用于傳代培養(yǎng)的材料帶有40×或60×物鏡的相差顯微鏡用于支原體染色的材料步驟1.仔細(xì)收集污染培養(yǎng)液,如有可能,應(yīng)測(cè)試該有機(jī)體對(duì)一系列抗生素的敏感性,如果做不到,則應(yīng)對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行高壓滅菌或加入次氯酸鹽。2.用DBSS沖洗細(xì)胞(每一次沖洗可使污染物濃度減少兩個(gè)對(duì)數(shù)級(jí),除非污染物黏貼在細(xì)胞
分離人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞2023/01/06
材料與儀器D-PBSA胰蛋白酶EDTA人臍帶膠原蛋內(nèi)酶H冷的新生小牛血Hank平衡鹽溶液HBSSPSG70%乙醇HUVRC生長(zhǎng)培養(yǎng)液培養(yǎng)瓶手術(shù)刀和22號(hào)刀片手術(shù)針20ml注射器鱷魚(yú)夾動(dòng)脈夾尖頭剪棉紙鋁箔塑料薄膜或莎綸封皮軟木板很堅(jiān)韌的線Luer接合管步驟內(nèi)皮細(xì)胞的分離1.用鋁箔覆蓋軟木板。2.將棉紙鋪在鋁箔上面,然后用70%乙醇浸泡。3.擠出臍帶中的血液。4.切除臍帶一端2cm或2cm以上,包括動(dòng)脈夾痕跡處。5.將Luer接合管外套插入靜脈。6.用針將臍帶釘在軟木板上,但注意勿穿經(jīng)血管腔。7.用
小鼠胚胎MEF細(xì)胞的提取2023/01/06
小鼠胚胎MEF細(xì)胞的提取步驟:1.將新鮮收獲的胚胎放入10厘米的細(xì)胞培養(yǎng)皿中2.用PBSA覆蓋胚胎,取出胎盤(pán)和其他母體組織3.切掉頭頂(眼睛及以上),取出內(nèi)臟4.保存頭部/卵黃囊進(jìn)行DNA分離以進(jìn)行基因分型檢測(cè)5.將胚胎體置于單獨(dú)的10厘米板中6.加入1mL胰蛋白酶,用刀片切碎成1mm的小碎片7.用酒精燈火焰對(duì)樣品之間的刀片進(jìn)行消毒8.將皿置于37°C培養(yǎng)箱中30-45分鐘(傾斜,使胰蛋白酶覆蓋細(xì)胞)9.通過(guò)在每口井中添加4mLMEF培養(yǎng)基(通常DMEM+10%FBS+1%G/A)來(lái)抑制typs
從哺乳動(dòng)物細(xì)胞中制備核和細(xì)胞質(zhì)提取物2023/01/06
材料與儀器轉(zhuǎn)瓶或單層培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞(如HeLa細(xì)胞)PBS低滲緩沖液高鹽緩沖液含1.2molLKCl透析緩沖液液氮貝克曼JS4.2轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子50mL圓錐形刻度聚丙烯離心管(對(duì)較小體積的提取物也可用15mL的離心管)Dounce氏玻璃勻漿器(B型研杵)BeckmanJA-20離心轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子磁性攪拌器或傾斜臺(tái)BeckmanJA-20離心轉(zhuǎn)子或相當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)子磁性攪拌器或傾斜臺(tái)、管型透析膜(14000MWCO)、電導(dǎo)計(jì)步驟1a)收集轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)的細(xì)胞:將5×108?10×108細(xì)胞置1L的塑料瓶
單層細(xì)胞在細(xì)胞瓶中的接種2023/01/06
原理單層生長(zhǎng)的細(xì)胞增殖,融合成片,并長(zhǎng)滿細(xì)胞瓶表面。有些細(xì)胞靠頻繁地?fù)Q液可維持細(xì)胞在平臺(tái)期數(shù)天至數(shù)周;而許多其他細(xì)胞系需要胰蛋白酶處理、傳代培養(yǎng)后才能存活下來(lái),用胰蛋酶處理可將細(xì)胞從生長(zhǎng)物表面分離下來(lái)以促進(jìn)傳代培養(yǎng)。后種細(xì)胞系不易呈現(xiàn)出接觸抑制并繼續(xù)增殖,達(dá)到極限后細(xì)胞則從細(xì)胞瓶表面脫落,很難再?gòu)浬⒔臃N。材料與儀器步驟1)下列步驟描述胰蛋白酶處理細(xì)胞的過(guò)程(見(jiàn)下文“胰蛋白酶處理分離細(xì)胞”)2)重懸細(xì)胞于培養(yǎng)液中。在此時(shí)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)嚴(yán)好。若記錄傳代次數(shù)以識(shí)別細(xì)胞的生長(zhǎng)經(jīng)歷,可按方便傳代計(jì)劃的比例稀
細(xì)胞凍存實(shí)驗(yàn)2023/01/05
原理傳統(tǒng)上的細(xì)胞凍存(甘油/二甲基亞砜做保護(hù)劑)講求的是:慢凍速溶。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入的甘油或二甲基亞砜(DMSO),這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。用途細(xì)胞保種材料與儀器【實(shí)驗(yàn)材料】細(xì)胞、DMSO、0.25%Trypsin-EDTA(或細(xì)胞刮刀)、100X雙抗、PBS、胎牛血清、DMEM完-全培養(yǎng)基、75%乙醇、胰酶、異丙醇;【儀器與用品】?jī)龃婀堋?7度恒溫水浴鍋、培養(yǎng)皿(6cm)、細(xì)胞
免疫熒光抗體法2023/01/05
原理用人結(jié)腸癌細(xì)胞為免疫原,免疫小鼠,制得鼠抗人結(jié)腸癌細(xì)胞表面抗原(Ag)的單克隆抗體IgG(第一抗體),二者可以發(fā)生特異性的抗原抗體反應(yīng),形成抗原抗體復(fù)合物,再加入市售(也可自制)的熒光標(biāo)記的羊抗鼠IgG抗體(第二抗體),可以與復(fù)合物進(jìn)一步發(fā)生抗原抗體反應(yīng)(二次抗體反應(yīng)),這樣就可以在光顯微鏡下觀察到這種抗原在結(jié)腸癌細(xì)胞表面的存在。材料與儀器HeLa細(xì)胞1640培養(yǎng)液小牛血清甲醛固定液PBS液體石蠟蓋片載片培養(yǎng)瓶培養(yǎng)皿濾紙鑷子吸管倒置顯微鏡熒光顯微鏡微量加樣器步驟1.將培養(yǎng)瓶中的結(jié)腸癌細(xì)胞接種
神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)2023/01/05
材料與儀器大鼠CMF-Hanks液胰蛋白酶DMEMF12水浴鍋培養(yǎng)箱步驟一、原代培養(yǎng)1.選用生后1周的新生大白鼠,用碘酒,酒精棉球消毒,斷頭取其大腦皮層組織。2.解剖顯微鏡下,剝離腦膜,切除大腦髓質(zhì)部分。3.將大腦皮質(zhì)在無(wú)Ca2+、Mg2+Hanks液(CMF-Hanks液)中剪碎。4.室溫下靜置10min。5.在37℃水浴箱中用0.125%的胰蛋白酶(用CMF-Hanks液配制)消化30min。6.加入少許含20%血清的DMEM/F12(DMEM與F12為1:1)混合培養(yǎng)液(下同),用吸管稍加
小鼠肝細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)2023/01/05
原理直接從生物體內(nèi)獲取組織細(xì)胞進(jìn)行的首-次培養(yǎng)稱(chēng)為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代培養(yǎng)是建立各種細(xì)胞系的第一步,是從事培養(yǎng)工作的人員應(yīng)熟悉和掌握的最基本的技術(shù)。根據(jù)培養(yǎng)方法不同分為組織塊培養(yǎng)法和單層細(xì)胞培養(yǎng)法。材料與儀器小鼠DMEMDMEM胰酶PBS飯盒紗布小剪子小鑷子大鑷子大燒杯平皿研磨玻片濾網(wǎng)離心管6孔培養(yǎng)板吸管移液管手套微量加樣器步驟一、實(shí)驗(yàn)步驟1.將小鼠斷頸致死,置75%酒精泡2-3秒鐘,取肝臟,置于盛有PBS的平皿中。2.剔除脂肪、結(jié)締組織、血液等雜物,轉(zhuǎn)移到另一個(gè)盛有PBS液的平皿中。3.用手術(shù)剪
斑馬魚(yú)胚胎細(xì)胞的培養(yǎng)2023/01/05
原理收集胚胎,除去絨毛膜,用胰蛋白酶分散胚胎細(xì)胞,然后在胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層上培養(yǎng)從斑馬魚(yú)囊胚和原腸期胚獲得的原代細(xì)胞。材料與儀器鏈酶蛋白酶E用D-PBSA配制1%胰蛋白酶和1mmolLEDTA胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層人重組白血病抑制因子LDF基礎(chǔ)培養(yǎng)液LDF原代培養(yǎng)液LDF維持培養(yǎng)液D培養(yǎng)液Holtfreter緩沖液稀漂白劑步驟鱒魚(yú)胚胎提取物:(a)收集胚胎(受精后28天的ShastaRainbow或其他鱒魚(yú)種系,在10°C條件下飼養(yǎng),或者受精后3天的斑馬魚(yú),在28°C條件下飼養(yǎng)),在-80°C條
原代細(xì)胞怎么永生化2023/01/04
原代細(xì)胞都無(wú)法擴(kuò)增幾輪增殖,這被稱(chēng)為Hayflick極限,因?yàn)槊恳惠喌脑鲋扯紩?huì)縮短端粒。當(dāng)端粒達(dá)到臨界縮短長(zhǎng)度時(shí),DNA損傷被觸發(fā),導(dǎo)致細(xì)胞衰老,如果你試圖培養(yǎng)一個(gè)珍-稀原代細(xì)胞群,當(dāng)心它最終會(huì)死亡,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行操縱,以繞過(guò)衰老過(guò)程并變得不朽,原代細(xì)胞永生化就是有這么神奇的事情。自發(fā)性永生化細(xì)胞最-好-的例子就是癌細(xì)胞,它們可能經(jīng)歷了抵抗衰老的基因變化,并且開(kāi)始“長(zhǎng)生不老”。其實(shí)許多癌細(xì)胞株也沒(méi)有這種變化,事實(shí)上,喬治·蓋伊(GeorgeGey)這位科學(xué)家創(chuàng)造了第一個(gè)永生的、可以說(shuō)是最著名的細(xì)
內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的新秀來(lái)啦2023/01/04
內(nèi)皮細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的新秀來(lái)啦,HECV人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)啦,HECV細(xì)胞是不-可-多得的永生化內(nèi)皮細(xì)胞株,代次靠前,一周可以傳4-5次,8-12小時(shí)可達(dá)到5倍增,遠(yuǎn)遠(yuǎn)超于HMEC-1細(xì)胞株和HUVEC-T1增殖速度和形態(tài),是用來(lái)研究?jī)?nèi)皮功能障礙、血腦屏障實(shí)驗(yàn)及傷口愈合實(shí)驗(yàn)的最-佳-選擇,細(xì)胞形態(tài)如下:一.細(xì)胞鑒定結(jié)果:二、使用傷口愈合試驗(yàn)評(píng)估對(duì)HECV細(xì)胞遷移能力的相同影響:A)在0、6、24和48小時(shí)采集多組圖像,以確定細(xì)胞在不同條件下的遷移,使用ImageJfree軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析B)測(cè)量封閉區(qū)
收到活細(xì)胞怎么處理?2023/01/04
收到細(xì)胞后,發(fā)現(xiàn)是培養(yǎng)瓶,第一次操作的束手無(wú)策,怎么辦?首先我們得弄明白我們得細(xì)胞是貼壁細(xì)胞還是懸浮細(xì)胞或者是半懸浮細(xì)胞,不明白的同學(xué)可以參考下圖哦:貼壁細(xì)胞:SKOV3懸浮細(xì)胞:THP-1半懸浮半貼壁:BV-2細(xì)胞貼壁細(xì)胞請(qǐng)遵守以下準(zhǔn)則:細(xì)胞收到后,顯微鏡下觀察,有些細(xì)胞貼壁比較牢,它不會(huì)因?yàn)檫\(yùn)輸問(wèn)題有變化,收到后下顯微鏡下觀察細(xì)胞的密度,確定無(wú)污染,細(xì)胞無(wú)異常先放培養(yǎng)箱穩(wěn)定1-2個(gè)小時(shí)后,按照貼壁細(xì)胞消化順序消化:一.貼壁細(xì)胞消化順序如下:1.準(zhǔn)備工作,胰酶預(yù)熱,培養(yǎng)基預(yù)熱,PBS預(yù)熱10-
怎么使用GSIS方法檢測(cè)細(xì)胞胰島素分泌2023/01/04
Min6細(xì)胞是這次贈(zèng)送活動(dòng)中很多客戶(hù)選擇的細(xì)胞,一共送出去有50多株,隨之而來(lái)的就是問(wèn)胰島素的檢測(cè),很多客戶(hù)檢測(cè)出來(lái)只有低表達(dá)。Min6細(xì)胞培養(yǎng)需要注意三點(diǎn):1.細(xì)胞易聚團(tuán),消化的時(shí)間表面上看會(huì)非常短暫,大約30秒會(huì)全部脫落,脫落后請(qǐng)延長(zhǎng)消化時(shí)間到2分鐘后,再中和,細(xì)胞后期聚團(tuán)會(huì)減少。2.活細(xì)胞運(yùn)輸?shù)臅r(shí)候會(huì)漂浮,請(qǐng)收集培養(yǎng)基離心,離心后重新鋪板以完-全培養(yǎng)基剛沒(méi)過(guò)細(xì)胞為準(zhǔn),完-全培養(yǎng)基加太多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞浮力過(guò)大,貼壁不上。3.培養(yǎng)基請(qǐng)一定要加0.05mm的β-Mer以下是我們檢測(cè)使用的buffer
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