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單細(xì)胞鋪板在鋪細(xì)胞時要注意手法2022/04/20
單細(xì)胞鋪板是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中最常見又必須掌握的一門技術(shù),看似簡單,我們卻經(jīng)常遇到:如細(xì)胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現(xiàn)象,導(dǎo)致我們只能扔掉,重新鋪板。既耽擱時間又浪費(fèi)了細(xì)胞及培養(yǎng)板等資源。單細(xì)胞鋪板要鋪成那種很均勻的單層細(xì)胞,手法如下:1、細(xì)胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基,放入孵箱中放置10-20min;2、在滴入細(xì)胞時,細(xì)胞板子與通風(fēng)櫥有一定的角度,沿著板壁的孔邊緣滴入;3、滴入后,呈“8”字方法搖晃5-8次;4、置于水平臺上,放置10-20分鐘;5、放入孵箱。其實(shí)單細(xì)胞鋪
單克隆篩選是新一代細(xì)胞克隆篩選和挑取技術(shù)2022/04/19
單克隆篩選是新一代細(xì)胞克隆篩選和挑取技術(shù),細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)能夠更少時間里,自動化篩選并挑取更高水平表達(dá)的細(xì)胞克隆,擁有5組熒光通道,可以同時使用3組,細(xì)胞克隆篩選系統(tǒng)避免有限稀釋,快速高效篩選挑取雜交瘤克隆,建立穩(wěn)定細(xì)胞株,干細(xì)胞及特殊表面標(biāo)記細(xì)胞挑取及昆蟲細(xì)胞篩選挑取。單克隆篩選方法有有限稀釋法,半固體培養(yǎng)基挑選法,以及流式細(xì)胞術(shù)挑選法等。這其中有好多需要關(guān)注的點(diǎn),例如挑選細(xì)胞的參數(shù),挑選方法本身對細(xì)胞的損傷等。所以說,一個高效的篩選方法絕對能讓工作效率提高好幾倍。有限稀釋法是目前常用的一種常
上海單細(xì)胞分離實(shí)驗(yàn)基本步驟流程2022/04/18
上海單細(xì)胞分離是研究中困難的步驟之一,目前的分離策略主要分為三類:手動分離、熒光激活的細(xì)胞分選和微流體技術(shù)。在進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄分析之前,我們需要確定自己拿到了正確的細(xì)胞。如果你想要的細(xì)胞已經(jīng)處于懸浮狀態(tài)(比如循環(huán)腫瘤細(xì)胞),而且含量相對比較豐富,那么流式細(xì)胞分析將是你的理想選擇。如果樣本是實(shí)體組織,我們可以用酶分解掉膠原和其他細(xì)胞外蛋白。不過酶學(xué)消化對細(xì)胞影響較大,甚至可能改變基因轉(zhuǎn)錄情況。把組織細(xì)胞制成懸液之后,我們就可以通過特異性的熒光標(biāo)簽分離出自己想要的細(xì)胞,進(jìn)一步拿到單細(xì)胞是比較棘手的一步
單克隆鋪板能夠快速識別出是否有細(xì)胞被分配到孔里2022/04/14
單克隆鋪板將細(xì)胞通過一次性的芯片上端加樣孔,注入到芯片腔體中。單細(xì)胞流在微流控通道中流過激光檢測區(qū)域,機(jī)器能對細(xì)胞進(jìn)行識別,去除掉細(xì)胞碎片,死細(xì)胞以及狀態(tài)較差的細(xì)胞,使得最終落到孔板中的細(xì)胞都具有很好的活性。高速電子閥門能夠精確捕獲每一個活性細(xì)胞,最終形成1ul體積的液滴,輕柔地落進(jìn)孔板中。整個過程對細(xì)胞的損傷可以忽略不計,所以分選得到的細(xì)胞絕大多數(shù)的細(xì)胞都能再次分裂生長。單克隆鋪板是一款基于有限稀釋的基礎(chǔ)上研發(fā)的全自動細(xì)胞鋪板工具,有別于其他類型的細(xì)胞鋪板工具,它的整合了細(xì)胞成像系統(tǒng),細(xì)胞識別
單細(xì)胞測序是一種高效的檢測技術(shù)2022/01/16
單細(xì)胞測序技術(shù)又稱“下一代“測序技術(shù)或深度測序技術(shù),可以一次性對幾十萬至幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定,現(xiàn)已廣泛應(yīng)用在基因組測序、基因表達(dá)分析、非編碼小分子RNA鑒定、轉(zhuǎn)錄因子靶基因篩選及DNA甲基化等相關(guān)的研究領(lǐng)域。測序技術(shù)的突出優(yōu)點(diǎn)是可以從細(xì)胞圖譜的角度,探測細(xì)胞特異性以及細(xì)胞間的差異,探索細(xì)胞間的協(xié)同運(yùn)作方式,研究組織異質(zhì)性問題,根據(jù)細(xì)胞層面的特征對疾病進(jìn)行深度刻畫,能有效地解決組織樣本無法破解的細(xì)胞異質(zhì)性難題,有助于發(fā)現(xiàn)新的細(xì)胞類型?;诖罅康膯渭?xì)胞基因表達(dá)數(shù)據(jù),該平臺還可進(jìn)行細(xì)胞表達(dá)特
單細(xì)胞培養(yǎng)有哪些注意要點(diǎn)?2022/01/16
單細(xì)胞培養(yǎng)從植物器官、愈傷組織或懸浮培養(yǎng)物中游離出單個細(xì)胞,在無菌條件下,進(jìn)行體外生長、發(fā)育的技術(shù),人們分離和培養(yǎng)植物單細(xì)胞的設(shè)想和實(shí)踐都比較早,但成功地進(jìn)行單細(xì)胞培養(yǎng)是隨著更有效的培養(yǎng)基的發(fā)展以及從愈傷組織懸浮培養(yǎng)物分離單細(xì)胞的專門技術(shù)的建立才實(shí)現(xiàn)的。細(xì)胞間實(shí)現(xiàn)信號傳遞交流,采用三明治方式將PET/PC膜嵌在兩板之間,除了細(xì)胞本身,培養(yǎng)基中其他成分都可以自由通過PET/PC膜,達(dá)到細(xì)胞間信號傳遞交流的目的,配合10cm培養(yǎng)皿使用,適用于任何不同類型細(xì)胞間的共培養(yǎng),培養(yǎng)皿底部的飼養(yǎng)層細(xì)胞可以為目
北京單細(xì)胞分選詳細(xì)步驟介紹2022/01/16
生物體有成千上萬種細(xì)胞類型,有多種方法可以從生物體組織中分離出單個的細(xì)胞。從實(shí)體組織中單細(xì)胞分選關(guān)鍵兩步:一,(單個細(xì)胞)通常是用酶解的方式把離體或者活體分解成單個的細(xì)胞;二,單個的細(xì)胞必須在單個的反應(yīng)器中進(jìn)行裂解和進(jìn)一步的分析。利用流式細(xì)胞分選技術(shù)進(jìn)行的單細(xì)胞分選,具有精度高、通量大、分選參數(shù)多,成本相對低等優(yōu)點(diǎn),但要通過流式分選出足夠多的符合要求的單細(xì)胞進(jìn)行下游實(shí)驗(yàn)并沒有那么容易。下面三方面是要考慮的問題:1、細(xì)胞活性狀態(tài)對后續(xù)實(shí)驗(yàn)而言很重要,就拿轉(zhuǎn)錄組分析為例,高通量表達(dá)譜芯片技術(shù),都需要
了解一下單細(xì)胞鋪板可能會出現(xiàn)的問題2022/01/16
單細(xì)胞鋪板采用微流體技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)快速,高效,準(zhǔn)確的細(xì)胞鋪板工作,并且分離過程輕柔,不會影響細(xì)胞的后續(xù)生長,能廣泛應(yīng)用于單抗開發(fā)中的CLD環(huán)節(jié),以及單細(xì)胞測序等。原理如下:將細(xì)胞通過一次性的芯片上端加樣孔,注入到芯片腔體中,單細(xì)胞流在微流控通道中流過激光檢測區(qū)域,機(jī)器能對細(xì)胞進(jìn)行識別,去除掉細(xì)胞碎片,死細(xì)胞以及狀態(tài)較差的細(xì)胞,落到孔板中的細(xì)胞都具有很好的活性,高速電子閥門能夠捕獲每一個活性細(xì)胞,輕柔地落進(jìn)孔板中,整個過程對細(xì)胞的損傷可以忽略不計,所以分選得到的細(xì)胞絕大多數(shù)的細(xì)胞都能再次分裂生長。目
單細(xì)胞分離技術(shù)適用于基因工程細(xì)胞的克隆2022/01/16
單細(xì)胞分離讓單細(xì)胞選取和分離變得簡單,它可以迅速選取單細(xì)胞,并將細(xì)胞直接投放至96孔或384孔板中,每一各液滴中只含有一個單細(xì)胞,主要應(yīng)用包括:腫瘤免疫治療,基因編輯,抗體工程,細(xì)胞系培育,噬菌體展示,雜交瘤細(xì)胞,循環(huán)腫瘤細(xì)胞,以及胚胎細(xì)胞的分離。Namocell單細(xì)胞分離儀具有超高的性價比,簡單的用戶界面,無需培訓(xùn),讓每一個用戶輕松掌握,得心應(yīng)手,微流控芯片分離技術(shù),通過對細(xì)胞尺寸、顆粒度以及熒光信號的判斷,將目的細(xì)胞通過微流控液流分選至收集孔板(96或者384孔板的)。流體系統(tǒng)的壓力不到2p
單細(xì)胞分選適合大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)室2022/01/16
單細(xì)胞分選被越來越多的用戶采用,應(yīng)用于各類單細(xì)胞分析實(shí)驗(yàn)中。如果用戶對分選的細(xì)胞要求不是很高,也不需要最終分到單個目的細(xì)胞,我們可以選擇磁珠分選。結(jié)合了磁珠的抗體去標(biāo)記細(xì)胞,讓目的細(xì)胞帶上磁珠,通過磁場將結(jié)合了磁珠與沒結(jié)合磁珠的細(xì)胞分離開來,設(shè)備簡單,只需要一塊磁鐵,不需要大型儀器,得到的細(xì)胞活性好,適合大多數(shù)的實(shí)驗(yàn)室??梢栽谥貞壹?xì)胞的時候加入1%-2%的胎牛血清,大部分流式分選儀的上樣器均沒有冷卻系統(tǒng),要想分選后獲得比較好的細(xì)胞活性,應(yīng)盡量減少細(xì)胞在室溫的暴露時間,該方法長時間分選的時候能較好
單細(xì)胞測序的主要步驟和特點(diǎn)介紹2022/01/16
單細(xì)胞測序的興起,不僅是新概念炒作,而是在相關(guān)領(lǐng)域,長時間由于技術(shù)的瓶頸很多生物學(xué)問題沒有解決,現(xiàn)在突然有一個技術(shù)可以高性價比地解決這些問題,導(dǎo)致這個技術(shù)被大量應(yīng)用。以單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)為例開展探討,單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組主要包括以下四個步驟,其中關(guān)鍵的一點(diǎn)就是如何進(jìn)行單細(xì)胞的捕獲/分選,這是決定單細(xì)胞檢測成本和通量的關(guān)鍵步驟。主要步驟:在細(xì)胞分選的方法里,主要包括特異性分選和非特意性分選兩類方法,兩類方法的關(guān)系有點(diǎn)類似定量(只針對特定目標(biāo)基因進(jìn)行檢測)和轉(zhuǎn)錄組測序。非特異性選擇的方法則通常都是高通量的
單細(xì)胞分選的使用增加實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)性與可靠性2022/01/16
單細(xì)胞分選利用Namocell單細(xì)胞分選儀富集目的細(xì)胞群體縮小研究范圍,對單細(xì)胞群體可進(jìn)一步精細(xì)化解讀。尤其在研究罕見細(xì)胞族群,單細(xì)胞測序前先以流式細(xì)胞分選富集稀有細(xì)胞,可大大增加實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)真實(shí)性與可靠性?,F(xiàn)今已有愈來愈多單細(xì)胞測序研究結(jié)合Namocell單細(xì)胞分選,篩選目的細(xì)胞、過濾死細(xì)胞減少樣本中無效細(xì)胞的比例,提高單細(xì)胞構(gòu)建的成功率以及后續(xù)的數(shù)據(jù)質(zhì)量,讓單細(xì)胞測序更有深度與廣度分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),推動進(jìn)一步研究范疇。單細(xì)胞分選儀是一款全新的細(xì)胞分離設(shè)備,基于激光與物質(zhì)相互作用的原理,實(shí)現(xiàn)對復(fù)雜生物
單克隆篩選方法和途徑介紹2022/01/16
單克隆篩選是將免疫小鼠的脾細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞結(jié)合成雜交瘤細(xì)胞,是新一代細(xì)胞克隆篩選和挑取技術(shù),篩選系統(tǒng)能夠更少時間里,快速高效篩選挑取雜交瘤克隆,建立穩(wěn)定細(xì)胞株,干細(xì)胞及特殊表面標(biāo)記細(xì)胞挑取及昆蟲細(xì)胞篩選挑取。篩選方法有有限稀釋法,半固體培養(yǎng)基挑選法,以及流式細(xì)胞術(shù)挑選法等,這其中有好多需要關(guān)注的點(diǎn),例如挑選細(xì)胞的參數(shù),挑選方法本身對細(xì)胞的損傷等,所以說,一個高效的篩選方法絕對能讓工作效率提高好幾倍。有限稀釋法是目前常用的一種常規(guī)方法,這種方法篩選細(xì)胞的好處就是基本上不會傷害細(xì)胞,整個過程中細(xì)胞所
淺析單細(xì)胞鋪板可能會出現(xiàn)的問題2022/01/16
單細(xì)胞鋪板是克隆篩選的常用方式,其中手動的有限稀釋法更是具備可操作性強(qiáng),成本相對低廉等優(yōu)勢,因此受到廣大用戶的青睞,長期用于克隆篩選的過程中。手動細(xì)胞鋪板可能會出現(xiàn)的問題:1、細(xì)胞計數(shù)前后出現(xiàn)較大誤差?考慮細(xì)胞沉降導(dǎo)致懸液不勻;懸液體積過大或過??;稀釋倍數(shù)太高或太低等原因造成。2、如何克服細(xì)胞懸液不均勻的問題?盡量將細(xì)胞吹打?yàn)閱蝹€,防止抱團(tuán),且用移液槍充分吹打,使其均勻懸浮在培養(yǎng)基中。3、一般加多少細(xì)胞懸液合適?由于加入計數(shù)室的量,過少會導(dǎo)致計數(shù)室內(nèi)出現(xiàn)氣泡,過多則會使得計數(shù)板上的蓋玻片不緊貼計
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組是一項(xiàng)新開發(fā)的技術(shù)2022/01/16
單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組的技術(shù)在目前的科研實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用越來越多。最初的細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組我們都是把一群細(xì)胞或一個器官混合到一起去提取RNA,獲得的是每個細(xì)胞中RNA表達(dá)量的平均值,單細(xì)胞是把每個細(xì)胞單獨(dú)分出來去提取RNA,然后建庫測序,獲得是是單個細(xì)胞的表達(dá)值。在每個細(xì)胞里面基因的表達(dá)具有隨機(jī)性,且存在異質(zhì)性。細(xì)胞群中會存在不同類型的細(xì)胞,尤其是當(dāng)我們對整個組織或者器官進(jìn)行測序時,它們本身就是由不同類型的細(xì)胞組成的,而我們用普通轉(zhuǎn)錄組來測序,相當(dāng)于掩蓋住了這些不同的細(xì)胞類型的差異,展示的是整個組織的平均的狀態(tài),所以說
單細(xì)胞基因組的使用解決了細(xì)胞異質(zhì)性難題2022/01/16
單細(xì)胞基因組通過對單個細(xì)胞進(jìn)行基因組擴(kuò)增和測序,解決了用組織樣本無法獲得不同單個細(xì)胞的異質(zhì)性信息、樣本量太少無法進(jìn)行常規(guī)測序的難題,為科學(xué)研究解析單個細(xì)胞的行為、機(jī)制、與機(jī)體的關(guān)系等提供了新方向,為早期檢測、診斷疾病及疾病的個體化治療提供指導(dǎo)。單細(xì)胞測序可針對性揭示單個細(xì)胞整體水平的基因信息,解決了細(xì)胞異質(zhì)性難題,獲取單克隆細(xì)胞的突變來源及精準(zhǔn)的突變頻率,用來研究疾病以及癌癥發(fā)生發(fā)展機(jī)制等,是在單細(xì)胞水平對全基因組進(jìn)行擴(kuò)增與測序的一項(xiàng)新技術(shù),其原理是將分離的單個細(xì)胞的微量全基因組DNA進(jìn)行擴(kuò)增,
單細(xì)胞分析技術(shù)的應(yīng)用與展望2022/01/16
單細(xì)胞分析技術(shù)的應(yīng)用與展望,小編來帶大家一起了解一下吧!細(xì)胞作為生命體結(jié)構(gòu)和生命活動的基本單元,要了解生命體中一些生命活動規(guī)律,就必須要以細(xì)胞為研究基礎(chǔ)。在對于細(xì)胞內(nèi)組分的分析研究中,由于對此分析的難度比較大,所以往往采取對細(xì)胞群體的分析手段來獲得細(xì)胞中的化學(xué)信息,但是這樣就會帶來很多的局限性和弊端。在生物體內(nèi)的組織具有不均勻性,對于單個細(xì)胞間更是具有較大的差異。在對細(xì)胞群體的統(tǒng)計分析結(jié)果中,掩蓋了單細(xì)胞間的差異,造成了醫(yī)學(xué)、生物學(xué)及其它學(xué)科在深一步研究中受到限制。對于單個細(xì)胞的研究,能夠掌握更
單克隆鋪板的適用特點(diǎn),一起來了解一下吧!2022/01/16
單克隆鋪板的適用特點(diǎn),一起來了解一下吧!單克隆鋪板為篩選克隆提供了全新解決方案,該設(shè)備采用新的微流體技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)快速,,準(zhǔn)確的細(xì)胞鋪板工作。并且分離過程輕柔,不會影響細(xì)胞的后續(xù)生長,能廣泛應(yīng)用于單抗開發(fā)中的CLD環(huán)節(jié),以及單細(xì)胞測序等。適用特點(diǎn):輕柔分選:鞘液壓力小于2psi,提高分選細(xì)胞的活性;靈活分選:樣本濃度范圍10~10^8cell/ml;可挑選百萬分之一含量的極稀少樣本;無菌分選:一次性芯片,保證樣本之間*隔離;儀器體積小巧,可置于超凈臺中;高效分選:96孔板分選不到1min,384孔
單細(xì)胞鋪板的有關(guān)經(jīng)驗(yàn),來一起了解一下吧2022/01/16
單細(xì)胞鋪板大概是我們常見的一個實(shí)驗(yàn)。現(xiàn)在我們常用的方法就是手動的有限稀釋,但有時候鋪得不是很均勻:要么中間密周圍稀,要么周圍密中間禿頂。為了做好手動的有限稀釋單細(xì)胞鋪板,我們需要注意以下事項(xiàng):盡量消化細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液。對于易于消化的細(xì)胞,我一般DPBS清洗一遍,加0.5ml胰酶潤洗一遍(25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板),棄掉胰酶,37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右,鏡下觀察是否細(xì)胞消化較為分散。如果不夠,延長消化時間。96孔板一般以100微升每孔接種,直接用100微升移液器吸取細(xì)胞懸液,沿
單細(xì)胞分離廣泛應(yīng)用于眾多研究領(lǐng)域2022/01/16
單細(xì)胞分離對于很多應(yīng)用場景如,單細(xì)胞測序,單克隆培養(yǎng)等而言是關(guān)鍵的前處理步驟,殊不知單細(xì)胞分離的前處理步驟也有很多需要注意的地方。下面我們就來了解一下,為了提高單細(xì)胞分離的效率和效果,都有哪些小竅門。單細(xì)胞分離用于區(qū)分碎片、死細(xì)胞和活細(xì)胞,然后可以根據(jù)操作流程分離單個活細(xì)胞,為了去除細(xì)胞結(jié)團(tuán),在染色之后可以用40um左右的細(xì)胞篩網(wǎng)過濾細(xì)胞,盡量保證在上樣的時候樣本都是單個細(xì)胞。作為對照,我們采用細(xì)胞密度進(jìn)行手動有限稀釋法鋪板。然后,用顯微鏡在明場下觀察每個孔的細(xì)胞(或者微球)的數(shù)量,同樣的實(shí)驗(yàn)持
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